程志杰

【摘? 要】免疫磁性分離技術(shù)的基礎(chǔ)為具有特性的病原抗體反應(yīng)，是綜合磁載體技術(shù)和免疫學(xué)的一項(xiàng)新技術(shù)，其特點(diǎn)表現(xiàn)為儀器設(shè)備便宜、強(qiáng)特異性、樣品分離速度快、操作簡單等，在病原體檢測(cè)和細(xì)胞分離領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，本文主要對(duì)免疫磁性分離技術(shù)在食源性疾病檢測(cè)中的應(yīng)用給予探討，分析內(nèi)容包括寄生蟲檢測(cè)、病毒檢測(cè)、細(xì)菌檢測(cè)等。

【關(guān)鍵詞】食源性疾病檢測(cè);免疫磁性分離;寄生蟲;病毒;細(xì)菌

磁性微球?qū)儆诖判怨δ懿牧?，其組成部分為磁性內(nèi)核和高分子外科，磁性微球可以與多種物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)，比如核酸、抗原、抗體等，在反應(yīng)體系中，可以對(duì)相應(yīng)的核酸、抗原、抗體進(jìn)行有效識(shí)別，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)高效分離與檢測(cè)。免疫磁性技術(shù)的載體為抗體包被的磁珠，在反應(yīng)介質(zhì)中抗體與具有特異性的抗原進(jìn)行充分結(jié)合，進(jìn)而形成復(fù)合物抗原-抗體，在磁場(chǎng)作用下，此復(fù)合物可以實(shí)現(xiàn)定向移動(dòng)，最終實(shí)現(xiàn)抗原分離。

一、在細(xì)菌檢測(cè)中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

腸出血性大腸桿菌屬于大腸埃希氏菌，主要引發(fā)的疾病有腸炎和出血性腹瀉，其中代表菌株為O157H7血清型。世界衛(wèi)生組織已經(jīng)把E.coilO157H7列入28種傳染病病原體之中，成為公共衛(wèi)生監(jiān)控和食品安全監(jiān)控的重點(diǎn)工作。使用傳統(tǒng)方法對(duì)E.coilO157H7進(jìn)行分離時(shí)，不僅分離時(shí)間長，且存在較多的雜菌干擾，對(duì)檢出率造成嚴(yán)重影響，其檢測(cè)水平也只是停留在200cfu/g。而在某項(xiàng)研究中，采用斑點(diǎn)免疫層析法首先快速篩選增菌液，此方法具有定性快速和高靈敏度的特點(diǎn)，在使用抗E.coilO157H7抗體，對(duì)磁珠進(jìn)行包被，使其在增菌液中捕獲E.coilO157H7，對(duì)樣品中的其他雜菌和殘?jiān)M(jìn)行充分分離，具有較高的濃縮作用。基于斑點(diǎn)免疫層析法的快速篩選，大大降低了免疫磁性分離技術(shù)的工作量，且沒有1例表現(xiàn)為假陰性，具有較高的靈敏度，檢出率明顯高于傳統(tǒng)分離法，將分離工作整整縮減了一個(gè)工作日。在檢測(cè)E.coilO157H7時(shí)，兩種方法的聯(lián)合使用，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為高靈敏度、省時(shí)、快速等，完全符合與現(xiàn)階段的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)工作。在某項(xiàng)研究中，研究人員充分結(jié)合免疫脂質(zhì)體熒光法和免疫磁珠，在8小時(shí)內(nèi)，順利完成整個(gè)分離過程，檢出限度為1cfu/mL，準(zhǔn)確率高達(dá)100%。

二、在病毒檢測(cè)中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

病毒對(duì)人類健康具有嚴(yán)重危害性，其中最主要的食源性病毒就是諾如病毒，在不同年齡階段的人群中均會(huì)引發(fā)急性腹瀉，且諾如病毒流行較為廣泛，是預(yù)防檢測(cè)工作的重點(diǎn)?，F(xiàn)階段，在體外增殖中還沒有適用性比較強(qiáng)的動(dòng)物模型和細(xì)胞系，在臨床樣本諾如病毒的檢測(cè)中，RT-PCR得到了廣泛應(yīng)用，而在諾如病毒感染中病毒的實(shí)際含量非常少，檢測(cè)難度比較大，在使用RT-PCR之前，在對(duì)食物中諾如病毒進(jìn)行濃縮和純化時(shí)，往往需要多種操作，在此眾多操作中，可能造成病毒的交叉感染和丟失。而在某項(xiàng)研究中，使用諾如病毒重組衣殼蛋白抗體對(duì)磁珠進(jìn)行包被，首先對(duì)食物中的諾如病毒進(jìn)行捕獲和濃縮，在使用RT-PCR給予檢測(cè)，在此檢測(cè)工作中，免疫磁珠法的優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為耗時(shí)短、設(shè)備簡單、操作簡便，大大降低了RT-PCR中參雜的干擾物，完全適用于現(xiàn)階段的食品樣本檢測(cè)。

三、寄生蟲檢測(cè)中免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用分析

隱孢子蟲病所引發(fā)的疾病為腹瀉，此原蟲病具有人畜共患性。對(duì)于水體消毒劑，隱孢子蟲所表現(xiàn)的抵抗力比較強(qiáng)，感染的引發(fā)只需要少量的卵囊就可以實(shí)現(xiàn)，經(jīng)證實(shí)，在引發(fā)人類感染方面，包含的隱孢子蟲有人隱孢子蟲和微小隱孢子蟲，因此，在檢測(cè)此類病原體時(shí)，檢測(cè)方法必須具有較高的靈敏度和特異性。在某樣本中，對(duì)低濃度微小隱孢子蟲卵囊進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，充分結(jié)合了免疫熒光顯微術(shù)和免疫磁性分離術(shù)，使檢測(cè)結(jié)果具有較高的敏感性。在某項(xiàng)研究中，采用免疫磁性分離法檢測(cè)水中隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的影響因素進(jìn)行了較為全面和深入的總結(jié)，他們指出，待測(cè)樣品中的顆粒物質(zhì)和溶解性物質(zhì)、卵囊和孢囊的濃度、育齡和活性等特征，以及磁珠添加比例、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)體積等MS過程操作參數(shù)均會(huì)對(duì)MS回收率產(chǎn)生不同程度的影響。因此，通過適當(dāng)增加前處理操作，對(duì)MS各步驟進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化，并配合活性分析手段，能有效提高卵囊和孢囊檢測(cè)過程中MS環(huán)節(jié)回收率的精確度、穩(wěn)定性和靈敏度，對(duì)客觀評(píng)價(jià)水質(zhì)安全，控制隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲污染具有十分重要的意義。

結(jié)束語

總之，在食源性疾病的檢測(cè)中，免疫磁性分離技術(shù)的應(yīng)用，可以對(duì)樣品中的病原微生物進(jìn)行有效收集和濃縮，在病原微生物富集方面優(yōu)勢(shì)顯著，不僅靈敏度高，還為今后醫(yī)學(xué)科研工作的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

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