許福泉，朱強，郭雷，趙雨

（淮海工學(xué)院江蘇省海洋生物重點建設(shè)實驗室，江蘇連云港222005）

野菠菜葉總黃酮提取工藝

許福泉，朱強，郭雷，趙雨

（淮海工學(xué)院江蘇省海洋生物重點建設(shè)實驗室，江蘇連云港222005）

為探索野菠菜黃酮提取工藝，提高總黃酮提取率。利用正交試驗考查不同粒度、料液比、乙醇濃度、提取時間、提取溫度下總黃酮濃度，得到最佳提取工藝為：粒度40目、料液比1∶30（g/mL）、提取時間1 h、乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)75%，在該工藝下，野菠菜總黃酮得率為3.216 mg/mL。

野菠菜；總黃酮；提取工藝

野菠菜（Rumex maritimus L.）為蓼科（Polygonaceae）酸模屬（Rumex）植物，廣泛分布于江蘇省連云港市灘涂地區(qū)，具有悠久的藥用和食用歷史。酸模屬全球約有150種，我國有26種，兩個變種［1］。16種被記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等典籍中，其中羊蹄、巴天酸模等具有清熱解毒、通便殺蟲等功效，民間常用作“土大黃”［2-3］。酸模植物中黃酮含量較高、結(jié)構(gòu)變化小，目前已分離得到34個單體化合物［4-5］，具有抗菌［6］、抗腫瘤［7］等多種藥理活性。雖然酸模屬植物研究報道較多，但野菠菜目前報道較少，僅有關(guān)于其提取物止瀉作用報道［8］，尚少見關(guān)于其黃酮成分、提取工藝、活性的研究報道，更未見灘涂高鹽環(huán)境下野菠菜黃酮研究報道。基于活性黃酮成分進(jìn)行提取工藝研究不僅有助于野菠菜藥用開發(fā)，也能為相關(guān)保健食品研究提供參考［9-10］。本文擬利用正交試驗優(yōu)化野菠菜葉總黃酮提取工藝，為灘涂植物野菠菜高效利用提供實驗參考。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

野菠菜2013年4月采自江蘇連云港灘涂，由淮海工學(xué)院海洋學(xué)院朱強實驗師鑒定為蓼科酸模屬植物野菠菜（Rumex maritimus L.），取干燥葉片作為實驗材料；去離子水由Millipore（美國）自制；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自國藥集團(tuán)；無水乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁等均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Lambda35紫外—可見分光光度計：美國Perkin Elmer公司；R3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士Buchi公司；EL104電子分析天平：法國Mettler Toledo公司；DZF-6020真空干燥箱：上海飛越實驗儀器有限公司。

1.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

按文獻(xiàn)［11］方法建立蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 樣品提取

1.4.1 脫葉綠素

樣品按料液比1∶10（g/mL）加乙醚冷浸30 min后，取出，通風(fēng)條件下放置10 min，乙醚揮發(fā)完全后待用。

1.4.2 總黃酮提取

野菠菜葉40℃下烘干、粉碎后經(jīng)不同型號篩處理，收集相應(yīng)粒度組分并存放于干燥器中。準(zhǔn)確稱取不同粒度原料5.0 g按料液比不同加入溶劑，稱重后熱回流提取，提取結(jié)束加溶劑補足失重后按料液比不同分別量取20、25或30 mL提取液，45℃減壓回收溶劑（試驗因素水平見表1）。浸膏超聲溶解后定容于25 mL容量瓶中，作為待分析樣品。

表1 正交試驗L9（34）因素水平表Table 1Factors and their levels in L9（34）orthogonal array design

1.5 單因素試驗

固定其他因素水平情況下，分別研究粒度、料液比、提取時間、乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)對野菠菜總黃酮提取的影響。

2結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

蘆丁濃度C與吸光度A的線性回歸方程為：A= 7.984 1X+0.000 4，r=0.999 2。

2.2 單因素試驗結(jié)果

粒度40目最適合進(jìn)行野菠菜黃酮提?。涣弦罕仍礁咴接欣邳S酮提取，因此選擇1∶30（g/mL）；而提取時間增加，總黃酮濃度反而小幅下降，提取1 h效果較好；另外，乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)75%時，最有利于總黃酮提取。單因素試驗結(jié)果見圖1。

圖1 單因素對總黃酮濃度的影響Fig.1Effect of extraction process on total flavonoids

2.3 正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果見表2。

表2 L9（34）正交試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2L9（34）orthogonal array design arrangement and experimental results

由表2可知，影響總濃度因素的大小順序為D＞A＞C＞B，即乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)＞粒度＞料液比＞＞提取時間，K值分析可知，最佳組合水平為A2B1C3D2。

2.4 驗證性實驗

根據(jù)正交試驗結(jié)果確定最佳組合水平為A2B1C3D2，即粒度40目，料液比1∶30（g/mL），提取時間1 h，乙醇濃度75%，按上述水平提取三次后得到總黃酮濃度的平均值為3.216 mg/mL，其總濃度高于正交試驗結(jié)果。

3結(jié)論

野菠菜在連云港灘涂分布廣泛，為建立野菠菜總黃酮提取工藝，本實驗以總黃酮濃度為指標(biāo)，通過正交試驗得到野菠菜總黃酮提取工藝：粒度40目，提取時間1h，料液比1∶30（g/mL），乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)75%。這是首次關(guān)于野菠菜總黃酮提取工藝的研究報道，這能為野菠菜應(yīng)用研究提供參考。

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Process Optimization for Extraction of Flavonoids from Leaves of Rumex maritimus

XU Fu-quan，ZHU Qiang，GUO Lei，ZHAO Yu
（Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology，Huaihai Institute of Technology，Lianyungang 222005，Jiangsu，China）

To develop a optimal process for improving the total flavonoids concentration from Rumex maritimus，the effects of granularity，ethanol concentration，soaking time and material-liquid ratio on extraction rate of total flavonoids were investigated by orthogonal array design methods.The optimal extraction processing parameters were granularity of 40 mush，material-liquid ratio of 1∶30（g/mL），extraction time of 2 h and ethanol concentration of 75%，and the yield rate was 3.216 mg/mL under this extraction condition.

Rumex maritimus；total flavonoid；extraction process

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.016

2014-10-25

江蘇省灘涂資源與環(huán)境保護(hù)重點實驗室課題（JLCBE13001）；淮海工學(xué)院校課題（Z2012023）

許福泉（1979—），男（漢），講師，博士，研究方向：天然活性成分。