張魏龍　陸正旺　李國歡

摘要：簡要介紹了羅田縣山羊布魯氏菌病凈化初篩檢測工作情況，就具體措施及操作方法進行系統(tǒng)介紹，為基層畜牧獸醫(yī)機構(gòu)開展凈化動物疫病工作提供借鑒和參考。

關(guān)鍵詞：動物疫??；凈化；方法

中圖分類號：S858.27 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2015）08-0028-02

布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q“布病”）是嚴重危害人畜健康和阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的人畜共患病，屬國家二類傳染病。2014年羅田縣人感染山羊布病4例，羅田縣畜牧獸醫(yī)局在病人相關(guān)地區(qū)抽檢山羊444只，共檢出陽性病例31例，陽性率為6.98%。隨著山羊養(yǎng)殖的快速發(fā)展和頻繁的流通，羊布病感染人的威脅在加大，如不從現(xiàn)在著手采取必要的防控措施，將可能造成羊布病在羊群和人之間交叉感染流行，對我縣公共衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)健康發(fā)展造成極大的危害。2015年5月8日，按照湖北省畜牧獸醫(yī)局的指示和要求，啟動了《羅田縣山羊布魯氏菌病凈化實施方案》。5月11日開始進行初篩檢測采樣，于5月26日結(jié)束，共計采樣40 040份?，F(xiàn)匯報如下。

1 技術(shù)路線及操作規(guī)程

通過采取“檢測-撲殺-監(jiān)測-凈化”的措施，針對不同地區(qū)不同羊場飼養(yǎng)情況開展布病凈化工作。

（1）檢測到布病陽性的羊場（戶）需立即對全群羊進行布病監(jiān)測，撲殺陽性羊只，其余羊只隔離飼養(yǎng)并每個月進行采樣監(jiān)測，如連續(xù)3個月未檢測到布病陽性則視為假定陰性場（戶），并轉(zhuǎn)入每半年監(jiān)測一次的常規(guī)監(jiān)測，否則重復(fù)上一步措施。

（2）未檢測到布病陽性的羊場（戶）3個月后再進行一次抽樣檢測，檢測無布病陽性后視為假定陰性場，轉(zhuǎn)入常規(guī)監(jiān)測，否則按陽性場（戶）處理。

（3）檢測到布病陽性的羊場（戶）在采取監(jiān)測、隔離、撲殺淘汰等綜合防控措施，連續(xù)兩年以上羊布病抽樣檢測陰性，無臨床病例的，結(jié)合實際飼養(yǎng)狀況和飼養(yǎng)規(guī)模，按照比例每半年進行一次常規(guī)監(jiān)測。

2 工作步驟

2.1 摸底調(diào)查

各鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心組織村級防疫員全面統(tǒng)計轄區(qū)內(nèi)山羊的實際存欄數(shù)量，普查工作必須進圈入舍逐戶核查，并如實填寫山羊調(diào)查統(tǒng)計表，全面摸清山羊?qū)嶋H飼養(yǎng)量、分布區(qū)域等基本情況。

2.2 采樣檢測階段

技術(shù)培訓(xùn)工作：在各鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心抽調(diào)1～2名業(yè)務(wù)素質(zhì)強的防疫員由縣疫控中心集中培訓(xùn)，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)中心再組織防疫員進行培訓(xùn)，按每組3人，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)按人員分組組成采樣隊進行采樣。

采樣方法及數(shù)量：根據(jù)實際情況按鄉(xiāng)鎮(zhèn)逐步推進，在采樣檢測的前一天通知養(yǎng)殖戶將所有山羊全部圈養(yǎng)，不得外出放牧或私自轉(zhuǎn)移、隱藏、買賣。由各鄉(xiāng)鎮(zhèn)服務(wù)中心安排采樣人員，每3人一組，逐鄉(xiāng)鎮(zhèn)逐村逐養(yǎng)殖場（戶）進行按照下表比例采樣。

基于風(fēng)險抽樣，抽樣品種為：種公羊全部采集，其次重點采集有流產(chǎn)史的母羊、年齡超過6月齡的山羊及外地新引進的山羊。

3 樣品的采集

3.1 采樣前的準備

（1）統(tǒng)一設(shè)計印制采樣登記表和樣品登記表。登記表一般一式三份，一份畜主留存、一份采樣單位留存、一份隨樣品。主要填寫內(nèi)容有場點名稱、場點詳細地址、畜主姓名及聯(lián)系方式、被采樣動物耳標號碼及對應(yīng)樣品編號、被采樣動物飼養(yǎng)情況、采樣單位、采樣人、采樣日期等。樣品登記表主要是記錄清楚當日采樣的場（戶）數(shù)、采樣數(shù)、存欄數(shù)等信息。

（2）樣品編號。把鄉(xiāng)鎮(zhèn)按順序用數(shù)字進行編制代碼，再按照鄉(xiāng)鎮(zhèn)任務(wù)數(shù)由縣疫控中心統(tǒng)一編號，樣品編號具體是由鄉(xiāng)鎮(zhèn)代碼+動物代碼+數(shù)字組成，用不干膠標簽紙打印。

（3）采樣用品的選擇。個人防護用品我們采用的是質(zhì)量較好的一次性防護服、手套、口罩等；采血器材我們采用的是獸用一次性采血貯血器，即可用離心機直接分離血清又可以把已析出血清的擰開前蓋直接檢測。

3.2 采血和樣品的處理：

（1）采血方法。山羊采血應(yīng)提前一天通知山羊養(yǎng)殖戶做好準備（山羊不能出外放牧，只能圈養(yǎng)），山羊采血采用采血器頸靜脈采血不少于3 mL，3人為一組，一人保定、一人采血、一人登記。負責采血的人采完血后一是拔下采血器的針頭、擰下采血器的活塞的拉桿并放入準備好的塑料袋中。二是對沒有佩戴耳標的羊打上耳標，并把耳標號碼報給負責登記的人；負責登記的人一是負責給采好血的采血器上貼上樣品編號標簽，并在采樣表上記錄清楚樣品編號和對應(yīng)的耳標號碼；二是負責收集血樣，方法是每10份血樣扎一捆，并在每捆血樣上寫清楚個場（戶）名；三是負責將采好的血樣豎立放入帶冰的保溫箱中（氣溫低于24 ℃可以常溫保存）。負責保定的人采取“騎跨式”保定，一只手抓住山羊羊角或耳朵，一只手托住山羊的下巴略向后傾斜。

（2）樣品的收集。鄉(xiāng)鎮(zhèn)服務(wù)中心每天下午負責將采好的血樣、采樣表收集整理，樣品和對應(yīng)采樣表按順序編好序號在《樣品信息登記表》填寫清楚，一份留存一份蓋章隨樣品。血樣要用保溫箱冷藏運輸，由縣疫控中心或分片集中運送至縣實驗室。

（3）采樣時注意事項。①要做好個人防護，要穿帶好防護服、口罩、手套等，采血操作過程中禁止飲食、吸煙等；采血時應(yīng)避免采血器扎傷。②做好山羊采樣保定，保定采取“騎跨式”保定，兩手抓住山羊羊角或耳朵，防止發(fā)生因保定不當造成山羊傷害的事情發(fā)生。每采一個羊場要把防護服、口罩、手套、采樣等廢棄物品集中焚燒深埋。③要做好采樣途中的交通安全，采樣期間禁止采樣相關(guān)人員飲酒等。

4 實驗室檢測

4.1 樣品的接收

我們采取的是下午集中送樣，樣品接收員一是按照各鄉(xiāng)鎮(zhèn)樣品信息登記表與采樣表、血樣逐一核對，確保樣品與采樣表上登記的信息相符后按鄉(xiāng)鎮(zhèn)用文件夾分開存放。二是將樣品分鄉(xiāng)鎮(zhèn)標記時間鄉(xiāng)鎮(zhèn)等信息后放入冰箱4 ℃保存。三是在樣品接收的第二天將樣品接收信息按照采樣表分鄉(xiāng)鎮(zhèn)登記電子表格并制作匯總表，便于及時了解各鄉(xiāng)鎮(zhèn)采樣動態(tài)。

4.2 樣品的處理

每天樣品處理人員按照樣品信息。一是將采血器內(nèi)析出好的血清倒入1.5 mL的離心管中并貼上與采血器上相同的樣品編號標簽。二是將沒有析出血清的采血器用離心機2 800 r/min離心5 min，再將分離好的血清倒入1.5 mL離心管，每個離心管上要貼上與采血器上相同的樣品編號標簽。三是將分離好的血清分鄉(xiāng)鎮(zhèn)裝入封口袋，在封口袋上用記號筆寫上鄉(xiāng)鎮(zhèn)、存放日期、樣品數(shù)量等信息并按日期分鄉(xiāng)鎮(zhèn)在樣品保存表上登記清楚。

4.3 樣品檢測

（1）檢測程序是先用虎紅平板凝集試驗進行初篩，對初篩檢出的疑似陽性血樣送市獸醫(yī)實驗室進行試管凝集試驗進行復(fù)核。

（2）采用9 cm×13 cm的透明玻璃塊代替載玻片，每塊玻璃可檢測樣品6份以上。優(yōu)點一是單次檢測樣品數(shù)多，每次加完樣品后可立即判定省去反應(yīng)等待的時間，增快檢測速度；二是玻璃片易清洗，不易破損。

（3）對已析出血清的擰開采血器的上蓋直接進行檢測。沒有析出血清的用離心機分離出血清后再進行檢測。我們采取只對凝似陽性血清留樣集中送市實驗室復(fù)核，陰性樣品直接廢棄。

（4）填寫完善的檢測記錄，對凝似陽性樣品根據(jù)編號對照采樣表找出對應(yīng)的耳標號碼。

5 陽性羊只的處置

根據(jù)檢測結(jié)果出具檢驗報告，縣動物疫病預(yù)防控制中心根據(jù)檢測報告，對確診為陽性的向縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所下達《山羊布病凈化處置通知書》，由縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所監(jiān)督撲殺和無害化處理；同群進行隔離飼養(yǎng)觀察、劃定區(qū)域放牧，定期復(fù)查。對撲殺山羊及其流產(chǎn)胎兒、胎衣、排泄物、乳、乳制品等應(yīng)深埋或燒毀，被病羊污染的圈舍、場地、用具等用10%石灰乳、2%熱燒堿液進行消毒處理，糞便則需經(jīng)生物熱發(fā)酵進行無害化處理；并對環(huán)境進行消毒滅源。