李爭明張娟鄧中洋盧凡秦文勝

（1.湖北工業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院微藻實驗室　工業(yè)發(fā)酵湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心　河湖生態(tài)修復(fù)及藻類利用湖北省重點實驗室，武漢430068；2. Department of Biology，Lakehead University，Ontario，P7B 5E1，Canada）

纖維素酶產(chǎn)生菌的篩選、鑒定及發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化

李爭明1張娟1鄧中洋1盧凡1秦文勝2

（1.湖北工業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院微藻實驗室工業(yè)發(fā)酵湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心河湖生態(tài)修復(fù)及藻類利用湖北省重點實驗室，武漢430068；2. Department of Biology，Lakehead University，Ontario，P7B 5E1，Canada）

以腐爛木材、腐殖土等材料作為菌源，從中分離出180個菌株，以期得到具有纖維素酶活性的菌株。采用革蘭氏碘液染色法進行定性初篩，獲得了44個纖維素酶產(chǎn)生菌株。將此44個菌株發(fā)酵培養(yǎng)后，使用濾紙酶活性測定法進行定量復(fù)篩，濾紙酶活性最高的是菌株J1-3-1。通過對J1-3-1菌株的16S rRNA 的序列測定分析，將J1-3-1鑒定為鞘氨醇桿菌（Sphingobacterium sp.）。經(jīng)對J1-3-1進行產(chǎn)酶發(fā)酵條件優(yōu)化，分別確立了產(chǎn)生最高濾紙酶（FPase）活性、內(nèi)切葡聚糖酶（CMCase）活性和β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase）活性的發(fā)酵條件。在最優(yōu)發(fā)酵產(chǎn)酶條件下，菌株J1-3-1的濾紙酶、內(nèi)切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的最高酶活性分別為8.76、28.04和7.02 U/mL。

纖維素酶產(chǎn)生菌；篩選；鑒定；發(fā)酵；鞘氨醇桿菌

隨著人口的膨脹和經(jīng)濟的迅猛發(fā)展，全球?qū)δ茉吹男枨罅看蠓嵘?，其中化石燃料占能源消耗?5%以上［1，2］。如何滿足世界對能源的需求、既實現(xiàn)經(jīng)濟的可持續(xù)性發(fā)展又能減輕化石燃料對環(huán)境的負面影響是目前世界各國關(guān)注的焦點。尋求來源豐富、可再生、低碳綠色、經(jīng)濟適用的燃料來代替化石燃料是世界性研究熱點［3-6］。木質(zhì)纖維素是自然界最豐富、可再生的生物質(zhì)資源，主要由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等組成，結(jié)構(gòu)和成分非常復(fù)雜，具有天然的屏障，對生物降解具有一定的抗性［7，8］。采用酶解法降解木質(zhì)纖維素，首先要采用有效的預(yù)處理方法打破纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等高分子間相互交聯(lián)而形成的天然阻礙，然后應(yīng)用纖維素酶將預(yù)處理產(chǎn)物酶解、糖化，進而發(fā)酵得到相應(yīng)的生物燃料和生物產(chǎn)品。提高纖維素酶活性和降低纖維素酶生產(chǎn)成本在生物質(zhì)轉(zhuǎn)化利用中具有重要的價值。

纖維素酶的來源非常廣泛，原生動物、微生物（細菌、真菌、放線菌等）都具有合成、分泌纖維素酶的能力，其中通過微生物發(fā)酵可實現(xiàn)纖維素酶工業(yè)化生產(chǎn)。不同微生物合成的纖維素酶組成上有明顯不同，對纖維素的降解能力也存在顯著差異。放線菌產(chǎn)纖維素酶的能力較弱，目前研究得較少。細菌和真菌有合成、分泌多種纖維素酶、半纖維素酶的能力，已有眾多研究者對其進行廣泛而深入的研究，如里氏木霉（Trichoderma reesei）、康氏木霉（Trichoderma koningii）等纖維素等纖維素酶高產(chǎn)菌株已被應(yīng)用于商業(yè)。針對真菌的研究開展的比較早，真菌所產(chǎn)纖維素酶、半纖維素酶多為胞外酶，種類豐富且容易提取、純化，更方便應(yīng)用于科學(xué)研究或商業(yè)化生產(chǎn)。針對細菌的研究正在成為新的熱點，原因主要有3點：首先是細菌較真菌生長更為迅速；再者細菌所分泌的酶成分較真菌豐富，更易發(fā)揮酶之間的協(xié)同效用，對降解纖維素更為有利；細菌對環(huán)境的適應(yīng)力更強，所分泌的酶也更加穩(wěn)定［9］。本研究試圖通過分離和篩選具有較高纖維素酶活性的細菌、并對這些菌的產(chǎn)酶條件進行優(yōu)化研究，以期發(fā)現(xiàn)具有工業(yè)化應(yīng)用前景的纖維素酶生產(chǎn)菌株。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 取樣 本試驗共計選樣29個，其中優(yōu)良菌株來源為：（1）湖北省武漢市獅子山上腐爛的樹木、樹葉及下方土壤；（2）湖北省武漢市九峰山森林公園腐爛樹木、樹葉。

1.1.2 培養(yǎng)基 （1）富集培養(yǎng)基R2A（g/L）：酵母粉0.5；蛋白胨-D 0.5、酪蛋白氨基酸0.5、葡萄糖0.5、可溶性淀粉0.5、磷酸氫二鉀0.3、硫酸鎂0.5、丙酮酸鈉0.3、瓊脂15.0；（2）纖維素瓊脂培養(yǎng)基（g/L）：纖維素粉5.0、硝酸鈉1.0、磷酸氫二鉀1.0、氯化鉀1.0、硫酸鎂0.5、酵母粉0.5、瓊脂15.0；（3）復(fù)篩培養(yǎng)基（g/L）：CMC-Na 10.0、硫酸銨4.0、酸酸氫二鉀2.0、硫酸鎂0.5、牛肉膏5.0；（4）發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)（g/L）：CMC-Na 10.0、牛肉膏3.0、酵母粉0.5、硫酸銨4.0、磷酸氫二鉀2.0、無水氯化鈣0.3、硫酸鎂0.5、吐溫-80 2 mL/L。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離、純化 每1.0 g樣品用無菌磷酸鉀緩沖溶液（PBS）重懸至20 mL，并渦旋高速振蕩2 min；將每個樣品懸液用無菌PBS以10x梯度稀釋；分別取稀釋液200 μL涂布至R2A平板上；平板在30℃下培養(yǎng)24 h，根據(jù)細菌生長（菌落狀態(tài)）情況可適當(dāng)縮短或延長培養(yǎng)時間；根據(jù)菌落形態(tài)、大小、顏色等，挑取單菌落進行純化，可根據(jù)需要進行多次純化。

1.2.2 初篩 挑取純化的菌株單菌落至裝有5 mL LB培養(yǎng)基的試管中，進行30℃、180 r/min 過夜培養(yǎng)；各取LB菌液10 μL點到纖維素瓊脂培養(yǎng)基中心位置，自然均勻散開，30℃下培養(yǎng)48 h，根據(jù)實際情況可適當(dāng)縮短或延長培養(yǎng)時間；培養(yǎng)完成之后，用碘液（每300 mL ddH2O中含2.0 g KI和1.0 g I2）染色［10］；每個平板用滴管滴加約5 mL碘液，靜置5 min，有色圈出現(xiàn)者可初步定性為具有纖維素酶活性的菌株。

1.2.3 復(fù)篩 將初篩所得到纖維素酶產(chǎn)生菌接種到發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，恒溫30℃、150 r/min振蕩轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)4 d。取所獲得的發(fā)酵液，離心轉(zhuǎn)速5 000 r/min、時間10 min，上清液即為粗酶液。以濾紙為底物測定各個菌株的酶活（FPase）。

1.2.4 菌株J1-3-1的16S rRNA序列分析 在菌株J1-3-1劃線活化后R2A平板上挑取單菌落，選擇細菌通用引物27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）、1492R（5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'）進行PCR，由武漢擎科創(chuàng)新生物技術(shù)有限公司進行序列測定。將測序結(jié)果通過BLAST程序與GenBank中的16S rRNA基因序列進行同源性對比。

1.2.5 發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化

1.2.5.1 氮源添加量 取100 mL無氮培養(yǎng)基置于250 mL三角瓶中，并分別添加0.0%、0.3%、0.6%、0.9%、1.2%和1.5%牛肉膏。

1.2.5.2 初始pH值 在此前試驗的基礎(chǔ)上，取100mL培養(yǎng)基置于250 mL三角瓶中，用1 mol/L HCl或1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0和8.5。

1.2.5.3 吐溫-80添加量 在此前試驗的基礎(chǔ)上，取100 mL培養(yǎng)基置于250 mL三角瓶中，分別添加0.0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%和 1.2%（V/V）Tween-80。

1.2.5.4 接種量 在此前試驗的基礎(chǔ)上，取適量培養(yǎng)基置于250 mL三角瓶中。然后分別加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%和10%（V/V）菌液（OD600=0.6）。

1.2.5.5 正交試驗 對氮源添加量、初始pH、Tween-80添加量、接種量進行4因素3水平正交試驗，確定菌株的最佳發(fā)酵產(chǎn)酶條件，如表1所示。

表1 正交試驗的因素和水平

1.2.6 酶活性測定方法

1.2.6.1 濾紙酶活（FPase） 取粗酶液1.0 mL于比色管中，再放入10 mm×60 mm濾紙條并加入1.0 mL Tris-HCl緩沖液（pH7.0、50 mmol/L），50℃水浴保溫，準確計時60 min后取出［11-13］。

1.2.6.2 內(nèi)切葡聚糖酶（CMCase） 取粗酶液1.0 mL于比色管中，再加入1.0 mL 1%的CMC-Na溶液（pH4.8），50℃水浴保溫，準確計時60 min后取出，迅速冷卻至室溫［12，13］。

1.2.6.3 β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase） 取粗酶液1.0 mL于比色管中，再加入1.0 mL 0.5%水楊苷溶液（pH4.8），50℃水浴保溫，準確計時60 min后取出，迅速冷卻至室溫［14，15］。

酶促反應(yīng)完成之后，加入2 mL DNS試劑，沸水浴5 min之后取出，迅速冷卻至室溫。在540 nm波長處測定吸光度OD值，對照葡萄糖標準曲線計算葡萄糖當(dāng)量。以高溫滅活的粗酶液為對照組。酶活性定義：酶促反應(yīng)每進行1.0 h產(chǎn)生1.0 μmol還原糖所需的酶量定義為1個酶活力單位（U/mL）。

2 結(jié)果

2.1 分離純化

根據(jù)菌落的大小、形狀、光澤、顏色、硬度、透明度等特征，經(jīng)過兩次分離、純化，從富集培養(yǎng)基R2A上挑選得到180個菌株。

2.2 初篩

將上述180個菌株點種于纖維素瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)完成之后，用革蘭氏碘液染色，篩選具有色圈（圖1）的菌株，即具有纖維素酶活性的菌株44株。

圖1 革蘭氏碘液染色結(jié)果（部分）

2.3 復(fù)篩

初篩得到44個纖維素酶產(chǎn)生菌株，對此44個菌株進行產(chǎn)酶發(fā)酵，發(fā)酵期結(jié)束后，提取粗酶液，以濾紙為底物測定各個菌株的酶活（FPase）。復(fù)篩結(jié)果顯示菌株J1-3-1濾紙酶活性最大3.56 U/mL，即其總酶活力最強，選作后續(xù)試驗菌種。

2.4 菌株J1-3-1的16S rRNA序列分析結(jié)果

鑒定菌株J1-3-1種屬，將其16S rRNA基因測序結(jié)果進行BLAST分析，對比查找近似序列。從GenBank核酸數(shù)據(jù)庫中選取部分相似16S rRNA序列，采用Clustalx1.83軟件進行多序列比對，通過Clustal W算法在MAGE6.05軟件中采用Neighbor-Joining構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2），bootstrap值設(shè)定為1 000。由此鑒定J1-3-1為鞘氨醇桿菌（Sphingobacterium sp.）。

圖2 基于16S rDNA基因序列構(gòu)建菌株J1-3-1的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.5 發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化

2.5.1 氮源添加量 氮源添加量在0-0.9%時FPase、CMCase、β-葡萄糖苷酶活性是呈增長的趨勢，之后FPase、CMCase酶活有所下降，而β-葡萄糖苷酶活性則基本持平。

2.5.2 初始pH 初始pH值在5.0-7.0范圍FPase、CMCase、β-葡萄糖苷酶活性是呈上升趨勢的，F(xiàn)Pase、β-葡萄糖苷酶活性均在初始pH為6.5時達到最大值9.41 U/mL、7.57 U/mL，而CMCase則在初始pH為7.0時達到最大值15.08 U/mL。初始pH值超過7.0后，3種酶活性呈下降趨勢。

2.5.3 Tween-80添加量 Tween-80添加量在0-0.8%范圍內(nèi)纖維素酶活性處于上升趨勢，在0.8%時FPase、CMCase、β-葡萄糖苷酶性活達到最大值3.83、12.31和3.95 U/mL，而后則有下降。一定濃度的Tween-80可以促進微生物生長，但濃度高于0.6%時不利于菌株生物量的積累。

2.5.4 接種量 接種量在1.0%-6.0%范圍內(nèi)基本處于上升趨勢，在6.0%時FPase、CMCase、β-葡萄糖苷酶活性達到最大值5.77、11.54和5.48 U/mL，而后略有下降。

2.5.5 正交試驗 選擇氮源添加量、初始pH值、Tween-80添加量和接種量這4個因素，參照、分析單因素試驗的結(jié)果，每個因素設(shè)置3個水平來進行正交試驗，共計9組試驗，結(jié)果如表2所示。

表2 正交試驗及結(jié)果

對試驗結(jié)果進行極差分析，F(xiàn)Pase、CMCase及β-葡萄糖苷酶活性極差分析分別見表3、表4及表5。

表3 FPase極差分析結(jié)果

表4 CMCase極差分析結(jié)果

表5 β-葡萄糖苷酶活性極差分析結(jié)果

由極差分析結(jié)果可知，對FPase影響最大的因素是Tween-80添加量，最優(yōu)組合是A1B2C2D2，此組合存在于正交表中；對CMCase影響最大的因素是Tween-80添加量，最優(yōu)組合是A1B3C3D2；對β-葡萄糖苷酶活性影響最大的因素是初始pH，最優(yōu)組合是A1B3C3D2。組合A1B3C3D2并未在正交表中出現(xiàn)，需要將此組合與正交表中CMCase和β-葡萄糖苷酶活性最大的組合比較，如表6所示。組合A1B3C3D2發(fā)酵結(jié)果略優(yōu)于通過正交設(shè)計得到最優(yōu)組合A1B3C3D3，由此可以將組合A1B3C3D2確定為CMCase和β-葡萄糖苷酶的最優(yōu)組合。對于FPase，最優(yōu)發(fā)酵條件則為A1B2C2D2：牛肉膏添加量0.6%、Tween-80添加量0.6%、初始pH值6.5、接種量6%；對于CMCase和β-葡萄糖苷酶，最優(yōu)發(fā)酵條件則為A1B3C3D2：肉膏添加量0.6%、Tween-80添加量0.8%、初始pH值7.5、接種量6%。

表6 組合A1B3C3D3和A1B3C3D2的結(jié)果比較

3 討論

3.1 目的菌株篩選

濾紙是純纖維素材料，其聚合度和結(jié)晶度都比較適中，降解濾紙的濾紙酶（FPase）活性所代表的是纖維素酶的總活力，體現(xiàn)的是纖維素酶系內(nèi)的協(xié)同能力。本實驗篩選到的濾紙酶活性最大的菌株為J1-3-1（3.56 U/mL），對其進行16S rRNA基因序列分析，結(jié)果表明，菌株J1-3-1與Sphingobacterium multivorum（AB6808044.1）親緣關(guān)系最近，二者遺傳距離僅為0.001，相似性達到99%，有文獻證明相似性超過97%，即可認定為屬內(nèi)同種［16，17］。因此鑒定菌株J1-3-1為多食鞘氨醇桿菌（Sphingobacterium multivorum）。多食鞘氨醇桿菌是對石油有高效降解活性的細菌［18，19］，并且還有轉(zhuǎn)化井岡霉素為井岡霉胺、合成巖藻多糖降解酶和瓊膠酶、降解甾體雌激素等多種性能［20，21］，但是尚未發(fā)現(xiàn)該菌種具有降解纖維素功能的報道，而本研究首次揭示此菌株具有纖維素酶合成能力。

Maki等［11］從紙漿污泥等樣品中篩選獲類芽孢桿菌屬Paenibacillus E2和Paenibacillus E4，適當(dāng)條件下培養(yǎng)48 h，50℃、pH7.0（緩沖液50 mmol/L Tris-HCl）、保溫2 h后，濾紙酶活性用葡萄糖當(dāng)量表征可分別達（101.45±33.2）U/mL和（130.45±78.5）U/mL；包衎等［15］從水質(zhì)凈化廠的活性淤泥、環(huán)保公司堆肥等樣品中篩選出纖維素分解菌，濾紙酶活為1.53 U/mL；Ariffin等［22］從油棕櫚果殼堆肥中篩選獲得短小芽孢桿菌Bacillus pumilus EB3，適當(dāng)條件下培養(yǎng)24 h，40℃、pH4.8（50 mmol/L 檸檬酸緩沖液）保溫1 h，濾紙酶活性為0.66 U/mL。與上述已報道的各類菌株相比，菌株J1-3-1產(chǎn)酶能力并不突出，需要對菌株發(fā)酵培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，以期提高菌株的產(chǎn)酶能力。但菌株J1-3-1所產(chǎn)纖維素酶是中性酶，中性纖維素酶在紡織、食品、制藥和造紙等領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景，尤其是在紡織領(lǐng)域。相比于酸性纖維素酶，中性纖維素酶有適應(yīng)pH、溫度值范圍廣和穩(wěn)定性好等優(yōu)點，菌株J1-3-1具有深入研究的價值。

3.2 產(chǎn)酶條件優(yōu)化

發(fā)酵是一種非常復(fù)雜的生化反應(yīng)過程，其生產(chǎn)工藝受諸多因素的影響，如培養(yǎng)基組成、原料的品質(zhì)、菌種菌量、操作條件等。任何發(fā)酵工藝的確定，都需要對發(fā)酵階段進行深入研究，考察菌種的代謝規(guī)律，對發(fā)酵工藝條件進行優(yōu)化。

培養(yǎng)基的碳氮比、pH值、表面活性劑及菌種接菌量直接影響了發(fā)酵效率和微生物的產(chǎn)酶能力。培養(yǎng)基的pH值，可以引起細胞膜表面電荷變化從而影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，還可以影響代謝過程中酶的活性。表面活性劑可以提高內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶的酶活性，并且可以加強復(fù)合酶系中各種酶的協(xié)同作用，如添加適當(dāng)濃度的鼠李糖脂、皂莢皂素、Tween-80等表面活性劑均可以提高纖維素酶酶活。Tween-80作為表面活性劑可以提高細胞膜的通透性，一方面利于細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，支持微生物的生長；另一方面減少酶在細胞膜上的附著，加強胞外酶的分泌，試驗結(jié)果也充分證明了這一點。接種量的大小影響生產(chǎn)菌株在發(fā)酵體系內(nèi)的生長、代謝、繁殖的速度。選定較大接種量可以縮短發(fā)酵體系內(nèi)菌體密度達到高峰的時間，利于產(chǎn)物的形成及發(fā)酵基質(zhì)的利用，并減小被雜菌污染的幾率。接種量過大則會導(dǎo)致發(fā)酵體系溶氧不足，不利于產(chǎn)物合成，菌體易衰老；接種量過小會延長發(fā)酵周期，影響產(chǎn)率。

正交試驗是高效、快捷、經(jīng)濟的試驗方法，從全面實驗中挑選出具有代表性的試驗，可以綜合考慮各因素對試驗的影響，突出反映菌株的代謝規(guī)律以及影響產(chǎn)物合成的因素。優(yōu)化之后FPase、CMCase、β-葡萄糖苷酶酶活分別為8.76、28.04和7.02 U/mL，是優(yōu)化之前的1.31倍、3.52倍和1.97倍。通過發(fā)酵條件的優(yōu)化可以確立發(fā)酵產(chǎn)酶的最佳條件，從而大幅提升菌株的產(chǎn)酶效率，為發(fā)酵罐發(fā)酵提供依據(jù)。

4 結(jié)論

通過微生物富集、分離、純化，并采用革蘭氏碘液染色法進行定性初篩，及濾紙酶活性測定法進行定量復(fù)篩，獲得產(chǎn)酶性能較好的菌株J1-3-1。對J1-3-1菌株的16S rRNA 的序列測定分析，將其鑒定為鞘氨醇桿菌。進行產(chǎn)酶發(fā)酵條件優(yōu)化，分別確立了菌株J1-3-1產(chǎn)生最高濾紙酶活性、內(nèi)切葡聚糖酶活性和β-葡萄糖苷酶活性的發(fā)酵條件。對于FPase，最優(yōu)發(fā)酵條件為：氮源添加量0.6%、Tween-80添加量0.6%、初始pH值6.5、接種量6%；對于CMCase和β-葡萄糖苷酶，最優(yōu)發(fā)酵條件為：氮源添加量0.6%、Tween-80添加量0.8%、初始pH值7.5、接種量6%。在最優(yōu)發(fā)酵產(chǎn)酶條件下，菌株J1-3-1的濾紙酶、內(nèi)切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的最高酶活性分別為8.76、28.04和7.02 U/mL。fuels for internal combustion engines［J］. Progress in Energy and Combustion Science， 2007， 33：233-271.

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Screening，Identification and Optimization of Cellulaseproducing Strains

Li Zhengming1Zhang Juan1Deng Zhongyang1Lu Fan1Qin Wensheng2
（1. Microalgae Laboratory，School of Resource & Environmental Engineering，Hubei Provincial Cooperative Innovation Center of Industrial Fermentation，Hubei Provincial Key Laboratory of Lake Ecological Restoration & Algae Utilization，Hubei University of Technology，Wuhan 430068；2. Department of Biology，Lakehead University，Ontario，P7B 5E1，Canada）

To isolate efficient cellulase-producing bacteria， 180 bacterial isolated from rotten wood， humus， and other soil samples， and 44 were screened from them and confirmed as cellulase-producing bacteria by Gram’s iodine solution staining. In the subsequent secondary screening tests， those 44 isolates were cultured in fermentation media and their total cellulase activities（FPase）were measured and compared. The strain J1-3-1， with the highest FPase activity， was identified as Sphingobacterium sp. by 16S rRNA sequence analysis. The optimal fermentation conditions for enzymes production of J1-3-1 were determined. Under the optimal conditions， its activities of FPase， CMCase， and β-glucosidase reached 8.76， 28.04和 7.02 U/mL， respectively. The results demonstrated that J1-3-1 was a promising candidate for potential industrial production of cellulase.

cellulase-producing bacteria；screening；identification；fermentation；Sphingobacterium sp.

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.023

2014-09-10

湖北工業(yè)大學(xué)·楚天學(xué)者啟動基金項目

李爭明，男，碩士研究生，研究方向：生物化工；E-mail：lizm1987@163.com

秦文勝，男，博士，研究方向：生物能源，E-mail：wqin@Lakeheadu.ca；盧凡，男，博士，研究方向：微藻生物技術(shù)，E-mail：lulab99@gmail.com