林雪霞

（邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校校辦室，河北邢臺(tái)054000）

高效液相色譜法測(cè)定參膚軟膏中鹽酸小檗堿含量

林雪霞

（邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校校辦室，河北邢臺(tái)054000）

目的建立測(cè)定參膚軟膏中鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為0.1%磷酸（每100mL加入十二烷基磺酸鈉0.02 g）-乙腈（59∶41），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm，柱溫室溫，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果鹽酸小檗堿與其他組分分離良好，進(jìn)樣量在1.184～5.920μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 4，n=5）；平均加樣回收率為99.83%，RSD為0.30%（n=6）。結(jié)論該法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于參膚軟膏中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。

參膚軟膏；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿；含量測(cè)定

參膚軟膏由苦參、地膚子、黃柏、黃精等中藥加工制成，作為外用制劑，具有清潔、保護(hù)皮膚，祛濕收斂，清熱，解毒，殺蟲止癢和較強(qiáng)的殺滅真菌的作用。方中黃柏具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱及消腫祛腐的作用［1］，其主要有效成分小檗堿具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗?jié)兗懊庖咭种谱饔茫?-4］。方中鹽酸小檗堿的含量與制劑的功效有密切的關(guān)系，故以高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其含量，為評(píng)價(jià)參膚軟膏質(zhì)量提供參考。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津公司）：LC-20AT型二元高壓梯度泵，SPD-M20A型紫外檢測(cè)器，LC-solution工作軟件；電子恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；R200D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）。鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110713-200910）；參膚軟膏（河北國(guó)金藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20130801，20130802，20130803）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［5-7］

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.1%磷酸（每100 mL加入十二烷基磺酸鈉0.02 g）-乙腈（59∶41）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。分離度大于1.5，拖尾因子符合要求，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)不低于3 000。

2.2 溶液的制備

稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品7.40mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解，并定容至25 mL，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為0.296 0 g/L的對(duì)照品溶液。稱取參膚軟膏樣品0.10 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入1%鹽酸甲醇25mL，密塞，精密稱定質(zhì)量，于水浴上加熱回流30min，取出，放冷，再精密稱定質(zhì)量，用1%鹽酸甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜濾，得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：按處方及制備工藝制備不含黃柏藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備陰性對(duì)照品溶液。按擬訂色譜條件，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀中測(cè)定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液則無此峰，表明處方中其他藥材不干擾鹽酸小檗堿的含量。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液1，2，3，4，5mL，分別置5 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，質(zhì)量濃度分別為0.059 2，0.118 4，0.177 6，0.236 8，0.296 0 g/L，精密吸取各質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液20μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y= 7.067X×107+1.009×105，r=0.9994（n=5）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在1.184～5.920μg范圍內(nèi)與峰面積線性良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD=0.55%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液20μL，分別于0，1，2，4，8 h時(shí)測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.10%（n=5），說明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一樣品（批號(hào)為20130801），依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果的RSD為0.49%（n=5），表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱定，稱取已知含量同一批樣品（批號(hào)為20130803，質(zhì)量濃度為39.48mg/g）約0.05 g，精密稱定，共6份，分別置圓底燒瓶中。另取對(duì)照品溶液（0.296 0mg/mL），精密量取4，5，6mL各2份，分別加入上述圓底燒瓶中，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品依法制備成試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20130801，20130802，20130803樣品中鹽酸小擘堿平均含量分別為39.69，41.03，40.05mg/g。

3 討論

黃柏為方中要藥，其活性成分鹽酸小檗堿具有多種藥理活性，與本方功能主治一致，因此以鹽酸小檗堿的含量測(cè)定作為本組方的質(zhì)量指標(biāo)是合理的。鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法較多，曾參考文獻(xiàn)［8-13］選擇0.1%磷酸（每100 mL流動(dòng)相溶液加0.1 g十二烷基磺酸鈉）-乙腈（50∶50）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果鹽酸小檗堿色譜峰與相鄰峰未達(dá)到最佳分離，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相，0.1%磷酸（每100 mL磷酸溶液加0.02 g十二烷基磺酸鈉）-乙腈（59∶41），鹽酸小檗堿與其他組分得到較好的分離，且峰形對(duì)稱。

以1%鹽酸甲醇溶液和甲醇為溶劑，以不同的加入量進(jìn)行試驗(yàn)，再以不同的提取方法（超聲波提取和回流提?。┲苽涔┰嚻啡芤?，結(jié)果表明1%鹽酸甲醇溶液25mL回流提取的含量最高，故選擇此方法提取。提取時(shí)間分別考察提取15，30，45，60 min，結(jié)果15 min不能完全提取，30 min和45 min的結(jié)果基本相同，而60 min時(shí)比45 min略低，故選擇提取30 min。HPLC法樣品處理簡(jiǎn)單，回收率高，重復(fù)性好，可以用于測(cè)定方中鹽酸小檗堿的含量。

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Content Determination of Berberine Hydrochloride in Shenfu Ointments by HPLC

Lin Xuexia
（Office of the Principal，Xingtai College of Medicine，Xingtai，Hebei，China 054000）

Objective To establish a content determination method of berberine hydrochloride in Shenfu Ointments.Methods HPLC analysis was carried out on a Kromsal C18chromatographic column（250 mm×4.6 mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid（59∶41）（adding 0.02 g sodium dode-cylsulphate into 100 mL solution）with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 320 nm；the temperature of column was room temperature，and the injection volume was 20μL. Results The linear range was 1.184-5.920μg with good correlation with the peak area（r=0.999 4，n=5）.The average recovery was 99.83%and RSD was 0.30%（n=6）.Conclusion The established method is accurate，specific and reproducible，and suitable for the determination of berberine hydrochloride in Shenfu ointments.

Shenfu Ointments；HPLC；berberine hydrochloride；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0124-02

2015-01-27；

2015-07-07）