郭策 韓福杰 田物 柴龍會 黃璞祎

摘要 [目的] 研究高效氯氟氰菊酯和硫丹對葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常的影響，為評價這2種農(nóng)藥對葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性提供理論依據(jù)。[方法] 研究不同濃度（0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L）高效氯氟氰菊酯和不同濃度（1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L）硫丹96 h暴露對葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常率的影響。[結(jié)果] 隨著高效氯氟氰菊酯和硫丹濃度的增加， 葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞的核異常率呈上升趨勢，呈現(xiàn)較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。[結(jié)論] 高效氯氟氰菊酯和硫丹對葛氏鱸塘鱧具有潛在的遺傳毒性，且毒性效應(yīng)隨著農(nóng)藥濃度的增加而增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 高效氯氟氰菊酯；硫丹；核異常；葛氏鱸塘鱧

中圖分類號 S949 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）34-215-02

葛氏鱸塘鱧（Perccottus glenii），隸屬鱸形目（Perciformes）蝦虎魚亞目（Gobioidei）塘鱧科（Eleotridae），是東北地區(qū)的特有魚類，主要分布在黑龍江、圖們江流域水生植物較多的河道、排水渠和濕地，極易受到農(nóng)藥的影響。但是，目前關(guān)于農(nóng)藥對葛氏鱸塘鱧的毒性研究報道較少。

核異常率是反映農(nóng)藥對魚類遺傳毒性的重要指標(biāo)，已被廣泛用于評價農(nóng)藥對魚類的遺傳毒性效應(yīng)[1-2]。擬除蟲菊酯類和有機(jī)氯農(nóng)藥是目前常用的兩類農(nóng)藥。為研究擬除蟲菊酯類和有效氯農(nóng)藥對葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性效應(yīng)，筆者測定了高效氯氟氰菊酯和硫丹對葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常率的影響，旨在為評價這兩類農(nóng)藥對魚類的遺傳毒性提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

葛氏鱸塘鱧采自哈爾濱市的松花江濕地，體長（6.97±0.79） cm，體重（5.02±1.81） g。室內(nèi)暫養(yǎng)14 d后進(jìn)行試驗(yàn)，暫養(yǎng)期間每天定時投喂搖蚊幼蟲，試驗(yàn)前1 d停食，選取健康、活潑的個體進(jìn)行隨機(jī)分組。試驗(yàn)在60 cm×40 cm×50 cm的玻璃水族箱中進(jìn)行，水溫（24±1）℃，溶解氧濃度大于5 mg/L。試驗(yàn)用水為充分曝氣2 d以上的自來水。

1.2 試驗(yàn)藥物

高效氯氟氰菊酯（微乳劑），購于山東曹達(dá)化工有限公司，有效成分25 g/L；硫丹（乳油），購于拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司，有效成分350 g/L。

1.3 試驗(yàn)方法

高效氯氟氰菊酯設(shè)置0、0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L共5個濃度梯度，硫丹設(shè)置0、1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L共6個濃度梯度，每個濃度梯度設(shè)置3個平行組，每組放置試驗(yàn)魚5尾。試驗(yàn)持續(xù)96 h，試驗(yàn)期間停食，每隔24 h更換1次藥液。

1.4 血涂片的制作和觀察

各處理組在染毒96 h后隨機(jī)迭取葛氏鱸塘鱧5尾，斷尾取血，每尾各制作血涂片2片，采用南京建成科技有限公司的快速姬姆薩染液染色。采用油鏡觀察計(jì)數(shù)，每張血涂片觀察3 000個細(xì)胞，記錄核異常數(shù)，并按照以下公式計(jì)算核異常率：核異常率=具有核異常的細(xì)胞總數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×1 000‰。使用Leica 顯微鏡及相關(guān)軟件拍攝記錄。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。應(yīng)用單因素方差分析（ANOVA），分析2種農(nóng)藥對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響是否顯著。應(yīng)用Duncans多重比較分析不同濃度處理組的核異常率是否存在顯著差異。試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（±SE）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 農(nóng)藥對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核形態(tài)的影響

從圖1可以看出，葛氏鱸塘鱧正常的紅細(xì)胞大多呈橢圓形、少數(shù)為圓形，表面光滑，核橢圓形，位于細(xì)胞中央；經(jīng)姬姆薩染液染色后，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)呈淺粉色；核異常包括核質(zhì)外凸、核質(zhì)內(nèi)凹、核內(nèi)空泡化、微核等。

2.2 高效氯氟氰菊酯對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

從圖2可以看出，葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞的核異常率隨高效氯氟氰菊酯濃度的升高呈上升趨勢。0.5、1.0、1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯處理組的核異常率分別為對照組的4.01倍、3.96倍、5.61倍和5.80倍。單因素方差分析（ANOVA）表明，高效氯氟氰菊酯對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率有極顯著影響（P<0.01）。Duncans多重比較結(jié)果表明各處理組的核異常率均顯著高于對照

組，1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯處理組的核異常率顯著高于0.5和1.0 μg/L處理組。

2.3 硫丹對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

從圖3可以看出，葛氏鱸塘鱧的血紅細(xì)胞核異常率隨著硫丹濃度的增加而升高。1.25、2.50、3.75、5.00和6.25 μg/L硫丹處理組的核異常率分別為對照組的3.10倍、3.87倍、4.42倍、5.38倍和7.42倍。單因素方差分析表明，硫丹對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞的核異常率有極顯著影響（P<0.01）。Duncans多重比較結(jié)果表明，對照組核異常率顯著低于其他處理組（P<0.01），6.25 μg/L硫丹處理組的核異常率顯著高于其他處理組（P<0.01）。

3 討論

3.1 高效氯氟氰菊酯對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

該研究結(jié)果表明高效氯氟氰菊酯各處理組的葛氏鱸塘鱧血紅細(xì)胞核異常率均顯著高于對照組，說明高效氯氟氰菊酯對葛氏鱸塘鱧具有遺傳毒性；較低濃度組（0.5和1.0 μg/L高效氯氟氰菊酯）的核異常率顯著低于較高濃度組（1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯），說明葛氏鱸塘鱧對較低濃度的高效氯氟氰菊酯造成的遺傳損傷具有一定的修復(fù)作用。夏曉華等[1]研究發(fā)現(xiàn)泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）外周血紅細(xì)胞的核異常率隨著高效氯氟氰菊酯濃度的增加而不斷升高，對泥鰍具有顯著的遺傳毒性效應(yīng)。高效氯氟氰菊酯對大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）也具有很強(qiáng)的誘變性，核異常率與染毒濃度呈正相關(guān)[3]，這與該研究結(jié)果基本一致。

3.2 硫丹對葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

該試驗(yàn)結(jié)果還表明低濃度（1.25 μg/L）硫丹處理組的核異常率為對照組的3.10倍，說明硫丹對葛氏鱸塘鱧具有較強(qiáng)的遺傳損害作用；最高的核異常率出現(xiàn)在較高濃度（6.25 μg/L）處理組，表明硫丹對葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性具有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。硫丹對其他魚類也表現(xiàn)出較強(qiáng)的遺傳毒性。武煥陽等[2]研究發(fā)現(xiàn)草魚（Ctenopharyngodon idellus）經(jīng)硫丹染毒后，血紅細(xì)胞的核異常率隨著硫丹濃度的升高而呈上升趨勢。