馮增偉 韓淑英

【摘要】目的 探討原花青素對TBI大鼠氧化損傷的治療作用。方法選92只清潔級SD大鼠隨機取出12只作為正常對照組，其余大鼠制備TBI模型。大鼠經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，暴露顱骨骨縫。用重約450g、直徑 18mm的銅棒在垂直玻璃管中從1.2m高度處自由落下打擊，造成大鼠彌漫性顱腦創(chuàng)傷，對照組僅給予麻醉并切開頭皮、縫合，但不予以自由落體打擊。造模后第二天進行神經(jīng)功能評分，選取達到重度損傷的48只大鼠進行隨即分組，將成模大鼠隨機分成TBI模型組、原花青素低劑量治療組、原花青素中劑量治療組、原花青素高劑量治療組。于造模后第二日進行給藥，原花青素低劑量治療組灌胃給予大鼠原花青素50mg/kg劑量，原花青素中劑量治療組按100mg/kg灌胃，原花青素高劑量治療組按200mg/kg灌胃，正常對照組和TBI模型組灌胃等容蒸餾水。給藥干預14天后，斷頭處死大鼠，大鼠取新鮮腦組織檢測腦組織SOD、MDA含量。結果 正常對照組比較TBI模型組SOD含量明顯降低，MDA含量明顯升高（P<0.05），表明TBI能夠產(chǎn)生氧化損傷；與TBI模型組比較，原花青素各治療組SOD含量明顯升高，MDA含量明顯降低，其中以原花青素高劑量治療組最為明顯（P<0.05），表明經(jīng)原花青素抗TBI治療后能夠有效減少TBI發(fā)作引起的氧化損傷。結論 原花青素能有效抑制TBI所致大鼠腦組織的氧化損傷。

【關鍵詞】腦外傷；原花青素；氧化損傷

【中圖分類號】R285.5 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0033-01

腦外傷（traumatic brain injury，TBI）是指頭部遭受沖擊力或打擊引起的一系列的腦部功能障礙如短暫性精神狀態(tài)的改變、意識錯亂、定向力障礙、短暫性遺忘或短暫的意識喪失，是現(xiàn)階段嚴重威脅人類生命的疾病之一，也被稱為現(xiàn)代流行病[1、2]，近些年來一直是45歲以下人群致死重要因素之一，高居各類創(chuàng)傷致死/殘率榜首[3-5]。TBI后引起的腦部氧化損傷現(xiàn)在被認為是導致TBI眾多臨床后遺癥的主要作用機制，如何有效的降低TBI后氧化損傷將是降低TBI并發(fā)癥的有效途徑。

1材料與方法

1.1實驗動物

清潔級雄性SD大鼠92只，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所動物實驗中心，許可證號：SCXK（軍）2009-03，合格證號：0001646；大鼠飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK（京）009-0008。大鼠起始體重（250±5.31）g，12h光亮/黑暗、22-25℃環(huán)境溫度，分籠喂養(yǎng)于河北聯(lián)合大學實驗動物中心屏障實驗室。

1.2實驗方法

1）實驗動物分組

將清潔級雄性SD大鼠90只，置于屏障環(huán)境下適應性飼養(yǎng)7天后，隨機取出10只作為正常對照組，其余大鼠進行TBI模型制備。

2）TBI模型制作

80只實驗大鼠于造模前 12 h 禁食，自由飲水。大鼠經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛進行麻醉，至角膜反射消失，使用0.5%碘伏常規(guī)消毒顱頂部皮膚，在相當于矢狀縫與人字逢交界處前沿顱骨中線切開局部皮膚，剝離顱骨表面骨膜，暴露顱骨骨縫。于大鼠冠狀縫和矢狀縫交點處放置鋼墊（直徑10mm，厚3mm）并用耳腦膠固定，將大鼠俯臥位固定于已知彈性系數(shù)的海綿床（10×10×20cm3）上，將海綿床移至有機玻璃管內銅錘正下方，保持墊片正對鋼墊，用重約450g、直徑 18mm的銅棒在垂直玻璃管中從1.2m高度處自由落下打擊鋼墊，造成大鼠彌漫性顱腦創(chuàng)傷，致傷后迅速移開海綿床及大鼠，以免銅錘反彈造成再次損傷。致傷后，頭皮常規(guī)碘伏消毒后4號線間斷縫合頭皮，至其蘇醒有肢體活動后放回飼養(yǎng)籠中，于室溫下正常自由進食水。對照組僅給予麻醉并切開頭皮、縫合，但不予以自由落體打擊。

造模大鼠第二天進行神經(jīng)功能評分，選取重度損傷大鼠進行實驗分組給藥。

3）分組給藥

將上述成模大鼠，按隨機數(shù)字表法，隨機分成：TBI模型組、原花青素低劑量治療組、原花青素中劑量治療組、原花青素高劑量治療組，加正常對照組、共計5組，每組10只.

分組后，各組大鼠開始給藥，各組按設計要求給予相應劑量藥物進行觀察。正常對照組和TBI模型組每日給予等容生理鹽水進行腹腔注射；原花青素低劑量治療組大鼠鼠每日照常給予原花青素50mg/kg進行腹腔注射；原花青素中劑量治療組大鼠每日照常給予原花青素100mg/kg進行腹腔注射；原花青素高劑量治療組大鼠每日照常給予原花青素200mg/kgPTZ進行腹腔注射。各組連續(xù)給藥21天后，取腦組織檢測各項指標。

4）腦組織SOD和MDA檢測

大鼠麻醉后端頭取新鮮腦組織，按SOD、MDA試劑盒所描述步驟進行檢測。

2 結果

2.1 TBI模型制作結果

TBI模型組和原花青素各治療組通過高空墜物方法進行模型的制作，并在造模第二天對造模大鼠進行神經(jīng)行為學檢測，篩選合格大鼠進行實驗。造模大鼠按照神經(jīng)功能評分標準進行評分，根據(jù)所得分數(shù)分為：輕度損傷、中度損傷、重度損傷。共有80只健康SD大鼠進行了腦外傷模型制作，其中死亡5只，創(chuàng)傷程度達到輕度損17只，創(chuàng)傷程度達到中度損傷的7只，有51只損傷程度達到了重度損傷，選取重度損傷大鼠48只作為實驗用鼠，隨機分為TBI模型組、原花青素低劑量治療組、原花青素中劑量治療組、原花青素高劑量治療組，進行實驗。實驗中在造模第三天和第五天，TBI模型組分別死亡2只大鼠，從剩余重度損傷大鼠中隨機選取2只進行了補充，其余各組沒有死亡大鼠出現(xiàn)。

2.2 SOD和MDA結果

大鼠處死后進行腦組織的SOD和MDA含量檢測，結果如表1所示，TBI后大鼠SOD明顯低于正常對照組，而MDA含量明顯曾加；與TBI模型組比較經(jīng)原花青素治療后SOD明顯增多，MDA含量明顯降低。

表1 大鼠腦組織含水量及海馬組織SOD、MDA含量（ X±s）

分組 腦組織含水量（%） SOD（U/ml） MDA（μmol/g）正常對照組 74.62 ± 0.66# 26.22 ± 4.22# 3.69 ± 0.35#TBI模型組 81.52 ± 0.57* 17.81 ± 3.54* 6.70 ± 0.36*原花青素低劑量治療組 81.02 ± 0.39* 18.83 ± 3.96* 6.17 ± 0.21*原花青素中劑量治療組 80.54 ± 0.42* 19.34 ± 3.40* 5.87 ± 0.22*原花青素高劑量治療組 79.83 ± 0.41*# 25.34 ± 3.95# 4.13 ± 0.18#注：*與正常對照組比較P<0.05；#：與TBI模型組比較P<0.05

3 討論

TBI后會引起腦組織較嚴重的氧化損傷，這一機制同樣導致了TBI繼發(fā)性的腦損傷，出現(xiàn)嚴重的腦水腫現(xiàn)象，進一步刺激腦部的再次損傷，造成惡性循環(huán)的后果。這也是為什么TBI后需要長期進行康復治療的原因。如何減少TBI后的腦損傷，就是減少TBI并發(fā)癥的關鍵[6]。經(jīng)多年的調查研究和實驗炎癥后發(fā)現(xiàn)，TBI的外傷會引起腦部的氧自由基的異常增多造成腦部的氧化損傷惡性循環(huán)，所以找到減少氧化損傷的方法就能夠有效降低TBI并發(fā)癥的發(fā)生。原花青素是現(xiàn)階段抗氧化生物活性最強的自然提取物，其抗氧化能力要遠遠高于已用于臨床的維生素E和維生素C等常用藥物，且具有無副作用的良好表現(xiàn)[7]。本次實驗發(fā)現(xiàn)，在TBI后使用原花青素能夠有效的降低TBI后所致的氧化損傷，說明原花青素能夠有效治療和干預TBI的病情發(fā)展，可能是今后TBI治療的有效藥物。

參考文獻

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