劉婷

【摘要】目的 探討結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)灶ERK5蛋白表達(dá)及其臨床意義。 方法 通過免疫組織化學(xué)SP方法檢測ERK5蛋白在30例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶及癌旁正常黏膜組織的表達(dá)，分析其表達(dá)水平的差異。結(jié)果 ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶中的表達(dá)高于癌旁正常黏膜的表達(dá)，ERK5蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與性別、年齡、分化程度及浸潤深度無明顯差異。結(jié)論 ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)灶中高表達(dá)，其可能參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生，對評價結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者預(yù)后具有一定臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 ERK5蛋白；結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移；腫瘤轉(zhuǎn)移

【中圖分類號】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0131-01

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者生存率低的主要原因，肝臟是最常見的轉(zhuǎn)移器官，在初次確診的結(jié)直腸癌患者中有少部分并發(fā)肝轉(zhuǎn)移，因此，如何早期預(yù)測結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移是非常重要的。細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5（ERK5）是最新發(fā)現(xiàn)的MAPKs家族中的一個重要的一級激酶，他通過Thr218/Tyr220雙位點(diǎn)的磷酸化激活后進(jìn)一步激活下游的癌基因，近期研究發(fā)現(xiàn)，ERK5通過促進(jìn)血管的形成和血管內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定對維持腫瘤的生長起重要作用[1]。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)情況，探討其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用及其臨床意義。

資料與方法

1.1 研究對象

收集北京市平谷區(qū)醫(yī)院病理科2009年1月至2012年6月30例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者，均經(jīng)臨床病理明確證實(shí)，男性19例，女性11例，年齡35-70歲，中位年齡60歲，術(shù)中收集手術(shù)切除的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶癌旁正常黏膜，距離原發(fā)灶邊緣10厘米處，所有患者術(shù)前均未作化療或放療等抗腫瘤治療。

1.2 免疫組化檢測： ERK5兔抗人多克隆抗體（sc-5626，Santa Cruz），其余免疫組化試劑盒均購自福建邁新生物技術(shù)公司。采用免疫組織化學(xué)SP法，操作步驟嚴(yán)格要求說明書進(jìn)行。用已知陽性片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。ERK5蛋白染色陽性表達(dá)為細(xì)胞漿染色，主要表現(xiàn)為胞漿內(nèi)非均勻棕黃色顆粒。由2個獨(dú)立和有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生判讀。結(jié)果判讀采用半定量積分分級，積分=染色強(qiáng)度×染色細(xì)胞比例。染色強(qiáng)度：0分為陰性（無色），1分為淺灰色，2分為淡黃色，3分為黃色，4分為棕黃色；染色細(xì)胞比例：0分為無陽性細(xì)胞，1分為1%-25%，2分為26—50%，3分為51-75%，4分為76-100%。兩者相乘為總的分?jǐn)?shù)，0-11分納入低表達(dá)組，12-16分被納入到高表達(dá)組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，比較采用X2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶與正常黏膜組織ERK5水平比較

對30例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者術(shù)后，利用免疫組化檢測ERK5在原發(fā)灶和癌旁正常黏膜組織中的含量，并比較顯示：ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組原發(fā)灶中的高表達(dá)率為73.3%（22/30），ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表達(dá)率為33.33%（10/30），ERK5在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶中的高表達(dá)率明顯高于癌旁正常黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；

2.2 伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌原發(fā)灶組織中ERK5蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系：結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶中ERK5蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的高表達(dá)率為80.00%，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中ERK5蛋白的高表達(dá)率為30.00%，ERK5蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而原發(fā)灶中ERK5蛋白表達(dá)在性別、年齡、分化程度及浸潤深度無明顯差異（P>0.05）。

討論

結(jié)直腸癌是較常見的惡性消化道腫瘤，發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，對人們造成的危害日趨嚴(yán)重，尤其是結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者生存。判斷結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移風(fēng)險的因素較多，目前仍未有較高靈敏性及特異性的指標(biāo)。

ERK5蛋白被報道在多個腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中有重要作用，其通過調(diào)控粘著斑激酶信號促進(jìn)整合素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附和增強(qiáng)癌細(xì)胞活力；同時，ERK5的激活可以促進(jìn)Src蛋白相關(guān)的浸潤粘附因子形成進(jìn)而限制Rho蛋白的活性。以往研究表明與良性前列腺組織相比， ERK5上游激酶MEK5在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)增加，前列腺癌細(xì)胞的骨轉(zhuǎn)移與MEK5的過高表達(dá)有關(guān)，MEK5的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)也證實(shí)它確實(shí)可以誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞增殖、增強(qiáng)癌細(xì)胞活性并促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。Ramsay[2]等的最新實(shí)驗(yàn)證實(shí)，ERK5介導(dǎo)的信號對前列腺原位轉(zhuǎn)移癌模型有顯著地促進(jìn)形成作用，且在轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞核中ERK5的表達(dá)較良性前列腺增生、原發(fā)性前列腺癌顯著增高。Castro等[3]的研究提出，在乳腺腫瘤中，乳腺腫瘤激酶可在ERK5介導(dǎo)下被激活發(fā)生遷移，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。Zen等[4]研究提示，ERK5過度表達(dá)后可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長，有報道ERK5的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這些研究都表明ERK5信號通路在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起傳遞和放大信號的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，ERK5在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶中的的高表達(dá)率為73.3%，ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表達(dá)率為33.33%，在原發(fā)灶中的表達(dá)較正常結(jié)直腸黏膜組織明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中，ERK5蛋白的表達(dá)量增加。一些研究結(jié)果[5]也已經(jīng)證實(shí)了ERK5的過表達(dá)的惡性腫瘤具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。其可能的原因是在外界因素的持續(xù)刺激下，ERK5在結(jié)直腸癌組織中的含量持續(xù)增加，這些ERK5可以通過與其下游底物如c-fos、AP-1、c-myc的結(jié)合介導(dǎo)細(xì)胞的異常增殖從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)展。與此同時，ERK5可以與一些因子如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、表皮生長因子（EGF）、粘附素等結(jié)合而使癌癥細(xì)胞更具有侵襲力，而VEGF作為唯一受c-fos調(diào)控的促血管生成因子促進(jìn)營養(yǎng)癌癥細(xì)胞的血管異常增殖而使結(jié)直腸癌細(xì)胞更具有侵襲力。

綜上所述，ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)灶組織中高表達(dá)，其可能參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生，對評鑒結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者預(yù)后具有一定臨床意義。但對ERK5蛋白在結(jié)直腸癌進(jìn)展過程中的分子機(jī)制尚不十分清楚，還需要進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1] Hayashi M，Kim SW，Imanaka-Yoshida K， et al. Targeted deletion of BMK1/ERK5 in adult mice perturbs vascular integrity and leads to endothelial failure [J].J Clin Invest ，2004，113（8）：1138-1148.

[2] Ramsay AK， McCracken SR， Soofi M， et al. ERK5 signalling in prostate cancer promotes an invasive phenotype [J ]. Br Cancer， 2011， 104（4） ： 664-672.

[3] Castro NE， Lange CA. Breast tumor kinase and extracellular signalregulated kinase 5 mediate Met receptor signaling to cell migration in breast cancer cells [J]. Breast CancerRes， 2010，12（4）： R60.

[4] Zen K，Yasui K，Nakajima T，et al . MEK5 overexpression is associated with metastatic prostate cancer， and stimulates proliferation， MMP-9 expression and invasion，Oncogene（2003）22，1381-1389.

[5] Testa U，Pannitteri G，Condorelli.Vascular endothelial growth factors in cardiovascular medicine[J]. J Cardiovasc Med，2008，9（12）：1190-1221.

表1 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)灶與正常黏膜組織ERK5表達(dá)量比較

組織類型 例數(shù) ERK5 表達(dá) 低表達(dá) 高表達(dá)癌旁正常黏膜 30 20 10原發(fā)灶 30 822表2 ERK5蛋白在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者原發(fā)灶中的表達(dá)及臨床指標(biāo)

臨床指數(shù) 例數(shù) 原發(fā)灶中ERK5的表達(dá) X2值 P值 低表達(dá) 高表達(dá) 性別男 19 6 13 0.354 >0.05女 11 5 6 年齡≤55 16 10 6 0.374 >0.05>55 14 7 7 分化程度高分化 8 6 2 中分化 15 10 5 0.142 >0.05

低分化 7 2 5 浸潤深度漿膜內(nèi) 18 10 8 0.590 >0.05漿膜外 12 7 5 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（-） 20 14 6 0.013 <0.05（+） 10 2 ERK5在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)（SP ×200）

ERK5在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)（SP×200）