林葉新，李忠海

(1.南寧職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530000；2.中南林業(yè)科技大學(xué)綠色食品研究所，湖南 長沙 410004)

林檎是一種珍稀古植物，可作為南方亞熱帶地區(qū)蘋果樹的嫁接砧木，在我國廣西、湖南等?。▍^(qū)）山區(qū)和少數(shù)民族地區(qū)，群眾有利用林檎葉作茶飲的習(xí)慣[1]。已有實驗證明，林檎葉中含有對人體健身、防癌、抗衰老、健齒等有益的保健成分，且對一些細(xì)菌、霉菌和酵母有抑制作用[2-3]。據(jù)報道[4]，林檎葉中含有野櫻甙（prunasin）、異野櫻甙（isosakuranetin）等黃酮類化合物。而羥基黃酮類一般都有較強(qiáng)的清除自由基活性[5]。有文獻(xiàn)報道[6]，林檎葉經(jīng)乙醇提取再經(jīng)氫氧化鈉溶解和乙酸乙酯溶解，其組分對·OH 自由基有較好的清除作用，兩種組分同樣有較好的脂質(zhì)過氧化抑制作用。我們也對林檎葉防腐保鮮成分的微波提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究[7]，并在此基礎(chǔ)上探討了林檎葉水提物及其不同極性組分的抑菌和清除自由基作用[8-9]。針對林檎葉的以上功能可開發(fā)出應(yīng)用于食品工業(yè)的新型天然防腐保鮮劑。而作為一種食品防腐保鮮劑在實際應(yīng)用中必須具有一定的穩(wěn)定性。本文借助紫外可見分光光度法，分別考察了3月、6 月和9 月采摘的林檎葉防腐保鮮成分對太陽光、酸堿和溫度的耐受能力，以及它們在不同條件下的穩(wěn)定性情況，為林檎葉的防腐保鮮應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

尖嘴林檎鮮葉：于2008 年3 月、6 月、9 月份采摘于廣西柳州融水縣。市售林檎干葉（外購）。

1.2 儀器和試劑

UV-1700紫外分光光度計，UV-PROBE操作系統(tǒng)。氫氧化鈉（AR）、濃鹽酸（AR）。

1.3 方法

1.3.1 原料預(yù)處理

將清洗干凈的尖嘴林檎葉片，在40℃條件下進(jìn)行熱風(fēng)干燥，粉碎，過0.25mm 篩。

1.3.2 林檎葉提取物提取工藝流程

1.3.3 林檎葉提取物穩(wěn)定性的測定

1.3.3.1 穩(wěn)定性的測定原理

將林檎葉提取物配制成一定濃度的水溶液，通過分光光度法測定溶液在不同環(huán)境下的吸光度，以最大吸收峰及在最大吸收波長處的吸光度的變化衡量其穩(wěn)定性，變化越小，穩(wěn)定性越好。

1.3.3.2 穩(wěn)定性測試方法

1）穩(wěn)定性對照物：分別將3 月、6 月和9 月份采摘的林檎葉提取物配制成一定濃度的溶液，置于陰涼干燥處保存，并測定其吸光度，分別標(biāo)記為1-0、2-0 和3-0 號。

2）對光的穩(wěn)定性：將3 月、6 月和9 月份采摘的林檎葉提取物溶液在常溫下日光直射6h，后測定其吸光度，分別標(biāo)記為1-1、2-1 和3-1 號。

3）對酸堿的穩(wěn)定性：在燒杯中用氫氧化鈉溶液和鹽酸調(diào)節(jié)其pH 值，用pH 廣泛試紙檢驗，觀察其顏色變化。發(fā)現(xiàn)，林檎葉提取物溶液在pH=1 7 時，肉眼觀察有無明顯變化。而在pH ≥8 時，稍微攪拌，溶液即由淺黃色變成橙紅色。同時進(jìn)一步考察它們在酸性環(huán)境下的穩(wěn)定性：pH=2、pH=4 和 pH=6 的林檎葉提取物溶液，常溫下靜置于陰涼干燥處，放置2h，分 別 標(biāo) 記 為1-2、2-2、3-2、1-3、2-3、3-3、1-4、2-4 和3-4 號。

4）對溫度的穩(wěn)定性：分別取3 月、6 月和9 月份采摘的林檎葉提取物溶液，在60℃水浴中靜置1h，分別標(biāo)記為1-5、2-5 和3-5 號。分別取3 月、6 月和9月份采摘的林林檎葉提取物溶液，在80℃水浴中靜置1h，分別標(biāo)記為1-6、2-6 和3-6 號。分別取3 月、6 月和9 月份采摘的林檎葉提取物溶液，在100℃水浴中靜置1h，分別標(biāo)記為1-7、2-7 和3-7 號。

在紫外分光光度計上測定以上24 個樣品溶液在200 900 nm 范圍內(nèi)的吸收曲線，用1 7 號與0 號的吸收曲線相對照，得出它們在不同條件下的穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 對照物的吸收曲線

對1-0、2-0 和3-0 號溶液用紫外分光光度計在200 900 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，得到其在該波長范圍內(nèi)的吸收曲線如圖1 所示。林檎葉提取物的水溶液在可見光區(qū)幾乎沒有吸收峰出現(xiàn)，在紫外區(qū)有吸收峰，并在285nm 處出現(xiàn)最大吸收峰。

圖1 林檎葉提取物對照液吸收曲線Fig.1 Ultraviolet absorption of the comparison conditions of the extract from Mallus doumeri leaf

3 月、6 月和9 月份采摘的林檎葉提取物對照液的最大吸收波長及其對應(yīng)的吸光度值的變化情況如表1 所示。

表1 不同季節(jié)的林檎葉提取物對照液紫外吸收情況Table 1 Comparison of ultraviolet absorption of the comparison conditions of the extract from Mallus doumeri leaf in variety seasons

2.2 對光的穩(wěn)定性

試驗得到1-1、2-1 和3-1 號溶液在200 900nm范圍內(nèi)的吸收曲線，并分別與1-0、2-0 和3-0 號吸收曲線相比較。其中3 月林檎葉提取物溶液吸收曲線如圖2 所示。不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液在光照前后的最大吸收波長及其對應(yīng)的吸光度值的變化情況如表2 所示。

圖2 光照前后的3 月林檎葉提取物溶液吸收曲線Fig.2 Absorption curves of solution of the extract from Mallus doumeri Leaf in March before and after illumination

表2 不同季節(jié)的林檎葉提取物光照前后溶液紫外吸收情況Table 2 Comparison of ultraviolet absorption of conditions of t the extract from Mallus doumeri leaf in variety seasons before and after illumination

由圖2 和表2 可知，不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液其吸收曲線在光照前后有較小的變化，其最大吸收波長沒有明顯的變化，但其最大吸收峰處的吸光度值有一定程度的減小，說明該溶液中的物質(zhì)在日光照射下發(fā)生了一定程度的降解，故需要避光保存。

2.3 對酸堿的穩(wěn)定性

通過初步試驗得知，林檎葉提取物水溶液在堿性環(huán)境下（pH ≥8）不穩(wěn)定?，F(xiàn)考察它們在酸性環(huán)境下（pH=2、4、6）的穩(wěn)定性。實驗得到了pH=2、4、6 條件下不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液在200 900nm 波長范圍內(nèi)的吸收曲線，并分別與1-0、2-0 和3-0 號吸收曲線相比較。其中9 月林檎葉提取物溶液吸收曲線如圖3 所示。不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液在調(diào)酸前后的最大吸收波長及其對應(yīng)的吸光度值的變化情況如表3 所示。

圖3 調(diào)酸前后的9 月林檎葉提取物溶液吸收曲線Fig.3 Absorption curves of solution of the extract from Mallus doumeri Leaf in September before and after adjusting to acidic condition

表3 不同季節(jié)的林檎葉提取物調(diào)酸前后溶液紫外吸收情況Table 3 Comparison of ultraviolet absorption of conditions of the extract from Mallus doumeri Leaf in variety seasons before and after adjusting to acidic condition

由圖3 和表3 可知，不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液其吸收曲線在調(diào)酸前后有較小的變化，但其最大吸收波長變化不大。而隨著pH 值的增加，其最大吸收處的吸光度值有一定程度的增加。這說明該水溶液中的物質(zhì)在強(qiáng)酸性環(huán)境下穩(wěn)定性降低。尤其是6 月的林檎葉提取物水溶液，在最大吸收處的吸光度值減小程度最為明顯。而9 月的林檎葉提取物水溶液，在最大吸收處的吸光度值變化最小，穩(wěn)定性較好。

2.4 對溫度的穩(wěn)定性

實驗測定了分別經(jīng)過60℃、80℃和100℃加熱處理后的不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液在200 900nm 波長范圍內(nèi)的吸收曲線，并與加熱前的對照曲線相比較。其中9 月林檎葉提取物溶液吸收曲線如圖4 所示。

圖4 不同溫度加熱處理前后9 月林檎葉提取物溶液吸收曲線Fig. 4 Absorption curves of solution of the extract from Mallus doumeri Leaf in September before and afer being heated at different temperatures

不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液在加熱處理前后的最大吸收波長及其對應(yīng)的吸光度值的變化情況如表4 所示。由圖4 以及表4 可知，不同季節(jié)的林檎葉提取物水溶液，其在加熱處理前后的吸收曲線和最大吸收波長有一定的變化。其中以9 月份采摘的林檎葉提取物耐加熱性最好，在溫度為60℃時，最大吸收波長沒有發(fā)生改變。其他季節(jié)采摘的林檎葉提取物在60℃時，最大吸收波長就已發(fā)生改變，甚至出現(xiàn)新的最大吸收波長。3 種林檎葉提取物在80℃時，最大吸收波長均已發(fā)生更大改變。在100℃時，原來在285nm 附近的最大吸收峰已消失。這說明林檎葉提取物溶液在溫度低于60℃時方能保持較好的穩(wěn)定性。

表4 不同季節(jié)的林檎葉提取物加熱處理前后的紫外吸收情況Table 4 Comparison of ultraviolet absorption of conditions of the antiseptic compositions from Mallus doumeri Leaf in variety seasons before and after being heated

3 結(jié)論

本試驗考察了3 月、6 月和9 月采摘的林檎葉提取物對太陽光照、酸堿和溫度的耐受性，結(jié)果表明，在光照條件下，林檎葉提取物較不穩(wěn)定，最大吸收峰處的吸光度值有所降低，說明提取物已發(fā)生分解，需要避光保存。林檎葉提取物在酸性條件下，其穩(wěn)定性較好。隨著pH 值的減小，穩(wěn)定性也變差；堿性條件下，林檎葉提取物更不穩(wěn)定，原有顏色會發(fā)生改變，因此該提取物不宜應(yīng)用于堿性食品中。在溫度為60℃或更高時，3 月和6 月采摘的林檎葉提取物均不穩(wěn)定，而9 月采摘的林檎葉提取物在60℃時，有較好的穩(wěn)定性；9 月采摘的林檎葉提取物對太陽光照、酸堿和溫度的耐受性比3 月和6 月的好，更適合作為天然防腐保鮮劑的原料進(jìn)行開發(fā)。

[1] 鄧毓芳，劉顯旋，鐘海雁，等.林檎生物學(xué)特性及開發(fā)利用前景的研究[J].中南林學(xué)院學(xué)報，1996，16（4）：24-27.

[2] 鄧毓芳，鐘海雁，李忠海，等.林檎葉保健茶的研制[J].湖南食品發(fā)酵， 1992(1)：22-25.

[3] 鄧芳席，黃祖法.林檎葉抑菌作用的研究[J].食品科學(xué)，1996，17（3）：47-50.

[4] 陳惠芳.植物活性成分詞典(第1 冊)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2001：908-909.

[5] Catelle N, Bernier J, Catteall J P. Antioxidant properties of hvdroxy-flavones[J]. Free Rad Biol Med., 1996(20): 35-43.

[6] 鐘海雁，李忠海，魏元青.林檎葉提取物抗氧化及·OH自由基清除作用的研究[J].北華大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2001，12（6）：522-525.

[7] 林葉新，李忠海.林檎葉防腐保鮮成分微波提取工藝的優(yōu)化研究[J].化工技術(shù)與開發(fā). 2012，41（3）：13-17.

[8] 林葉新，李忠海.林檎葉水提物及其不同極性組分的抑菌和清除自由基作用的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（9）：1264-1269.

[9] 林葉新，李忠海.林檎葉提取物清除自由基作用的研究[J].食品與機(jī)械，2013，29（1）：122-125.