周天德

1 流行病學(xué)

猝死癥呈地區(qū)性散發(fā)，主要侵襲膘情較好的幼齡家畜。近年來，該病的發(fā)生出現(xiàn)了新特點(diǎn)，就是大齡家畜的發(fā)病和死亡率有增加的趨勢。本病冬、春季節(jié)發(fā)病較多，該病的臨床特點(diǎn)為病程短，不見任何癥狀，突然發(fā)病，從發(fā)病到死亡2小時(shí)左右，死前無明顯體溫變化，在上槽時(shí)才表現(xiàn)出采食量下降，精神沉郁，全身肌肉震顫，行走不穩(wěn)，結(jié)膜發(fā)紺，呼吸急促，脈快而弱，流涎，隨后倒地，四肢劃動(dòng)，迅速死亡。奶牛死亡后腹部迅速膨脹，口腔流出紅色泡沫樣液體，舌脫出于口外，肛門外翻，呈角弓反張狀態(tài)。

2 剖檢變化

死亡牛尸體外觀營養(yǎng)狀況良好，天然孔無異常，腹脹。剖檢以全身實(shí)質(zhì)器官和小腸出血為特征，心肌質(zhì)地變軟，心房及心室外膜有出血斑點(diǎn)；血液暗紅；頜下、肩前、腸系膜淋巴結(jié)水腫，切面有斑點(diǎn)狀出血；肺氣腫，有出血癥狀；肝臟呈紫黑色，表面有出血斑點(diǎn)；膽囊、膀胱黏膜充血，有少量出血點(diǎn)；脾臟無明顯變化；瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃黏膜有散在的針尖大的出血點(diǎn)，有的形成條狀出血斑；皺胃充血、出血；小腸漿膜充血發(fā)紅，黏膜呈現(xiàn)斑塊狀出血或彌漫性出血；腸內(nèi)容物為暗紅色粘稠液體。

3 材料與方法

病料：猝死牛的小腸內(nèi)容物、肝等；培養(yǎng)基：血液瓊脂培養(yǎng)基、肉肝湯培養(yǎng)基；試劑：革蘭氏染液、生化試劑盒、 DNA聚合酶；儀器：PCR儀、離心機(jī)、電泳儀。

細(xì)菌分離培養(yǎng)：無菌采取猝死牛小腸內(nèi)容物、肝，分離病原菌，接種于血液和肉湯培養(yǎng)基中，分別進(jìn)行厭氧和需氧培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)培養(yǎng)24～48小時(shí)后，觀察生長情況，挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。

涂片染色鏡檢：挑取少量細(xì)菌做涂片，經(jīng)革蘭氏染色后油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。

生化試驗(yàn)：將經(jīng)過分離純化的病原菌分別接種于明膠、硝酸鹽、葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、過氧化氫酶、甘露醇、淀粉、凝固血清和牛乳中，37℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，觀察結(jié)果。

應(yīng)用PCR技術(shù)檢測病原菌：染色體DNA的提取。將細(xì)菌在胰胨酵母精葡萄糖瓊脂（TYG）培養(yǎng)基中37℃厭氧培養(yǎng)過夜，離心后，菌細(xì)胞重懸于含溶菌酶（2克/升）的TE中，37℃孵育1小時(shí)，然后加入二烷基硫酸鈉（SDS）（終濃度為1%）、乙二胺四乙酸（EDTA）（終濃度50毫摩爾/升）和蛋白酶K（終濃度為150摩克/升），58℃水浴4小時(shí)，用等體積的飽和酚重復(fù)抽提3次，吸取上層水相，加1/5體積的乙酸銨（10摩爾/升）和2倍體積的預(yù)冷無水乙醇，充分混勻后置室溫沉淀10分鐘，用玻棒挑取線團(tuán)狀的染色體DNA沉淀至另一微量離心管中，加TE溶解DNA，4℃保存。

4 結(jié)果

細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果：病死牛小腸內(nèi)容物、肝等病料在血液瓊脂平板分離培養(yǎng)中未見細(xì)菌生長。經(jīng)厭氧培養(yǎng)的血液瓊脂平皿上生長出圓形、光滑、直徑2～4毫米、邊緣不整的灰黃色菌落，周圍有明顯的溶血環(huán)。厭氧肉肝湯中均勻渾濁并產(chǎn)生大量氣體。

鏡檢結(jié)果：油鏡下可見短粗的革蘭氏陽性桿菌， 兩端鈍圓，單個(gè)或成雙排列，具有明顯的莢膜，無鞭毛，少數(shù)形成芽孢。初步懷疑為產(chǎn)氣莢膜梭菌。

生化試驗(yàn)結(jié)果：分離菌能液化明膠；可還原硝酸鹽；可分解葡萄糖、乳糖、果糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；過氧化氫酶試驗(yàn)陰性；不水解甘露醇；淀粉水解試驗(yàn)陰性；不液化凝固血清；牛乳試驗(yàn)呈暴烈發(fā)酵。

PCR產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果：經(jīng)過30個(gè)循環(huán)后，擴(kuò)增出了目的基因片段，從PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果圖中可以看出，擴(kuò)增出的片段長度與預(yù)計(jì)的長度相符，為420bp。

結(jié)合臨床癥狀及剖檢變化，綜合判斷認(rèn)為，奶牛所發(fā)病為產(chǎn)氣莢膜梭菌所致的奶牛猝死癥。

5 討論

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、剖檢變化以及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，診斷為由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的牛猝死癥。

由于魏氏梭菌和腐敗梭菌均可引起牛的猝死，在診斷時(shí)要注意2種細(xì)菌及其引起疾病的鑒別診斷要點(diǎn)。猝死癥的發(fā)生可能與其他致病菌，如巴氏桿菌、鏈球菌等引起的混合感染有關(guān)。

從牛的猝死癥防治來看，全面注射牛猝死癥多價(jià)濃縮滅活菌苗的預(yù)防效果比較理想。堅(jiān)持每年春、秋、冬季節(jié)在易發(fā)病區(qū)進(jìn)行免疫接種，同時(shí)還應(yīng)加強(qiáng)對養(yǎng)殖戶的宣傳教育，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。