趙娟花 裴杰 梁春年 郭憲 吳曉云 張良斌 閻萍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所　甘肅省牦牛繁育工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州　730050）

牦牛CAV-3基因的克隆及其在牦牛和黃牛組織的表達(dá)分析

趙娟花 裴杰 梁春年 郭憲 吳曉云 張良斌 閻萍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所甘肅省牦牛繁育工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州730050）

旨在對(duì)牦牛CAV-3基因進(jìn)行克隆、生物信息學(xué)分析，并對(duì)其在牦牛組織中的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行初步研究。根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的黃牛CAV-3基因的mRNA序列并設(shè)計(jì)特異性引物，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)克隆牦牛CAV-3基因的編碼區(qū)。運(yùn)用生物信息學(xué)方法，分析并預(yù)測(cè)牦牛Caveolin-3蛋白的理化性質(zhì)、疏水性、蛋白結(jié)構(gòu)域以及蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)。通過(guò)半定量PCR技術(shù)檢測(cè)CAV-3基因mRNA在牦牛和黃牛各組織中的表達(dá)；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)牦牛和黃牛肌肉組織中CAV-3基因 mRNA表達(dá)水平。牦牛CAV-3的編碼區(qū)全長(zhǎng)631 bp，共編碼151個(gè)氨基酸。CAV-3在牦牛肺、脾臟、腎臟、肝臟、卵巢組織中均不表達(dá)，僅在心臟和肌肉組織中表達(dá)，且在心臟組織的表達(dá)水平高于肌肉組織，CAV-3基因在黃牛各組織中的表達(dá)結(jié)果與牦牛一致。CAV-3基因在牦牛肌肉中的表達(dá)低于黃牛肌肉組織，但差異不顯著（P＞0.05）。

牦牛；Caveolin-3；克??；表達(dá)分析

小窩（caveolae），又稱(chēng)胞膜窖，是細(xì)胞膜上直徑為50-100 nm左右的囊泡凹陷結(jié)構(gòu)，廣泛存在于多種類(lèi)型細(xì)胞膜上。在上皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肌肉細(xì)胞的質(zhì)膜中含量較為豐富［1，2］。小窩蛋白（Caveolin），又稱(chēng)窖蛋白，是構(gòu)成小窩基本組分的一類(lèi)標(biāo)志蛋白［3，4］，其分子量在21-24 kD之間。目前，已知有4種窖蛋白Caveolin-1（α，β兩種亞型）、Caveolin-2和Caveolin-3分別由哺乳動(dòng)物的CAV-1，CAV-2，CAV-3基因編碼組成［5］。Caveolin-1可單獨(dú)或與Caveolin-2協(xié)作形成穩(wěn)定的寡聚體復(fù)合物，并廣泛存在于內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等細(xì)胞中［6，7］。據(jù)報(bào)道，Caveolin-3是整合在 caveola上的肌細(xì)胞特異性蛋白，且可能與肌肉的發(fā)生以及功能的維持有關(guān)［8］。該蛋白廣泛存在于多種肌細(xì)胞中，如心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等［9］。因此，探究CAV-3基因的功能及在肌肉發(fā)生過(guò)程中的作用，對(duì)更好地開(kāi)展有關(guān)牦牛肌肉性狀的育種工作具有一定的參考價(jià)值。有報(bào)道稱(chēng)，在人類(lèi)骨骼肌纖維中慢肌的CAV-3表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于快肌中CAV-3的表達(dá)量，這表明CAV-3在調(diào)控肌纖維的發(fā)育類(lèi)型和生長(zhǎng)發(fā)育上有重要作用［10，11］。目前，對(duì)CAV-3基因的研究?jī)H限于人和小鼠上，尚無(wú)該基因在牦牛和黃牛上的研究報(bào)道。本研究以甘南牦牛為研究對(duì)象，對(duì)牦牛CAV-3基因編碼區(qū)序列進(jìn)行克隆，對(duì)通過(guò)CAV-3基因編碼區(qū)推斷獲得的CAV-3蛋白序列進(jìn)行蛋白特征分析，比較該基因的mRNA在牦牛和黃牛肌肉組織中的表達(dá)差異，旨在為研究該基因在肌肉發(fā)生和肌肉生理過(guò)程中的可能作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用3歲母牦牛選自甘南藏族自治州，3歲母黃牛選自臨夏回族自治州。待牛屠宰后，采集牛的背最長(zhǎng)肌、腎臟、肝臟、心臟、卵巢、脾臟和肺組織，保存于液氮中迅速帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 主要試劑 RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量試劑盒、pMD19-T克隆載體和DNA Marker購(gòu)自大連寶生物（TaKaRa）公司；瓊脂糖凝膠 DNA回收試劑盒、Taq酶Mix、質(zhì)粒提取試劑盒、E.coli DH5α、X-gal、IPTG購(gòu)自北京天根公司；瓊脂粉、胰蛋白胨和酵母浸出粉購(gòu)自 OXOID 公司。

1.1.3 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù) GenBank中黃牛CAV-3基因中的mRNA序列（登錄號(hào)：NM_001046558）和GAPDH mRNA序列（登錄號(hào)：NM_001034034），利用 Premier 5.0 分別設(shè)計(jì)牦牛CAV-3 基因全編碼區(qū)的擴(kuò)增引物、定量 PCR引物及內(nèi)參引物，并由大連寶生物公司合成。引物序列、退火溫度及PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度，見(jiàn)表1。

表1 引物序列及其擴(kuò)增特性

1.2 方法

1.2.1 RNA的提取 以采集的牦牛和黃牛的背最長(zhǎng)肌及其它組織為材料，根據(jù)RNA提取試劑盒的使用說(shuō)明提取RNA，使用分光光度計(jì)和1.2%瓊脂糖凝膠電泳分別檢測(cè)所獲RNA的純度和完整性，并置于-80℃保存。

1.2.2 RT-PCR 按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以所獲RNA為模板合成所需cDNA。在PCR管依次加入5×g DNA Eraser Buffer 2 μL，gDNA Eraser 1 μL，RNase Free H2O 6 μL，總RNA 1 μL，混勻后在42℃ 2 min，85℃ 5 s條件下反應(yīng)。待上述反應(yīng)結(jié)束后，在反應(yīng)液中依次加入5×PrimerSript Buffer 4 μL，RNase Free H2O 4 μL，RT Primer Mix 1 μL，PrimerSript RT Enzyme Mix 1 μL，混合后42℃25 min，85℃ 5 s條件下繼續(xù)反應(yīng)，并最終以此反應(yīng)液為模板進(jìn)行定量試驗(yàn)。

1.2.3 RT-PCR擴(kuò)增牦牛CAV-3基因的CDS區(qū) PCR反 應(yīng) 體 系：2×Taq PCR Master Mix 25 μL，RNase Free H2O 19 μL，10 mmol/L引物F、R各2 μL，cDNA 2 μL。PCR 反應(yīng)條件：Lid 105℃；95℃預(yù)變性4 min；95℃變性30 s，57.6℃退火30 s，72℃延伸40 s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min，4℃終止反應(yīng)。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。用DNA凝膠回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物。

1.2.4 牦牛CAV-3基因CDS區(qū)的克隆 將回收的PCR產(chǎn)物與pMD19-T克隆載體連接，在16℃過(guò)夜，構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài) E.coli DH5α菌中，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物于37℃、100 r/min培養(yǎng)90 min，均勻涂在含有Amp、X-gal、IPTG 的LB固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12 h。挑取白色陽(yáng)性菌落，于含有Amp的LB 液體培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)。PCR擴(kuò)增鑒定后，將陽(yáng)性菌落送至上海生工測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.5 牦牛CAV-3基因與Caveolin-3蛋白的生物信息學(xué)分析 使用GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的BLAST在線(xiàn)檢索工具對(duì)所獲序列進(jìn)行同源序列比對(duì)；用ORF Finder在線(xiàn)程序預(yù)測(cè)開(kāi)放閱讀框；運(yùn)用ExPASy網(wǎng)站的Protparam和ProtScale在線(xiàn)工具預(yù)測(cè)分析牦牛Caveolin-3的基本理化性質(zhì)和疏水性；采用SignalP3.0、TMHMM Server v.2.0在線(xiàn)分析程序預(yù)測(cè)Caveolin-3的信號(hào)肽位點(diǎn)和跨膜區(qū)域；采用Interpro在線(xiàn)分析軟件預(yù)測(cè)的Caveolin-3的蛋白結(jié)構(gòu)域，并用SABLE在線(xiàn)預(yù)測(cè)網(wǎng)站預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.2.6 半定量 PCR檢測(cè)牦牛和黃牛CAV-3基因的表達(dá) 定量 PCR反應(yīng)體系：2×Taq Mix 45 μL，10 mmol/L的上、下游引物各4.5 μL，ddH2O 27 μL，充分混勻后分裝到8個(gè)PCR 管中各9 μL，再在各管中分別加入1 μL各組織cDNA模板，充分混勻。反應(yīng)條件：95.5℃ 5 min；95℃ 30 s，57.6℃ 30 s，72℃20 s，30個(gè)循環(huán)；72℃ 5 min。PCR產(chǎn)物由 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)牦牛CAV-3基因表達(dá)量 熒光定量PCR反應(yīng)體系：2×SYBR?Premix Ex TaqTM5 μL，10 mmol/L的上、下游引物各 0.2 μL，ddH2O 4 μL，cDNA 模板0.6 μL，充分混勻。反應(yīng)條件：95℃ 30 s；95℃ 5 s，57℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。試驗(yàn)以GAPDH為內(nèi)參，每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，運(yùn)用2-△△ct的方法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 牦牛CAV-3基因的PCR擴(kuò)增

擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.2% 瓊脂糖凝膠電泳分析，可見(jiàn)一條介于500-700 bp之間的DNA片段，與預(yù)期DNA片段（631 bp）大小一致（圖1）。

圖1 CAV-3基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳

2.2 牦牛CAV-3基因的序列測(cè)定及分析

鑒定的陽(yáng)性重組質(zhì)粒送至上海生工測(cè)序公司測(cè)序，通過(guò)同源序列比對(duì)證明構(gòu)建的重組載體中含有CAV-3基因的全長(zhǎng)編碼區(qū)序列。對(duì)克隆的CAV-3基因序列進(jìn)行開(kāi)放性閱讀框分析，得知CAV-3基因含有一個(gè)456 bp的開(kāi)放性閱讀框，編碼151個(gè)氨基酸，起始密為ATG，終止密碼子為T(mén)GA（圖2）。

圖2 牦牛CAV-3基因和編碼蛋白的序列

2.3 牦牛Caveolin-3蛋白的生物信息學(xué)分析

2.3.1 牦牛Caveolin-3蛋白的理化性質(zhì)和疏水性/親水性預(yù)測(cè)和分析 通過(guò)Protparam工具預(yù)測(cè)牦牛Caveolin-3蛋白的基本理化性質(zhì)，結(jié)果顯示該蛋白的分子量為17.2903 kD，理論等電點(diǎn)（pI）為5.75。分子式是C798H1230N192O214S11，總原子數(shù)2 445個(gè)。含有帶負(fù)電荷的殘基（Asp+G1u）16個(gè)，帶正電荷的殘基（Arg + Lys）13個(gè)。該蛋白由常見(jiàn)的20種基本氨基酸組成，其中含量最高的分別是Ile、Leu和Val（均為9.9%），含量最低的分別是Met和Gin（均為2.0%）。運(yùn)用ProtScale工具分析牦牛Caveolin-3蛋白的親水性和疏水性，根據(jù)氨基酸的分值與親水性成反比的規(guī)律可知：牦牛Caveolin-3蛋白多肽鏈第30位Lys和第31位Asn具有最低的分值-2.556和最強(qiáng)的親水性；第83位Pro具有最高的分值2.556和最強(qiáng)的疏水性；且整個(gè)多肽鏈表現(xiàn)為親水性（圖3）。

圖3 牦牛Caveolin-3蛋白疏水性分析

2.3.2 牦牛Caveolin-3 蛋白信號(hào)肽、跨膜區(qū)分析和結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè) 使用SignalP3.0預(yù)測(cè)信號(hào)肽的分泌途徑和切割位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有信號(hào)肽。用TMHMM2.0分析跨膜結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)此編碼蛋白第1-78個(gè)氨基酸位于膜外，第79-101個(gè)氨基酸螺旋跨膜，而第102-151個(gè)氨基酸位于膜外。結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)中能折疊成特定三維結(jié)構(gòu)的一段區(qū)域，是蛋白序列結(jié)構(gòu)和進(jìn)化單元，具有一定生物學(xué)功能。用Interpro在線(xiàn)工具對(duì)牦牛Caveolin-3蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)，結(jié)果（圖4）顯示該序列在第79-101位氨基酸之間具有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。

圖4 牦牛CAV-3基因編碼蛋白的結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

2.3.3 牦牛Caveolin-3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性和理化性質(zhì)取決于空間結(jié)構(gòu)，因此預(yù)測(cè)與分析蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)了解其空間結(jié)構(gòu)有重要意義。用SABLE服務(wù)器預(yù)測(cè)其Caveolin-3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明該蛋白由67.55% α螺旋、13.91%延伸鏈和17.88%無(wú)規(guī)則卷曲組成（圖5）?？赏茢酂o(wú)規(guī)則卷曲、α螺旋和延伸鏈?zhǔn)顷笈aveolin-3蛋白主要的二級(jí)結(jié)構(gòu)元件。

圖5 牦牛Caveolin-3蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

2.4 牦牛、黃牛各組織器官中CAV-3基因mRNA表

達(dá)水平分析

通過(guò)半定量PCR檢測(cè)分析，在牦牛肝臟、脾臟、肺、腎臟、卵巢組織中均無(wú)CAV-3基因mRNA表達(dá)，僅在心臟和肌肉組織中有表達(dá)，且心臟組織的表達(dá)高于肌肉組織（圖6）。CAV-3基因mRNA在黃牛各組織中的表達(dá)情況與其在牦牛組織表達(dá)結(jié)果一致（圖7）。

圖6 半定量 PCR分析CAV-3基因mRNA 在牦牛7個(gè)組織器官中的表達(dá)

2.5 CAV-3基因在牦牛和黃牛肌肉中的mRNA表達(dá)分析

通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)牦牛和黃牛肌肉組織中CAV-3基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。定量結(jié)果用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果（圖8）發(fā)現(xiàn)牦?；騧RNA表達(dá)水平低于黃牛，但差異不顯著（P＞0.05）。

圖7 半定量 PCR分析CAV-3基因mRNA 在黃牛7個(gè)組織器官中的表達(dá)

圖8 CAV-3 mRNA在牦牛和黃牛肌肉組織中的表達(dá)水平

3 討論

長(zhǎng)久以來(lái)窖蛋白（Caveolin）被認(rèn)為是組成胞膜窖的基本蛋白結(jié)構(gòu)單元，但是在近期的研究中發(fā)現(xiàn)Caveolin-3也是肌纖維橫列小管的重要組成部分，特別在發(fā)育的肌肉中Caveolin-3扮演著非常重要的角色［12］。本研究首次克隆得到了牦牛CAV-3基因的編碼區(qū)全長(zhǎng)631 bp，共編碼151個(gè)氨基酸?？缒び蛞话闶怯?0個(gè)左右的疏水性氨基酸殘基組成，是膜內(nèi)蛋白與膜脂結(jié)合的主要部位。通過(guò)對(duì)跨膜域的預(yù)測(cè)與分析，對(duì)該蛋白質(zhì)的功能、結(jié)構(gòu)和分布具有了一定的認(rèn)識(shí)和了解。本試驗(yàn)通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)Caveolin-3蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果表明牦牛Caveolin-3蛋白在第79-101位氨基酸具有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。信號(hào)肽一般由15-30個(gè)氨基酸組成，是疏水性肽片段，位于新合成肽鏈的N末端，在蛋白質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高爾基體質(zhì)膜的分泌途徑中發(fā)揮重要作用［13］。一般可以通過(guò)分析蛋白質(zhì)N端有無(wú)存在信號(hào)肽，初步判斷該蛋白是否為分泌蛋白。本研究表明，牦牛Caveolin-3蛋白不存在信號(hào)肽，不屬于分泌蛋白。

早期的研究發(fā)現(xiàn)，Caveolin-3僅存在于各種肌細(xì)胞中，如心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等。余方等［13］在對(duì)不同發(fā)育階段的雞的研究中發(fā)現(xiàn)，CAV-3 mRNA僅在橫紋肌特異性表達(dá)而在其它組織器官組織中均未見(jiàn)表達(dá)，同時(shí)在1-10周的不同發(fā)育階段中未表現(xiàn)出明顯的變化，他們認(rèn)為，CAV-3基因在雞的小窩膜結(jié)構(gòu)形成、肌肉中T-小管系統(tǒng)的發(fā)生和肌肉分化等過(guò)程中可能起著非常重要的作用。Song等［14］對(duì)小鼠的研究發(fā)現(xiàn)CAV-3基因特異表達(dá)于心肌、骨骼肌以及血管平滑肌細(xì)胞中。張營(yíng)等［15］對(duì)鴨CAV-3基因mRNA在不同組織中表達(dá)情況進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，CAV-3 mRNA在心肌中表達(dá)量最高，在胸肌、腿肌、腎臟中表達(dá)量相對(duì)較高，在其他組織中痕量表達(dá)。本試驗(yàn)利用半定量RCR技術(shù)對(duì)牦牛CAV-3基因mRNA在不同組織中表達(dá)情況進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，CAV-3 mRNA在心臟中表達(dá)量最高，肌肉組織中表達(dá)量次之，其他組織未見(jiàn)表達(dá)，這與余方等的研究結(jié)果一致。但與張營(yíng)等對(duì)鴨各組織中CAV-3基因的表達(dá)研究略有差異，這可能與牦牛的特殊生理構(gòu)造有關(guān)。

CAV-3對(duì)哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)的肌肉生理功能的維持都起著非常重要的作用。Galbiati等［16］發(fā)現(xiàn)敲除CAV-3的小鼠會(huì)出現(xiàn)肌纖維中的胞膜窖消失現(xiàn)象，同時(shí)發(fā)生骨骼肌細(xì)胞病理性改變。Galbiati等還發(fā)現(xiàn)正常骨骼肌細(xì)胞中的肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白-糖蛋白的復(fù)合體被定位在胞膜窖中，當(dāng)Caveolin-3缺失后這種定位被打亂，從而并發(fā)許多相關(guān)疾病。Caveolin-3的缺陷使得肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白-糖蛋白的復(fù)合體異常定位，從而引起了人類(lèi)的肢帶型進(jìn)行性肌肉萎縮癥［1］，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)T-小管的異常排列［17，18］，這些缺失后的表型說(shuō)明了Caveolin-3在肌肉組織發(fā)育過(guò)程中的重要作用。楊淵等［19］通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了脂肪型的榮昌豬和瘦肉型長(zhǎng)白豬的脂肪和肌肉組織中CAV-3基因在7月齡的表達(dá)變化，并分析品種間、不同性別間和不同組織間基因表達(dá)的差異。結(jié)果表明，長(zhǎng)白母豬板油中CAV-3基因表達(dá)量極顯著高于榮昌母豬板油中CAV-3基因表達(dá)量（P＜0.01）［20］。本研究利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)CAV-3 mRNA在牦牛和黃牛背最長(zhǎng)肌組織的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CAV-3基因在牦牛肌肉組織表達(dá)低于黃牛肌肉組織，但是差異不顯著，這也驗(yàn)證了CAV-3在骨骼肌中的表達(dá)。本研究克隆了牦牛CAV-3基因的編碼區(qū)序列并分析了其組織表達(dá)規(guī)律，為進(jìn)一步研究其功能及在肌肉發(fā)生和肌肉生理過(guò)程中的作用提供參考。

4 結(jié)論

牦牛CAV-3的編碼區(qū)的序列長(zhǎng)度為631 bp，編碼151個(gè)氨基酸，不含信號(hào)肽，其蛋白在第79-101位氨基酸之間具有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。CAV-3 mRNA在心臟和肌肉組織中能夠特異性表達(dá)，且CAV-3 基因mRNA在牦牛肌肉組織的表達(dá)水平低于黃牛肌肉組織的表達(dá)水平。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Cloning of CAV-3 in Yak and Analysis Its Expression in Yak and Cattle

Zhao Juanhua Pei Jie Liang Chunnian Guo Xian Wu Xiaoyun Zhang Liangbin Yan Ping
（Key Laboratory of Yak Breeding Engineering，Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou730050）

This study aims to clone， analyze bioinformatics and determine the expression pattern of CAV-3 gene in yak. A pair of special primers were designed according to released mRNA sequence of bovine CAV-3 in GenBank. A coding region sequence of yak CAV-3 was amplified by RT-PCR； the general physical and chemical properties， hydrophobicity， protein domains and protein secondary structures were systemically analyzed and predicted by bioinformatics techniques. The expression levels of CAV-3 mRNA in some organs of yak and cattle were detected by semi-quantitative PCR. Real-time PCR was employed to examine the expression levels of CAV-3 mRNA in yak and cattle muscles. The coding region sequence of CAV-3 gene in yak contains a complete ORF（631 bp）which encoded 151 amino acids. CAV-3 mRNA expression in the heart and muscle was detected， but not in any other examined tissues， and its expression level in the heart was higher than in the muscle. The result in yak was consistent with that in cattle. Expression of CAV-3 gene in the yak muscle was less than in the cattle muscle，but not significantly（P＞0.05）. The cloning and analysis of CAV-3 provided scientific basis for further study the function of CAV-3 gene in muscle development and muscle physiological process in the future.

yak； Caveolin-3； cloning； expression analysis

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.030

2014-10-28

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（肉牛牦牛）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專(zhuān)項(xiàng)（CARS-38），甘肅甘南牧區(qū)“生產(chǎn)生態(tài)生活”保障技術(shù)集成與示范（2012AD13B05）

趙娟花，女，碩士研究生，研究方向：動(dòng)物遺傳育種；E-mail：zjh326303202@163.com

閻萍，女，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向；動(dòng)物遺傳育種；E-mail：pingyanlz@163.com