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        龍眼殼總黃酮的HPLC圖譜分析

        2015-10-21 05:12:34韓淑琴李志銳吳麗
        食品研究與開發(fā) 2015年9期
        關(guān)鍵詞:柱層析龍眼蘆丁

        韓淑琴,李志銳,吳麗

        (1.中山職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東中山,528404;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東廣州510642)

        龍眼殼總黃酮的HPLC圖譜分析

        韓淑琴1,李志銳1,吳麗2

        (1.中山職業(yè)技術(shù)學(xué)院,廣東中山,528404;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東廣州510642)

        采用HPLC法以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照品,對(duì)經(jīng)超聲-微波協(xié)同萃取,并且經(jīng)過AB-8大孔徑樹脂柱層析純化的龍眼殼總黃酮進(jìn)行定性分析。色譜柱條件為:C18柱,流動(dòng)相為甲醇-水(25∶75),波長(zhǎng)254 nm,流速0.5 mL/min,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)論:龍眼殼樣品中總黃酮含量達(dá)23.43 mg/g,龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁,在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達(dá)到63.95%。

        龍眼殼;總黃酮;高效液相色譜

        龍眼(longgan)俗稱“桂圓”,是我國(guó)南亞熱帶名貴特產(chǎn),歷史上有南“桂圓”北“人參”之稱[1]。在我國(guó)龍眼主要分布于廣西、廣東、福建等省。中山市位于中國(guó)華南地區(qū)廣東省珠江三角洲中南部,珠江出??谖靼?,中山市適宜龍眼生長(zhǎng),有5 000多畝的龍眼種植面積。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)龍眼的研究主要集中在龍眼肉和龍眼核的活性成分方面,對(duì)龍眼殼的研究較少,且尚且停留在龍眼殼總體成分的研究階段。有文獻(xiàn)表明龍眼的莖、葉、花、果、殼中均含有豐富的黃酮類物質(zhì)[2-4],本文采用高效液相法對(duì)經(jīng)大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮進(jìn)行分析。

        1材料與方法

        1.1 材料與試劑

        龍眼殼、AB-8大孔樹脂、無水乙醇、甲醇、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品與生物制品檢定所)等,所用化學(xué)試劑均為分析純。

        1.2 儀器與設(shè)備

        美國(guó)惠普HP-1100高效液相色譜儀;玻璃層析柱;CW-2000型超聲-微波協(xié)同萃取儀:中國(guó)上海新拓微波溶樣測(cè)試技術(shù)有限公司;DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱:上海一恒科學(xué)儀器有限公司;RE-5299型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:上海耀裕儀器。

        1.3 方法

        1.3.1 龍眼殼總黃酮樣品溶液制備

        取市售石峽龍眼的果殼,低溫烘干后粉碎,精確稱取龍眼殼粉末20 g,用70%乙醇溶液,以固液比1∶25的比例浸泡1 h,采用超聲微波協(xié)同萃取法,提取總時(shí)間為60 s,其中超聲微波每作用20 s暫停10 s,提取得到龍眼殼總黃酮粗提物,回收乙醇處理后,將龍眼殼總黃酮粗提物用30%乙醇溶液定容至10 mL,將上述龍眼殼總黃酮溶液通過AB-8大孔徑樹脂進(jìn)行柱層析純化,采用濃度為80%的乙醇溶液30 mL進(jìn)行洗脫,接收洗脫液,洗脫液定容至50 mL,得龍眼殼總黃酮初步純化樣品,冷藏備用。

        1.3.2 高效液相色譜柱條件

        色譜柱條件為:C18柱,流動(dòng)相為甲醇-水(25∶75),波長(zhǎng)254 nm,流速0.5 mL/min,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。

        1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

        1.3.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

        稱取50mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,用適量30%甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶,搖勻。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0、2.0、4.0、5.0和7.0 mL至10.0mL碘量瓶中,加30%甲醇稀釋定容至刻度,搖勻,即得0.05、0.1、0.2、0.25和0.35 mg/mL的溶液。

        1.3.3.2 線性關(guān)系考察

        在上述色譜條件下,將各濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別進(jìn)樣2 uL,測(cè)峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。

        1.3.4 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)

        精確吸取經(jīng)微孔濾膜過濾后的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2 μL進(jìn)樣,在上述高效液相色譜條件下分析測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。

        1.3.5 樣品檢測(cè)

        精確吸取經(jīng)微孔濾膜過濾后的龍眼殼總黃酮樣品溶液2 μL進(jìn)樣,在上述高效液相色譜條件下分析測(cè)定龍眼殼總黃酮樣品。

        2結(jié)果與分析

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系

        在實(shí)驗(yàn)設(shè)定色譜條件下,分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)各濃度標(biāo)樣所得峰面積。則以峰面積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)而計(jì)算回歸方程。

        蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:Y=1 347.3X-27.63,R2= 0.999 1。則由數(shù)據(jù)可以分析得出標(biāo)準(zhǔn)品具有良好線性關(guān)系。

        2.2 標(biāo)準(zhǔn)品與樣品HPLC測(cè)定分析

        根據(jù)2.1中的回歸方程計(jì)算得龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁濃度和含量結(jié)果見表1。

        由圖1、2可以確定龍眼殼總黃酮中主要成分為蘆丁,且經(jīng)AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后樣品中蘆丁含量達(dá)63.95%,濃度達(dá)9.37 mg/mL,則根據(jù)1.3.1中龍眼殼用量20 g及所得初步純化龍眼殼總黃酮樣品液體積50 mL,計(jì)算可得龍眼殼樣品中總黃酮含量為23.43 mg/g。

        圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖Fig.1Rutin standard HPLC Atlas

        圖2 龍眼殼黃酮樣品HPLC色譜圖Fig.2Longgan shell flavones HPLC Atlas

        表1 樣品的HPLC檢測(cè)結(jié)果Table 1The HPLC test resuLts of the sample

        3結(jié)論

        采用HPLC法對(duì)經(jīng)AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮提取液中有效成分進(jìn)行定性定量分析。在色譜柱為C18柱,流動(dòng)相為甲醇-水(25∶75),波長(zhǎng)254 nm,流速0.5 mL/min,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明:龍眼殼樣品中總黃酮含量達(dá)23.43 mg/g,龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁,在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達(dá)到63.95%。

        [1]劉玉英.我國(guó)的龍眼[J].中國(guó)土特產(chǎn),2000(2):25

        [2]葉自行,許建楷.龍眼高產(chǎn)技術(shù)問答[M].廣州:廣州科技出版社,2001:56

        [3]廖娜.龍眼科化學(xué)成分的研究.碩士論文[D].南寧:廣西師范大學(xué),2006

        [4]陸海峰,趙進(jìn),李琳,等.超聲波提取龍眼葉總黃酮及其鑒別[J].微量元素與健康研究,2007,24(4):48-49

        Analyse the Longan Shell Total Flavanone by HPLC

        HAN Shu-qin1,LI Zhi-rui1,WU Li2
        (1.Zhongshan Polytechnic,Zhongshan 528404,Guangdong,China;2.South China AgricuLtural University College of Food Science,Guangzhou 510642,Guangdong,China)

        Using HPLC method with rutin standard as the

        ubstance to analyse the longan shell total flavanone sample which extracted by ultrasonic-microwave way and purified by AB-8 Large aperture resin column.The data of the chromatographic column were:C18 column,Mobile phase is methanol:water(25∶75),Wavelength 254 nm,flow rate 0.5 mL/min,room temperature,Sample size:2 uL.Result:the total flavanone concentration is 23.43 mg/g in longan shell sample,and Rutin is the main component of the longan shell total flavanone,the concentration reached 63.95%.

        longan shell;total flavanone;HPLC

        10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.027

        2014-01-14

        中山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):20123A340)

        韓淑琴(1980—),女(漢),講師,碩士,主要研究方向:天然產(chǎn)物有效成分提取與應(yīng)用。

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