邱萍，馮煦，單宇，印敏，趙友誼，王鳴，王奇志

（江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，江蘇南京210014）

分光光度法測(cè)定堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量

邱萍，馮煦，單宇，印敏，趙友誼，王鳴，王奇志*

（江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，江蘇南京210014）

考察不同處理方法下堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量。分別以蘆丁、齊墩果酸為對(duì)照品，用紫外分光光度法對(duì)堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定分析。結(jié)果表明，三種不同處理方法所得的堿蓬三個(gè)部位，總黃酮含量均大于20%，其中，堿蓬經(jīng)純水提取后，濃縮液過(guò)聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高為36.51%，而堿蓬80%乙醇提取后，濃縮液過(guò)聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最低為22.66%。堿蓬80%乙醇提取后，濃縮液依次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測(cè)的總皂苷含量均在7%左右。不同處理方法對(duì)堿蓬中總黃酮、總皂苷含量有一定影響。

堿蓬；紫外分光光度法；化學(xué)成分；總黃酮；總皂苷

堿蓬Suaeda glauce（Bge.）Bge.為藜科Chenopodiaceae堿蓬屬Suaeda Forsk.ex Scop.一年生草本真鹽植物。主要分布于新疆、山東、河北、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古及甘肅等地的鹽堿荒漠和沿海灘涂［1］。它是目前改良和綠化鹽堿土壤的首選物種，又是沿海潮間帶的先鋒植物，資源相當(dāng)豐富。研究發(fā)現(xiàn)，堿蓬中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥用成分，目前已逐漸發(fā)展成為藥食兩用的佳品。堿蓬種子和莖葉中營(yíng)養(yǎng)成分完整而豐富，其種子脂肪含量占干物質(zhì)的36.5%高于大豆，不飽和脂肪酸占90%、亞油酸占70%、亞麻酸占6.08%；鮮嫩莖葉的蛋白質(zhì)含量占干物質(zhì)的40%；并含有豐富的維生素和微量元素，其鈣、磷、鐵、核黃素含量高于菠菜、番茄、胡蘿卜等蔬菜；維生素含量遠(yuǎn)高于螺旋藻，含硒量較一般植物高10倍左右；堿蓬種子和莖葉的蛋白質(zhì)中人體必需氨基酸含量與世界衛(wèi)生組織給出的完全蛋白質(zhì)指標(biāo)相當(dāng)接近，優(yōu)于螺旋藻、大豆以及雞蛋中氨基酸的組成［2］。可見(jiàn)，其食用、保健、藥用價(jià)值非常大。

黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)廣泛存在于植物體內(nèi)的天然產(chǎn)物，研究表明，具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和藥理活性［3-5］。皂苷是很強(qiáng)的表面活性劑，對(duì)心臟有刺激作用；又是很強(qiáng)的溶血?jiǎng)?，有些皂苷還具有抗菌、解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌［6］等有價(jià)值的生物活性。在過(guò)去的研究中證明堿蓬中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物，而所含的皂苷類(lèi)化合物目前研究較少，本文用紫外分光光度法［7］對(duì)不同處理?xiàng)l件下的堿蓬總黃酮［8］、總皂苷進(jìn)行測(cè)定。

1材料與儀器

堿蓬：2013年8月購(gòu)自山東省壽光市，經(jīng)江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所袁昌齊研究員鑒定為堿蓬（Suaeda glauce），標(biāo)本現(xiàn)存放于江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，編號(hào)SG201308。

UV-2501PC：島晶；STANO-BY分析天平：Shi madzu；HH-S型水浴鍋：鞏義市英峪予華儀器廠；GZX-9070 MBE數(shù)據(jù)鼓風(fēng)干燥箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；KH5200DB型數(shù)控超聲波清洗器：昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；架盤(pán)天平：江蘇常熟衡器廠；Heating Bath B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、Vacuum Pump V-700：（BUCHI）。

2方法

2.1 堿蓬供試品的制備

1）1 kg堿蓬地上部分干藥材加10倍量（料液比= 1 kg/10 L）的純水加熱回流提取3次，提取時(shí)間分別是3、2、2 h，合并3次提取液并濃縮至小體積；上樣于聚酰胺柱，先用純水洗脫除鹽，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮，干燥得成品A，備用。

2）250 g堿蓬地上部分干藥材加10倍量［（料液比為1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加熱回流提取3次，提取時(shí)間分別是2、1、1 h，合并3次提取液并濃縮至無(wú)醇味；依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮，干燥得成品B，備用。

3）1 kg堿蓬地上部分干藥材加10倍量［料液比為1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加熱回流提取3次，提取時(shí)間分別是2、1、1 h，合并提取液并濃縮至無(wú)醇味；上樣于聚酰胺柱，用純水洗脫除鹽，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，濃縮，干燥得成品C，備用。

4）分別精密稱(chēng)取上述A、B、C 3份樣品100 mg于25 mL容量瓶中，60%乙醇溶解并定容至刻度，備用。

2.2總黃酮含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品11.655 0 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%乙醇適量，超聲處理使其溶解，放冷加60%乙醇至刻度，得蘆丁對(duì)照品溶液，冷藏，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備

分別量取0.3 mL的2.1.4中得到三份樣品溶液，加60%乙醇5.7 mL（稀釋20倍），制的供試品溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密量取對(duì)照品溶液0、2、4、6、10 mL至25 mL容量瓶，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，避光放置6 min；加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，避光放置6 min；加4%氫氧化鈉溶液10 mL，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，避光放置15 min。以相應(yīng)溶劑為空白，在500 nm處測(cè)定吸光度。以分光光度計(jì)在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程A=0.000 5C+0.002（r=0.999 7），結(jié)果表明蘆丁濃度在0～1 160.55 μg/mL線性關(guān)系良好，見(jiàn)圖1。

圖1 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 1Total flavonoids standard curve

2.2.4 供試品溶液總黃酮含量的測(cè)定

吸取6 mL供試品溶液，按上述方法進(jìn)行操作，測(cè)得A值，按對(duì)照品比較法計(jì)算被測(cè)供試品溶液的濃度，并求出其總黃酮含量。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，吸光度的RSD為0.15%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，于室溫分別放置0、3、6、12、36、48 h測(cè)定，吸光度的RSD為3.13%。

2.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同批樣品5份，按2.2.2方法制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算，總黃酮的RSD為0.645%。

2.3 總皂苷的含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品5.6 mg，用甲醇溶解并定容至2 mL，搖勻，既得濃度為2.8 mg/mL的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、100、200、300、400、500、600 μL于具塞試管中，70℃水浴上蒸干或吹干，于每個(gè)試管中加新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，置60℃水浴上加熱15 min，冰水浴冷卻，加冰醋酸5 mL，搖勻，以分光光度計(jì)在560 nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度值A(chǔ)，以A為縱坐標(biāo)，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程A= 0.000 7C+0.014 9（r=0.999 4），結(jié)果表明齊墩果酸在28 μg/mL～168 μg/mL線性關(guān)系良好，見(jiàn)圖2。

圖2 總皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 2Total saponins standard curve

2.3.3 供試品總皂苷含量的測(cè)定

吸取100μL樣品溶液，按上述方法進(jìn)行操作，測(cè)得A值，每個(gè)樣品各取一分測(cè)定，并計(jì)算其總皂苷含量。

2.3.4 精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取測(cè)試樣品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，吸光度的RSD為0.35%。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，于室溫分別放置0、3、6、12、36、48 h測(cè)定，吸光度的RSD為3.08%。

2.3.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同批樣品5份，按2.3.2方法制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算，總黃酮的RSD為0.546%。

3結(jié)果

3.1 不同處理方法下堿蓬中總黃酮、總皂苷含量比較通過(guò)紫外分光光度法對(duì)不同處理?xiàng)l件下堿蓬中總黃酮、總皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表1。

表1 總黃酮、總皂苷含量比較Table 1The content of total flavonoids and total saponins

從表1可以看出，堿蓬地上部分經(jīng)純水提取后，上樣于聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高，而堿蓬地上部分經(jīng)80%乙醇提取后，上樣于聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最低，但是3種不同處理方法所得的A、B、C 3個(gè)部位，總黃酮含量均大于20%。堿蓬80%乙醇提取后，經(jīng)石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測(cè)的總皂苷含量均在7%左右。

4討論

1）總黃酮含量的比較分析：通過(guò)對(duì)不同處理方法下堿蓬中總黃酮含量的測(cè)定可知，堿蓬地上部分經(jīng)純水加熱回流提取后，濃縮上聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位總黃酮含量最高為36.51%，堿蓬80%乙醇加熱回流提取后，濃縮至無(wú)醇味，乙酸乙酯萃取部位總黃酮含量略低為31.98%，堿蓬80%乙醇加熱回流提取后，濃縮上聚酰胺柱，60%乙醇洗脫部位黃酮含量最低為22.66%。3種不同處理方法得到的堿蓬中總黃酮含量均在20%以上，因此表明，堿蓬中含有大量的黃酮類(lèi)成分。

2）總皂苷含量的比較分析：通過(guò)對(duì)不同處理方法下堿蓬中總皂苷含量的測(cè)定可知，堿蓬地上部分經(jīng)80 %乙醇加熱回流提取后，經(jīng)石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位總皂苷含量最高為13.18%，其它兩種處理方法所測(cè)的總皂苷含量均在7%左右。文獻(xiàn)中報(bào)道的有關(guān)堿蓬中皂苷類(lèi)成分相對(duì)較少，而本法測(cè)得的堿蓬中總皂苷含量并不低。

3）此外，藥理研究表明，堿蓬具有良好的降脂、抗衰老、保健等作用，初步推測(cè)這些藥理活性可能與其含有豐富的黃酮類(lèi)成分有關(guān)，因此，可對(duì)堿蓬中黃酮類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究，同時(shí)設(shè)計(jì)一系列藥理實(shí)驗(yàn)，尋找其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，這將有望開(kāi)發(fā)出新型降脂、抗衰老保健藥物等。關(guān)于堿蓬屬植物中皂苷類(lèi)成分的研究相對(duì)較少，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)方法所測(cè)得的總皂苷含量，我們將有望從堿蓬中分離得到不同類(lèi)型的皂苷單體并進(jìn)一步通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其生物活性。

［1］中科院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第二十五卷，第二分冊(cè)）［M］.北京：科學(xué)出版社，1979

［2］張學(xué)杰，樊守金，李法曾.中國(guó)堿蓬資源的開(kāi)發(fā)利用研究狀況［J］.中國(guó)野生植物資源，2003，22（2）：1-3

［3］趙宇明.分光光度法快速測(cè)定水產(chǎn)品中組胺的含量［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2014，35（8）：94-96

［4］張建揚(yáng)，李明慧，徐連明，等.堿蓬籽油對(duì)小鼠血脂及免疫功能的影響［J］.職業(yè)與健康，2008，24（15）：1529-1530

［5］鄭維發(fā)，陳才法，李巍.鹽地堿蓬幼苗和種子氯仿/甲醇提取物的化學(xué)組成及其抗炎作用（英）［J］.中成藥，2003，25（12）：997-1002

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Determination of Total Flavonoids and Saikosaponins in Suaeda glauce（Bge.）Bge by UV-Vis Spectrophotometry

QIU Ping，F(xiàn)ENG Xu，SHAN Yu，YIN Min，ZHAO You-yi，WANG Ming，WANG Qi-zhi*
（Jiangsu Center for Reaserch&Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China）

To study the content of total flavonoids and saikosaponins in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.The content of total flavonoid and saikosaponin was determined by uv-visible spectrophotometry and Rutin and oleanolic acid as reference.The total flavonoids in the three different parts of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were all more than 20%，in which，the total flavonoids in the 60%ethanol elution of the pure water extraction of the S.glauce from the polyamide column was up to 36.51%，while the total flavonoids in the 60% ethanol elution of The 80%ethanol extraction of the S.glauce from the polyamide column was 22.66%.The 80 %ethanol extraction of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were extraced followed by petroleum ether and ethyl acetate，the content of total saikosaponin in the ethyl acetate was up to 13.18%，the content of total saikosaponin in other two parts were measured at about 7%.The different treatment methods influences the content of total flavonoid and saikosaponin in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.

Suaeda glauce（Bge.）Bge.；UV spectorphotometry；chemical constituents；total flavoniond；total saikosaponin

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.015

2014-08-12

江蘇省鹽土生物資源研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放研究課題項(xiàng)目（JKLBS2012011）

邱萍（1987—），女（漢），在讀研究生，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)。

*通信作者：王奇志，女（漢），副研究員。