唐道生

（河南省商丘市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心，河南商丘476000）

高效液相色譜法測定二甲散結(jié)膠囊中丹參酮ⅡA含量

唐道生

（河南省商丘市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心，河南商丘476000）

目的建立測定二甲散結(jié)膠囊中丹參酮ⅡA含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法采用Shim-pack VP-ODSC18柱（150mm×4.6 mm，5μm），甲醇-水（75∶25）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測波長為270 nm。結(jié)果丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度在2.472～49.44μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r=0.999 7），平均回收率為98.15%，RSD=1.34%（n=6）。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、簡便，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好，適用于二甲散結(jié)膠囊的含量測定。

丹參酮ⅡA；二甲散結(jié)膠囊；高效液相色譜法；含量測定

二甲散結(jié)膠囊（豫藥制字Z04140061）是由丹參、鱉甲、穿山甲、雞內(nèi)金和木香加工制成的醫(yī)院制劑，具有軟堅(jiān)散結(jié)、祛瘀止痛的功效，用于瘕積聚引起的胸脘脹痛、不思飲食諸癥。丹參為其主要成分之一，具有祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩、養(yǎng)血安神的功效，其活性成分為丹參酮ⅡA［1］。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜（HPLC）法測定二甲散結(jié)膠囊中丹參酮ⅡA的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1260型高效液相色譜儀；AUW-210D型電子分析天平；5210DT型超聲處理器。二甲散結(jié)膠囊（民權(quán)縣人民醫(yī)院自制）；丹參酮ⅡA對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110766-200518）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（75∶25）［2］；流速：1.0mL/min；檢測波長：270 nm；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

取丹參酮ⅡA對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密量取對(duì)照品貯備液10mL，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物約2.50 g，研細(xì)，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取缺丹參的其他味藥按處方工藝制成陰性對(duì)照品，按擬訂方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液1，3，5，10，20mL，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件進(jìn)樣10μL，記錄丹參酮ⅡA峰面積值，以峰面積積分值（Y）對(duì)對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=531.27X+ 17.29，r=0.999 7（n=5）。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度在2.472～49.44μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD=0.94%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，3，4，5，6，8 h時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果的RSD=1.02%（n=8），表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6份，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣測定含量。結(jié)果的RSD為0.96%（n=6），表明方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取6份已知含量為0.521 4 mg/g的樣品約1.25 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，另分別精密量取對(duì)照品貯備液2.50，3.00，3.50mL各2份，分別加入上述樣品中，按擬訂方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果見表1。

表1 丹參酮ⅡA加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按擬訂方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣5μL，按外標(biāo)法計(jì)算丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果3批樣品中丹參酮ⅡA的含量分別為0.521 4，0.516 7，0.529 3mg/g。

3 討論

丹參酮ⅡA為丹參中主要的脂溶性成分，參考文獻(xiàn)［3-5］，采用50%乙醇、乙醇、50%甲醇、甲醇超聲和回流提取，結(jié)果丹參酮ⅡA對(duì)熱不穩(wěn)定，回流提取有所損失，以甲醇超聲提取效果最佳，20min內(nèi)可完全提取出來，雜質(zhì)含量較少，故采用甲醇作為提取溶劑。丹參酮ⅡA受光照等因素影響易造成分解，故試驗(yàn)應(yīng)在棕色瓶進(jìn)行測定［6-10］。

該方法所得峰形較好，可獲得較高的理論板數(shù)，拖尾因子、分離度均達(dá)到要求，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果滿意。該方法簡便準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、精密度好、回收率高，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

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Determination of TanshinoneⅡAin Erjiasanjie Capsules by HPLC

Tang Daosheng
（Shangqiu Center for ADR monitoring，Shangqiu，Henan，China 476000）

Objective To establish an HPLC method for the determination of TanshinoneⅡAin Erjiasanjie Capsules.Methods The chromatographic system consisted of Shim-pack VP-ODS C18column（150 mm×4.6 mm，5μm），using methanol-water（75∶25）as mobile phase.The content was detected at a wavelength of 270 nm，the flow rate was 1.0mL/min.Results The TanshinoneⅡAhave a good tincar rolatim in the range of 2.472-49.44μg/mL（r=0.999 7），the average recovery was 98.15%and RSD=1.34%（n=6）. Conclusion The established method is accuracy，sensitive and simple.It can be used for quality control of erjiasanjie capsules.

TanshinoneⅡA；Erjiasanjie Capsules；HPLC；content determination

R285.6；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0119-02

2014-09-30；

2015-04-29）