張明 鄒云川 丁重帥 夏龍

摘要 [目的]研究幾種楚雄地區(qū)常見中藥材提取物的抑菌活性。[方法]選取了云南省楚雄地區(qū)4種常見中藥材，采用不同溶劑，選用回流提取，測(cè)定提取物抑菌活性。[結(jié)果]山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這4種藥用植物采用50%乙醇加熱回流提取3次所得產(chǎn)物抑菌效果最好，對(duì)4種細(xì)菌和2種真菌均有不同程度的抑制作用。[結(jié)論]這幾種藥材來源廣、提取方便、抑菌效果好，可為進(jìn)一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 藥用植物；提取物；抑菌活性

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）34-166-02

云南省是世界上藥用植物資源分布最多的區(qū)域之一，楚雄彝族自治州地處云南省中部，楚雄州境內(nèi)氣候?qū)賮啛釒Ъ撅L(fēng)氣候，但由于山高谷深，氣候垂直變化明顯。因?yàn)楠?dú)特的地理位置和氣候條件，楚雄州的動(dòng)植物資源豐富，楚雄州有林地面積11.54萬hm2，森林面積10.89萬hm2，森林覆蓋率達(dá)39.5%。楚雄州的植物種類有6 000多種，主要是森林、中草藥、野生食用菌等，其中藥用植物資源豐富，近年來逐漸成為經(jīng)濟(jì)發(fā)展熱門產(chǎn)業(yè)[1-2]。

山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這幾種藥用植物在楚雄州內(nèi)大部分地區(qū)都有生長，一直作為地方性傳統(tǒng)藥材使用，前人多從藥用角度進(jìn)行研究，也有一些藥理作用文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，但對(duì)這幾類藥材的抑菌活性等研究未見報(bào)道，因此筆者采用帶藥平板涂布法和菌絲生長速率法分別測(cè)定了這幾種藥材對(duì)病原微生物的生物活性，為這些傳統(tǒng)藥用植物進(jìn)一步綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材。山藿香Teucrium viscidum Bl.var.viscidum；水金鳳Impatiens nolitangere L.；繡球防風(fēng) Leucas ciliata Benth.；透骨草 Phryma leptostachya L.subsp.asiatica（Hara）Kitamura；所有藥材均采自楚雄周邊地區(qū)，自然曬干，全株粉碎。

1.1.2 菌種。細(xì)菌：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌；真菌：白色念珠菌、星狀石膏樣毛癬菌、紅色毛癬菌。

1.1.3 培養(yǎng)基。細(xì)菌培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，真菌培養(yǎng)基為沙氏培養(yǎng)基。

1.1.4 儀器。恒溫干燥箱、植物粉碎機(jī)、超聲波清洗儀、恒溫電熱套、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、手持壓力滅菌鍋、雙人單面無菌操作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 供試品處理。分別稱取山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)和透骨草各3份，每份48 g，編號(hào)1#～12#，裝入圓底燒瓶；1#、4#、7#、10#加入35%乙醇，2#、5#、8#、11#加入50%乙醇，3#、6#、9#、12#加入蒸餾水，加熱回流提取3次，3次回流固液比分別為1∶12、1∶10、1∶8，回收3次溶液，濃縮提取液，轉(zhuǎn)移至容量瓶，定容至100 ml，最終得3份山藿香提取液（1#、2#、3#）、3份水金鳳提取液（4#、5#、6#）、3份繡球防風(fēng)提取液（7#、8#、9#）、3份透骨草提取液（10#、11#、12#），測(cè)抑菌情況。

1.2.2 藥材提取液對(duì)致病細(xì)菌抑菌效果測(cè)定。采用帶藥平板涂布法[6]進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2.1 帶藥平板制備。將供試菌種在營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)，備用。將藥材提取液滅菌，備用。無菌條件下，吸取1 ml提取液（對(duì)照組用無菌水代替）與9 ml熱熔的培養(yǎng)基混勻，使供試培養(yǎng)基藥液濃度為相當(dāng)于投藥量0.048 g/ml；倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，制成薄厚均勻的帶藥平板培養(yǎng)基備用。

1.2.2.2 接種。用接種環(huán)挑取少量供試菌到50 ml的無菌水中，制成濃度約106～107 cfu/ml的菌懸液。吸取100 μl菌懸液至對(duì)照及帶藥平板培養(yǎng)基，用滅菌的涂布棒將菌液涂布均勻，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.2.2.3 培養(yǎng)觀察。置于27±1 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于24、48 h觀察結(jié)果，平板上只要有菌落生長，無論菌落大小均用“﹢”表示，平板上完全沒有菌落生長，用“﹣”表示。

1.2.3 藥材提取液對(duì)真菌抑菌效果測(cè)定。白色念珠菌抑菌情況測(cè)定，培養(yǎng)基改為沙氏培養(yǎng)基，其余方法與細(xì)菌抑菌活性測(cè)定相同方法。星狀石膏樣毛癬菌、紅色毛癬菌采用菌絲生長速率法[7]進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3.1 帶藥平板制備。將供試菌種在沙氏培養(yǎng)基平板上擴(kuò)大培養(yǎng)，備用。將藥材提取液滅菌，備用。無菌條件下，吸取1 ml藥液（對(duì)照組用無菌水代替）與9 ml熱熔的培養(yǎng)基混勻，使供試培養(yǎng)基藥液濃度為相當(dāng)于投藥量0.048 g/ml；倒入直徑為9 cm的玻璃培養(yǎng)皿中，制成薄厚均勻的帶藥平板培養(yǎng)基備用。

1.2.3.2 接種。用直徑為0.4 cm的打孔器在已擴(kuò)大培養(yǎng)的供試菌落邊緣切取菌餅，將菌餅接入帶藥培養(yǎng)基上，使有菌絲的一面朝下，每皿接3個(gè)菌餅，呈品字形分布，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.2.3.3 培養(yǎng)觀察。置27±1 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用十字交叉法測(cè)量培養(yǎng)120 h（星狀石膏樣毛癬菌）、148 h（紅毛癬菌）后的菌落直徑，根據(jù)下式求出抑制率：菌落直徑（cm）= 測(cè)量直徑-0.4、抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 采用帶藥平板涂布法抑菌情況

從表1可以得出，4種不同的藥材對(duì)4種細(xì)菌均有抑菌效果，在相當(dāng)于投料量為0.048 g/ml濃度下，對(duì)白色念珠菌無抑菌效果；4種不同的藥材采用不同的溶劑提取，活性有差異；相同條件下，培養(yǎng)24、48 h抑菌效果差異不大，除個(gè)別菌抑菌情況有變化，大部分結(jié)果相同。建議采用48 h抑菌效果作為最終結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 菌絲生長速率法抑菌情況

從表2可以看出，4種不同的藥材對(duì)星狀石膏樣毛癬菌和紅毛癬菌這2種真菌均有不同程度的抑制作用；4種藥材采用3種不同的溶劑提取，50%乙醇為溶劑的組別（2#、5#、8#、11#）比采用其他溶劑（35%乙醇、水）提取的組抑菌效果更好。

3 結(jié)論

通過試驗(yàn)表明，山藿香、水金鳳、繡球防風(fēng)、透骨草這幾種藥用植物采用50%乙醇回流提取3次之后所得提取物生物活性較好，對(duì)4種細(xì)菌和2種真菌均有不同程度的抑制效果。

這幾種藥材在楚雄州境內(nèi)大部分地區(qū)均有生長，來源穩(wěn)定，提取方法簡便，便于大規(guī)模生產(chǎn)用，而提取物的生物活性明顯，可以進(jìn)一步研究，并為綜合開發(fā)利用打下良好基礎(chǔ)。

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