韓淑琴，李志銳，吳麗

（1.中山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東中山，528404；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州510642）

龍眼殼總黃酮的HPLC圖譜分析

韓淑琴1，李志銳1，吳麗2

（1.中山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東中山，528404；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州510642）

采用HPLC法以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照品，對(duì)經(jīng)超聲-微波協(xié)同萃取，并且經(jīng)過AB-8大孔徑樹脂柱層析純化的龍眼殼總黃酮進(jìn)行定性分析。色譜柱條件為：C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水（25∶75），波長(zhǎng)254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)論：龍眼殼樣品中總黃酮含量達(dá)23.43 mg/g，龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁，在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達(dá)到63.95%。

龍眼殼；總黃酮；高效液相色譜

龍眼（longgan）俗稱“桂圓”，是我國(guó)南亞熱帶名貴特產(chǎn)，歷史上有南“桂圓”北“人參”之稱［1］。在我國(guó)龍眼主要分布于廣西、廣東、福建等省。中山市位于中國(guó)華南地區(qū)廣東省珠江三角洲中南部，珠江出?？谖靼?，中山市適宜龍眼生長(zhǎng)，有5 000多畝的龍眼種植面積。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)龍眼的研究主要集中在龍眼肉和龍眼核的活性成分方面，對(duì)龍眼殼的研究較少，且尚且停留在龍眼殼總體成分的研究階段。有文獻(xiàn)表明龍眼的莖、葉、花、果、殼中均含有豐富的黃酮類物質(zhì)［2-4］，本文采用高效液相法對(duì)經(jīng)大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮進(jìn)行分析。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

龍眼殼、AB-8大孔樹脂、無水乙醇、甲醇、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品與生物制品檢定所）等，所用化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

美國(guó)惠普HP-1100高效液相色譜儀；玻璃層析柱；CW-2000型超聲-微波協(xié)同萃取儀：中國(guó)上海新拓微波溶樣測(cè)試技術(shù)有限公司；DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；RE-5299型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海耀裕儀器。

1.3 方法

1.3.1 龍眼殼總黃酮樣品溶液制備

取市售石峽龍眼的果殼，低溫烘干后粉碎，精確稱取龍眼殼粉末20 g，用70%乙醇溶液，以固液比1∶25的比例浸泡1 h，采用超聲微波協(xié)同萃取法，提取總時(shí)間為60 s，其中超聲微波每作用20 s暫停10 s，提取得到龍眼殼總黃酮粗提物，回收乙醇處理后，將龍眼殼總黃酮粗提物用30%乙醇溶液定容至10 mL，將上述龍眼殼總黃酮溶液通過AB-8大孔徑樹脂進(jìn)行柱層析純化，采用濃度為80%的乙醇溶液30 mL進(jìn)行洗脫，接收洗脫液，洗脫液定容至50 mL，得龍眼殼總黃酮初步純化樣品，冷藏備用。

1.3.2 高效液相色譜柱條件

色譜柱條件為：C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水（25∶75），波長(zhǎng)254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

1.3.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

稱取50mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用適量30%甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶，搖勻。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0、2.0、4.0、5.0和7.0 mL至10.0mL碘量瓶中，加30%甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得0.05、0.1、0.2、0.25和0.35 mg/mL的溶液。

1.3.3.2 線性關(guān)系考察

在上述色譜條件下，將各濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別進(jìn)樣2 uL，測(cè)峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

1.3.4 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)

精確吸取經(jīng)微孔濾膜過濾后的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2 μL進(jìn)樣，在上述高效液相色譜條件下分析測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3.5 樣品檢測(cè)

精確吸取經(jīng)微孔濾膜過濾后的龍眼殼總黃酮樣品溶液2 μL進(jìn)樣，在上述高效液相色譜條件下分析測(cè)定龍眼殼總黃酮樣品。

2結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系

在實(shí)驗(yàn)設(shè)定色譜條件下，分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)各濃度標(biāo)樣所得峰面積。則以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計(jì)算回歸方程。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=1 347.3X-27.63，R2= 0.999 1。則由數(shù)據(jù)可以分析得出標(biāo)準(zhǔn)品具有良好線性關(guān)系。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品與樣品HPLC測(cè)定分析

根據(jù)2.1中的回歸方程計(jì)算得龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁濃度和含量結(jié)果見表1。

由圖1、2可以確定龍眼殼總黃酮中主要成分為蘆丁，且經(jīng)AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后樣品中蘆丁含量達(dá)63.95%，濃度達(dá)9.37 mg/mL，則根據(jù)1.3.1中龍眼殼用量20 g及所得初步純化龍眼殼總黃酮樣品液體積50 mL，計(jì)算可得龍眼殼樣品中總黃酮含量為23.43 mg/g。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖Fig.1Rutin standard HPLC Atlas

圖2 龍眼殼黃酮樣品HPLC色譜圖Fig.2Longgan shell flavones HPLC Atlas

表1 樣品的HPLC檢測(cè)結(jié)果Table 1The HPLC test resuLts of the sample

3結(jié)論

采用HPLC法對(duì)經(jīng)AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮提取液中有效成分進(jìn)行定性定量分析。在色譜柱為C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水（25∶75），波長(zhǎng)254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為2 uL的條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：龍眼殼樣品中總黃酮含量達(dá)23.43 mg/g，龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁，在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達(dá)到63.95%。

［1］劉玉英.我國(guó)的龍眼［J］.中國(guó)土特產(chǎn)，2000（2）：25

［2］葉自行，許建楷.龍眼高產(chǎn)技術(shù)問答［M］.廣州：廣州科技出版社，2001：56

［3］廖娜.龍眼科化學(xué)成分的研究.碩士論文［D］.南寧：廣西師范大學(xué)，2006

［4］陸海峰，趙進(jìn)，李琳，等.超聲波提取龍眼葉總黃酮及其鑒別［J］.微量元素與健康研究，2007，24（4）：48-49

Analyse the Longan Shell Total Flavanone by HPLC

HAN Shu-qin1，LI Zhi-rui1，WU Li2
（1.Zhongshan Polytechnic，Zhongshan 528404，Guangdong，China；2.South China AgricuLtural University College of Food Science，Guangzhou 510642，Guangdong，China）

Using HPLC method with rutin standard as the

ubstance to analyse the longan shell total flavanone sample which extracted by ultrasonic-microwave way and purified by AB-8 Large aperture resin column.The data of the chromatographic column were：C18 column，Mobile phase is methanol：water（25∶75），Wavelength 254 nm，flow rate 0.5 mL/min，room temperature，Sample size：2 uL.Result：the total flavanone concentration is 23.43 mg/g in longan shell sample，and Rutin is the main component of the longan shell total flavanone，the concentration reached 63.95%.

longan shell；total flavanone；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.027

2014-01-14

中山市科技計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：20123A340）

韓淑琴（1980—），女（漢），講師，碩士，主要研究方向：天然產(chǎn)物有效成分提取與應(yīng)用。