葉其旺

慶元縣中醫(yī)院藥劑科，浙江 慶元 323800

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定茵梔黃顆粒中4種成分

葉其旺

慶元縣中醫(yī)院藥劑科，浙江 慶元 323800

目的：建立方法，同時(shí)測(cè)定茵梔黃顆粒中綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷的含量。方法：選用KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱；以乙腈-0.1%甲酸水溶液（37∶63）為流動(dòng)相；流速為1.0 mL/min；柱溫為35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)程序：0～7.5 min為350 nm（綠原酸）、7.5～14 min為238 nm（梔子苷）、14～20 min為360 nm（金絲桃苷）、20～25 min為280 nm（黃芩苷）。結(jié)果：綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷均具有良好的線性關(guān)系，線性范圍分別為：0.3424～5.136 μg、0.276～4.14 μg、0.184～2.76 μg、2.48～37.2 μg；4種成分的平均加樣回收率分別為98.1%（RSD=0.71%）、98.1%（RSD=1.07%）、98.0%（RSD= 1.14%）、97.6%（RSD=0.95%）。結(jié)論：本含量測(cè)定方法準(zhǔn)確高效，簡(jiǎn)便快速，適用于茵梔黃顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

茵梔黃顆粒；綠原酸；梔子苷；金絲桃苷；黃芩苷；高效液相色譜法（HPLC）

茵梔黃顆粒是由茵陳提取物、梔子提取物、黃芩提取物和金銀花提取物為主要原料制成的顆粒，具有清熱解毒、利濕退黃等功效，常用于肝膽濕熱所致的黃疸，對(duì)新生兒生理性和病理性黃疸具有較好的療效［1～2］。茵梔黃顆粒多以黃芩苷和梔子苷的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，略有不足，因此，為更全面評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量，本試驗(yàn)建立方法，對(duì)制劑中的綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。

1　儀器與試藥

1.1儀器安捷倫1260型高效液相色譜儀；檢測(cè)器G1314B；四元泵 G1311C；柱溫箱 G1316A；工作站G2170BA；AB265-S電子分析天平（梅特勒）；Millipore Simplicity型超純水器（Millipore）；KQ-250E型超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥對(duì)照品綠原酸（110753-201415）、梔子苷（110749-201316）、金絲桃苷（111521-201406）和黃芩苷（110715-201318）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院（供含量測(cè)定用）；色譜純乙腈、甲酸，分析純甲醇購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，水為超純水；茵梔黃顆粒（魯南厚普制藥有限公司，批號(hào)：00914055、00914056、00914057）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件［3～5］色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）柱；流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（37∶63）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)程序：0～7.5 min為350 nm（綠原酸）、7.5～14 min為238 nm（梔子苷）、14～20 min為 360 nm（金絲桃苷）、20～25 min為280 nm（黃芩苷）。

2.2溶液的配制

2.2.1混合對(duì)照品溶液分別取綠原酸、梔子苷、金絲桃苷、黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并制成濃度分別為：綠原酸0.1712 mg/mL、梔子苷0.138 mg/mL、金絲桃苷0.092 mg/mL、黃芩苷1.24 mg/mL的混合溶液，即得。

2.2.2供試品溶液［6］取茵梔黃顆粒約1.0 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液依照處方及工藝，自行分別制備不含金銀花提取物，不含黃芩提取物，不含茵陳和金銀花提取物的陰性樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，采集色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1～5。供試品溶液色譜圖中，綠原酸、梔子苷、金絲桃苷、黃芩苷的保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品溶液色譜圖一致，陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)對(duì)照品出峰位置上無(wú)干擾。

2.3.2線性考察取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣2、4、8、15、20、30 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別記錄峰面積。以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行線性回歸，綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷的回歸方程分別為：Y=6.22× 106X+1.95×104，r=0.9997；Y=4.35×106X+3.61×103，r=0.9998；Y=5.08×106X+3.43×103，r=0.9998；Y=3.88× 106X+3.69×103，r=0.9998。結(jié)果表明，綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷分別在0.3424～5.136 μg、0.276～4.14 μg、0.184～2.76 μg、2.48～37.2 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1　對(duì)照品溶液色圖譜

圖2　供試品溶液色譜圖

圖3　金銀花、茵陳提取物陰性對(duì)照?qǐng)D譜

圖4　梔子提取物陰性對(duì)照?qǐng)D譜

圖5　黃芩提取物陰性對(duì)照?qǐng)D譜

2.3.3精密度試驗(yàn)取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷峰面積RSD分別為1.62%、1.84%、1.33%、1.51%，結(jié)果表明儀器具有較好的精密度。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取茵梔黃顆粒，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量和RSD。結(jié)果綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷的平均含量分別為4.25 mg/g（RSD=2.04%）、3.47 mg/g（RSD=2.33%）、2.32 mg/g（RSD=1.94%）、30.2 mg/g（RSD=1.76%），結(jié)果表明本測(cè)定方法具有較好的重復(fù)性。

2.3.5加樣回收率試驗(yàn)見(jiàn)表1。取茵梔黃顆粒6份，各約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液（綠原酸0.2128 mg/mL、梔子苷0.1731 mg/mL、金絲桃苷0.1165 mg/mL、黃芩苷1.5073 mg/mL）10 mL和甲醇15 mL，密塞，稱(chēng)定重量，其余操作按2.2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行，制得供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4樣品含量測(cè)定見(jiàn)表2。取茵梔黃顆粒，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算綠原酸、梔子苷、金絲桃苷和黃芩苷的含量。結(jié)果4種成分的平均含量分別為 4.14 mg/g、3.66 mg/g、2.18 mg/g、33.47 mg/g。

表2　含量測(cè)定結(jié)果　mg/g

3　討論

茵梔黃顆粒含有4種提取物：茵陳提取物、梔子提取物、黃芩提取物、金銀花提取，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定黃芩苷和梔子苷，僅對(duì)黃芩提取物和梔子提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，又選取了綠原酸和金絲桃苷，對(duì)金銀花提取物和茵陳提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，力求更全面評(píng)價(jià)制劑的質(zhì)量。

為提高分析效率，本試驗(yàn)對(duì)4種成分進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定，鑒于4種成分的最大吸收波長(zhǎng)不同，為提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度，本試驗(yàn)采用可變波長(zhǎng)程序，實(shí)現(xiàn)了在最大波長(zhǎng)處對(duì)4種成分進(jìn)行檢測(cè)。因此本試驗(yàn)所建立的含量測(cè)定方法具有準(zhǔn)確高效，簡(jiǎn)便快速的特點(diǎn)。

［1］朱明錦，夏偉，徐之也，等.茵梔黃顆粒治療新生兒病理性黃疸系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（1）：125-127.

［2］胡曉紅，朱慧華，應(yīng)佳佳，等.茵梔黃顆粒對(duì)新生兒病理性黃疸應(yīng)用效果回顧性分析［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（3）：673-674.

［3］何雅君，蘇娟，楊茜，等.HPLC同時(shí)測(cè)定山楂提取物中綠原酸和牡荊素鼠李糖苷的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2012，37（6）：829-831.

［4］卞婷婷，安益強(qiáng)，湯道權(quán)，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定雙黃連凍干粉中11個(gè)成分的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（1）：52-56.

［5］師永清，師永花.HPLC同時(shí)測(cè)定牛黃清胃丸中梔子苷和黃芩苷［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（11）：86-88.

［6］席文勝，張艷玲.二元梯度洗脫反相高效液相色譜法測(cè)定茵梔黃顆粒中梔子苷的含量［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，11（2）：148-149.

（責(zé)任編輯：劉淑婷）

R284

A

0256-7415（2015）09-0206-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.09.096

2015-05-16

葉其旺（1968-），男，主管藥師，主要從事臨床藥學(xué)工作。