林向前

（福建省漳州市中醫(yī)院，福建漳州363000）

復(fù)方補(bǔ)筋片制備與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

林向前

（福建省漳州市中醫(yī)院，福建漳州363000）

目的建立復(fù)方補(bǔ)筋片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對(duì)處方中的牡丹皮、當(dāng)歸、木香進(jìn)行定性鑒別，用紫外分光光度法測(cè)定處方中牡丹皮中的丹皮酚含量。結(jié)果薄層色譜檢出牡丹皮、當(dāng)歸、木香的特征斑點(diǎn)；丹皮酚質(zhì)量濃度在5.80～34.80μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系（r=0.997 4），平均加樣回收率為99.86%，RSD為0.07%（n=6）。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)捷準(zhǔn)確、重復(fù)性好、精密度高，可用于復(fù)方補(bǔ)筋片的質(zhì)量檢測(cè)與控制。

復(fù)方補(bǔ)筋片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；紫外分光光度法；丹皮酚；當(dāng)歸；去氫木香內(nèi)酯

復(fù)方補(bǔ)筋片是我院中醫(yī)骨傷科經(jīng)典中藥制劑，在我院臨床使用有近60年歷史。該制劑由黨參、菟絲子、山藥、蛇床子、木香等十幾味中藥材組成，具有補(bǔ)脾益腎、行氣理血、強(qiáng)筋健骨之功效，常用于治療跌打閃筋瘀滯、筋骨疼痛及肝腎虧損之腰膝冷痛、關(guān)節(jié)不利。為控制其質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)復(fù)方補(bǔ)筋片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

2F-2型三用紫外儀；BP211D型電子天平（Sarhorius）；UV-160A型紫外分光光度計(jì)（Shimadzu）；KQ5200DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110708-200505）；當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)：927-9303，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)為1526-200001，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；薄層用硅膠G（青島海洋化工有限公司）；復(fù)方補(bǔ)筋片（本院制劑中心，批號(hào)分別為20120601，20121201，20130601）；水為重蒸餾水；試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1處方與制備

處方：牛膝、肉蓯蓉、菟絲子、木瓜、牡丹皮、當(dāng)歸、黨參、山藥、熟地、蛇床子、丁香、木香。共制1 000片。

制備工藝：取處方各藥炮制合格，稱量備齊。取處方中的蛇床子、牛膝、肉蓯蓉、菟絲子、木瓜加水提取3次，合并3次煎提液，濃縮至稠膏備用（熱測(cè)相對(duì)密度1.15～1.30）。取處方中余下的各藥烘干，粉碎過(guò)100～120目篩備用。藥用淀粉12.5 g與上述稠膏共煮成淀粉漿備用。取上述淀粉漿加入細(xì)粉中攪拌成軟材，擠壓過(guò)20目篩得濕顆粒。取上述濕顆粒置于60～80℃烘箱中，烘干（含水量為4.0%～6.0%）。取干顆粒經(jīng)整粒后加入12.5 g滑石粉及硬脂酸鎂1.25 g攪拌均勻，壓片，每片0.3 g。

2.2一般質(zhì)量控制

性狀：灰棕色片，氣香，味微苦。

檢查：按復(fù)方補(bǔ)筋片片劑項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定，對(duì)3批樣品質(zhì)量差異、崩解時(shí)限、微生物限度［1］進(jìn)行檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.3定性鑒別［1］

牡丹皮：取樣品7片，搗碎成細(xì)粉，放入帶有瓶塞的錐形瓶中，加入20mL乙醚，蓋緊瓶塞，用超聲波提取20min，過(guò)濾，濾液蒸發(fā)干燥，干燥物加入2mL丙酮攪拌使其溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對(duì)照品適量，加丙酮配制成質(zhì)量濃度為2 g/L的溶液，作為對(duì)照品溶液。按擬訂方法制備缺中藥牡丹皮飲片的陰性對(duì)照品溶液。照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法［1］試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯（9∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾（見(jiàn)圖1 A）。

當(dāng)歸［1］：取樣品7片，搗碎成細(xì)粉，放入帶有瓶塞的錐形瓶中，加入20mL正己烷，蓋緊瓶塞，用超聲波提取20min，過(guò)濾，濾液蒸發(fā)干燥，干燥物加入2mL正己烷攪拌使其溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材1 g，按擬訂方法制備成對(duì)照藥材溶液。同法制備缺中藥當(dāng)歸飲片的陰性對(duì)照品溶液。照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄VIB薄層色譜法［1］試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正己烷（1∶9）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾（見(jiàn)圖1 B）。

木香［1］：取樣品7片，搗碎成細(xì)粉，放入帶有瓶塞的錐形瓶中，加入20mL石油醚（60～90℃），蓋緊瓶塞，用超聲波提取20min，過(guò)濾，濾液蒸發(fā)干燥，干燥物加入5mL三氯甲烷攪拌使其溶解，作為供試品溶液。另取去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，加三氯甲烷配制成質(zhì)量濃度為1 g/L的溶液，作為對(duì)照品溶液。按擬訂方法制備缺中藥木香飲片的陰性對(duì)照品溶液。照2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB照薄層色譜法［1］試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷（1∶5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾（見(jiàn)圖1 C）。

圖1　薄層色譜圖

2.4丹皮酚含量測(cè)定

2.4.1溶液制備

取復(fù)方補(bǔ)筋片樣品20片，搗碎成細(xì)粉，稱取約3 g的復(fù)方補(bǔ)筋片細(xì)粉，精密稱定質(zhì)量，放入帶有瓶塞的錐形瓶中，加入50mL甲醇，蓋緊瓶塞，準(zhǔn)確稱定總質(zhì)量，超聲提取30min，再稱定總質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即作為復(fù)方補(bǔ)筋片供試品溶液。同法制得空白對(duì)照品溶液［2］。稱取丹皮酚對(duì)照品適量，減壓干燥，加甲醇制成含丹皮酚0.145 g/L的溶液，作為對(duì)照品貯備液［2］。

2.4.2測(cè)定波長(zhǎng)選擇［3］

精密量取丹皮酚貯備液1mL，置25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至25mL，搖勻，即得丹皮酚對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為5.8μg/mL）［3］。以甲醇為空白，在波長(zhǎng)200～400 nm范圍內(nèi)檢測(cè)對(duì)照品、供試品、空白對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜。結(jié)果顯示，丹皮酚對(duì)照品溶液和供試品溶液于274 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，空白對(duì)照品溶液無(wú)干擾。故選擇274 nm為測(cè)定波長(zhǎng)［3］。

2.4.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品貯備液1，2，3，4，5，6 mL；分別置25 mL具塞錐形瓶中，用甲醇稀釋至25 mL，搖勻，配制成一系列質(zhì)量濃度的溶液，以甲醇溶液為空白對(duì)照品溶液，于274 nm處測(cè)定吸光度（A）［3］。以A為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)（X）作線性回歸，得回歸方程：A=0.066 4C+ 0.024 5（n=6）。丹皮酚質(zhì)量濃度在5.80～34.80μg/mL范圍內(nèi)與A呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為17.40μg/mL丹皮酚對(duì)照品溶液，同法重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果的RSD為0.06%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)［3］：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，16，24 h時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.25%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批供試品6份，按擬訂方法分別制備供試品溶液，于274 nm波長(zhǎng)處平行操作測(cè)定［3］，結(jié)果的RSD=1.05%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)［3］：精密量取對(duì)照品貯備液1，2，3mL各2份，分別裝入50 mL具塞錐形瓶中，然后往錐形瓶中加入10 mL已知質(zhì)量濃度的供試品溶液，用配制對(duì)照品溶液稀釋劑調(diào)整體積至50 mL。依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　丹皮酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4.4樣品含量測(cè)定［3］

精密稱取3批樣品，按擬訂方法制備方法配制試驗(yàn)溶液。結(jié)果批號(hào)為20120601，20121201，20130601的3批樣品中丹皮酚相對(duì)百分含量分別為0.058%，0.051%，0.063%。

3　討論

本試驗(yàn)曾用丙酮和甲醇作為提取溶劑進(jìn)行提取，但丙酮提取的成分較復(fù)雜，且紫外光譜分離效果不理想；甲醇提取的成分較簡(jiǎn)單少，且有效成分提取較全面徹底，紫外光譜基本未受到其他因素影響和干擾。故選用甲醇為提取溶劑。

曾比較回流提取法，超聲提取法，結(jié)果回流提取法較費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，而選用超聲提取法則操作較簡(jiǎn)單、用時(shí)短，故選用超聲提取法。

本試驗(yàn)曾比較了超聲提取20，30，40min，結(jié)果顯示超聲提取30min后，再增加時(shí)間對(duì)提取效果基本無(wú)影響，故選用超聲提取30min。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：597.

［2］洪可俊.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方補(bǔ)筋片中丹皮酚含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2008，17（14）：44.

［3］王瓊王君，林向前.兩種制備工藝六味地黃丸的紫外分析［J］.福建中醫(yī)藥，2008，5（39）：51-52.

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）24-0155-02

林向前（1966-），男，副主任藥師，主要從事中藥制劑生產(chǎn)工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，（電子信箱）xiangqian95@ sina.com。

2015-08-13）