郭策 韓福杰 田物 柴龍會(huì) 黃璞祎

摘要 [目的] 研究高效氯氟氰菊酯和硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常的影響，為評(píng)價(jià)這2種農(nóng)藥對(duì)葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性提供理論依據(jù)。[方法] 研究不同濃度（0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L）高效氯氟氰菊酯和不同濃度（1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L）硫丹96 h暴露對(duì)葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常率的影響。[結(jié)果] 隨著高效氯氟氰菊酯和硫丹濃度的增加， 葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞的核異常率呈上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。[結(jié)論] 高效氯氟氰菊酯和硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧具有潛在的遺傳毒性，且毒性效應(yīng)隨著農(nóng)藥濃度的增加而增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 高效氯氟氰菊酯；硫丹；核異常；葛氏鱸塘鱧

中圖分類號(hào) S949 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）34-215-02

葛氏鱸塘鱧（Perccottus glenii），隸屬鱸形目（Perciformes）蝦虎魚(yú)亞目（Gobioidei）塘鱧科（Eleotridae），是東北地區(qū)的特有魚(yú)類，主要分布在黑龍江、圖們江流域水生植物較多的河道、排水渠和濕地，極易受到農(nóng)藥的影響。但是，目前關(guān)于農(nóng)藥對(duì)葛氏鱸塘鱧的毒性研究報(bào)道較少。

核異常率是反映農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類遺傳毒性的重要指標(biāo)，已被廣泛用于評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類的遺傳毒性效應(yīng)[1-2]。擬除蟲(chóng)菊酯類和有機(jī)氯農(nóng)藥是目前常用的兩類農(nóng)藥。為研究擬除蟲(chóng)菊酯類和有效氯農(nóng)藥對(duì)葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性效應(yīng)，筆者測(cè)定了高效氯氟氰菊酯和硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞核異常率的影響，旨在為評(píng)價(jià)這兩類農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類的遺傳毒性提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú)

葛氏鱸塘鱧采自哈爾濱市的松花江濕地，體長(zhǎng)（6.97±0.79） cm，體重（5.02±1.81） g。室內(nèi)暫養(yǎng)14 d后進(jìn)行試驗(yàn)，暫養(yǎng)期間每天定時(shí)投喂搖蚊幼蟲(chóng)，試驗(yàn)前1 d停食，選取健康、活潑的個(gè)體進(jìn)行隨機(jī)分組。試驗(yàn)在60 cm×40 cm×50 cm的玻璃水族箱中進(jìn)行，水溫（24±1）℃，溶解氧濃度大于5 mg/L。試驗(yàn)用水為充分曝氣2 d以上的自來(lái)水。

1.2 試驗(yàn)藥物

高效氯氟氰菊酯（微乳劑），購(gòu)于山東曹達(dá)化工有限公司，有效成分25 g/L；硫丹（乳油），購(gòu)于拜耳作物科學(xué)（中國(guó)）有限公司，有效成分350 g/L。

1.3 試驗(yàn)方法

高效氯氟氰菊酯設(shè)置0、0.5、1.0、1.5、2.0 μg/L共5個(gè)濃度梯度，硫丹設(shè)置0、1.25、2.50、3.75、5.00、6.25 μg/L共6個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度設(shè)置3個(gè)平行組，每組放置試驗(yàn)魚(yú)5尾。試驗(yàn)持續(xù)96 h，試驗(yàn)期間停食，每隔24 h更換1次藥液。

1.4 血涂片的制作和觀察

各處理組在染毒96 h后隨機(jī)迭取葛氏鱸塘鱧5尾，斷尾取血，每尾各制作血涂片2片，采用南京建成科技有限公司的快速姬姆薩染液染色。采用油鏡觀察計(jì)數(shù)，每張血涂片觀察3 000個(gè)細(xì)胞，記錄核異常數(shù)，并按照以下公式計(jì)算核異常率：核異常率=具有核異常的細(xì)胞總數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×1 000‰。使用Leica 顯微鏡及相關(guān)軟件拍攝記錄。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。應(yīng)用單因素方差分析（ANOVA），分析2種農(nóng)藥對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響是否顯著。應(yīng)用Duncans多重比較分析不同濃度處理組的核異常率是否存在顯著差異。試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（±SE）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 農(nóng)藥對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核形態(tài)的影響

從圖1可以看出，葛氏鱸塘鱧正常的紅細(xì)胞大多呈橢圓形、少數(shù)為圓形，表面光滑，核橢圓形，位于細(xì)胞中央；經(jīng)姬姆薩染液染色后，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)呈淺粉色；核異常包括核質(zhì)外凸、核質(zhì)內(nèi)凹、核內(nèi)空泡化、微核等。

2.2 高效氯氟氰菊酯對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

從圖2可以看出，葛氏鱸塘鱧外周血紅細(xì)胞的核異常率隨高效氯氟氰菊酯濃度的升高呈上升趨勢(shì)。0.5、1.0、1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯處理組的核異常率分別為對(duì)照組的4.01倍、3.96倍、5.61倍和5.80倍。單因素方差分析（ANOVA）表明，高效氯氟氰菊酯對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率有極顯著影響（P<0.01）。Duncans多重比較結(jié)果表明各處理組的核異常率均顯著高于對(duì)照

組，1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯處理組的核異常率顯著高于0.5和1.0 μg/L處理組。

2.3 硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

從圖3可以看出，葛氏鱸塘鱧的血紅細(xì)胞核異常率隨著硫丹濃度的增加而升高。1.25、2.50、3.75、5.00和6.25 μg/L硫丹處理組的核異常率分別為對(duì)照組的3.10倍、3.87倍、4.42倍、5.38倍和7.42倍。單因素方差分析表明，硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞的核異常率有極顯著影響（P<0.01）。Duncans多重比較結(jié)果表明，對(duì)照組核異常率顯著低于其他處理組（P<0.01），6.25 μg/L硫丹處理組的核異常率顯著高于其他處理組（P<0.01）。

3 討論

3.1 高效氯氟氰菊酯對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

該研究結(jié)果表明高效氯氟氰菊酯各處理組的葛氏鱸塘鱧血紅細(xì)胞核異常率均顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明高效氯氟氰菊酯對(duì)葛氏鱸塘鱧具有遺傳毒性；較低濃度組（0.5和1.0 μg/L高效氯氟氰菊酯）的核異常率顯著低于較高濃度組（1.5和2.0 μg/L高效氯氟氰菊酯），說(shuō)明葛氏鱸塘鱧對(duì)較低濃度的高效氯氟氰菊酯造成的遺傳損傷具有一定的修復(fù)作用。夏曉華等[1]研究發(fā)現(xiàn)泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）外周血紅細(xì)胞的核異常率隨著高效氯氟氰菊酯濃度的增加而不斷升高，對(duì)泥鰍具有顯著的遺傳毒性效應(yīng)。高效氯氟氰菊酯對(duì)大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）也具有很強(qiáng)的誘變性，核異常率與染毒濃度呈正相關(guān)[3]，這與該研究結(jié)果基本一致。

3.2 硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧紅細(xì)胞核異常率的影響

該試驗(yàn)結(jié)果還表明低濃度（1.25 μg/L）硫丹處理組的核異常率為對(duì)照組的3.10倍，說(shuō)明硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧具有較強(qiáng)的遺傳損害作用；最高的核異常率出現(xiàn)在較高濃度（6.25 μg/L）處理組，表明硫丹對(duì)葛氏鱸塘鱧的遺傳毒性具有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。硫丹對(duì)其他魚(yú)類也表現(xiàn)出較強(qiáng)的遺傳毒性。武煥陽(yáng)等[2]研究發(fā)現(xiàn)草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）經(jīng)硫丹染毒后，血紅細(xì)胞的核異常率隨著硫丹濃度的升高而呈上升趨勢(shì)。