張玉剛

（河北省唐山市豐潤區(qū)中醫(yī)醫(yī)院皮膚科　河北　唐山　064000）

·基礎研究·

18-β甘草酸苷對慢性蕁麻疹患者血清中IL-4、IL-8、IL-17和IL-22的影響

張玉剛

（河北省唐山市豐潤區(qū)中醫(yī)醫(yī)院皮膚科河北唐山064000）

目的：通過對18-β甘草酸苷治療前后慢性蕁麻疹患者血清中IL-4、IL-8、IL-17和IL-22的檢測，探討甘草酸苷治療慢性蕁麻疹的作用機制。方法：用Western blot檢測法分別檢測20例慢性蕁麻疹患者經(jīng)甘草酸苷治療前、后及20例健康對照組血清中IL-4、IL-8、IL-17和IL-22的水平。結(jié)果：慢性蕁麻疹患者經(jīng)18-β甘草酸苷治療前血清中IL-4濃度（22.75±6.87pg/ml）、IL-8濃度（20.26±4.52pg/ml）、IL-17濃度（24.62±7.28pg/ml）和IL-22濃度（23.26±9.04pg/ml）高于健康對照組（P＜0.05）。治療后，IL-4濃度（14.44±4.29pg/ml）、IL-8濃度（12.24±3.32pg/ml）、IL-17濃度（13.32±1.61pg/ml）和IL-22濃度（14.32±1.59pg/ml）較治療前顯著降低（P＜0.05），與健康對照比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論：慢性蕁麻疹患者的血清中存在IL-4、IL-8、IL-17和IL-22水平異于正常，提示慢性蕁麻疹患者的機體免疫功能紊亂；而18-β甘草酸苷治療后血清中IL-4、IL-8、IL-17和IL-22明顯降低，提示18-β甘草酸苷可能通過影響輔助T細胞相關因子來發(fā)揮治療慢性蕁麻疹的作用。

慢性蕁麻疹；18-β甘草酸苷；IL-4；IL-8；IL-17；IL-22

慢性蕁麻疹屬于IgE介導的I型變態(tài)反應，其發(fā)病機制是多種致病因素引起患者的皮膚、黏膜小血管擴張及滲透性增加導致的一種皮膚局限性水腫性病理反應［1］。其臨床體征以風團和瘙癢為主，癥狀每天或幾乎每天出現(xiàn)，一般持續(xù)至少6周?；颊吒鱾€部位皮膚都可不定時地出現(xiàn)風團、皮疹并伴有不同程度的瘙癢，臨床治療中習慣單獨應用抗組胺藥物緩解癥狀［2-4］。18-β甘草酸苷具有多途徑調(diào)節(jié)自身免疫反應，抗炎抗過敏等藥理作用，因此18-β甘草酸苷已經(jīng)被臨床廣泛應用于慢性蕁麻疹的治療［5］。為了探討18-β甘草酸苷在慢性蕁麻疹患者體內(nèi)作用機理，故進行該實驗研究。

1　資料和方法

1.1一般資料

選擇2012年5月-2014年4月在我院皮膚科門診治療的慢性蕁麻疹患者20例組成實驗組。其中男性11例，女性9例，年齡21～65歲。平均（42.3± 10.1）歲，病程2月～10年，平均病程11個月。實驗組受試者入選標準［6］：①參與實驗的所有受試者幾乎每天出現(xiàn)風團，瘙癢癥狀，符合慢性蕁麻疹的診斷標準；②排除寒冷性蕁麻疹、膽堿能性蕁麻疹、人工蕁麻疹及蕁麻疹性血管炎等其他類型蕁麻疹；③參與研究前1個月內(nèi)未曾使用過皮質(zhì)類固醇激素及免疫調(diào)節(jié)劑；④參與研究前1周內(nèi)未曾使用過抗組胺藥物；⑤受試者簽署知情同意書并能遵醫(yī)囑服藥。受試者排除標準：①伴有嚴重的心、肺、肝、腎等基礎疾病的患者；②確診為其他類型蕁麻疹的患者；③當前處于妊娠及哺乳期婦女；④目前正在接受皮質(zhì)類固醇激素、大環(huán)內(nèi)酯類及咪唑類藥物者。選取本院體檢科體檢者組成健康對照組20例，男10例，女10例，平均年齡（31.31±12.4）歲（18～44歲）。均無嚴重心、肝、腎等器官疾病及過敏性疾病史。參與研究的實驗組和對照組受試者的性別、年齡基礎臨床資料方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

圖1　A　實驗組治療前Western blot檢測結(jié)果

圖1　B　實驗組治療后前Western blot檢測結(jié)果

圖1　C　對照組Western blot檢測結(jié)果

1.2方法

實驗組患者口服復方甘草酸苷片50mg/次，每天3次，連續(xù)用藥4周。分別采集20例慢性蕁麻疹患者治療前、治療后及20例健康對照組清晨空腹血漿5ml。選擇EDTA作為抗凝劑，混合10～20min后，離心20min左右（2 000～3 000r/min）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，再次離心。BCA法測定上清蛋白濃度，每孔20μl上樣。采用15%SDSPAGE凝膠電泳，采用硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)膜，3%BSA封閉1h，TPBS振洗，加入IL-4、IL-8、IL-17和IL-22多克隆抗體（1:8 000），內(nèi)參照加入鼠源抗β-微管蛋白單克隆抗體（1:5 000），4℃搖床孵育過夜。辣根過氧化物酶標記鼠抗（1:10 000）孵育1h后，底物化學發(fā)光試劑盒顯色，掃描曝光濾膜。每組實驗重復3次。采用Image-pro-plus軟件分析蛋白條帶灰度值，以灰度值比作為蛋白水平的定量指標。

1.3統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。治療前后組間比較采用配對t檢驗。治療前后與對照組比較采用獨立樣本t檢驗。

2　結(jié)果

2.1Western blot檢測法結(jié)果見圖1

2.2采用Image-pro-plus軟件分析蛋白條帶灰度值結(jié)果見表1

表1　甘草酸苷治療慢性蕁麻疹患者前后血清細胞因子變化?。ɡ琾g/ml）

由表1可見：①治療前IL-4水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），給予口服復方甘草酸苷片治療后IL-4水平明顯下降；治療后IL-4水平明與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；②治療前IL-8水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），給予口服復方甘草酸苷片治療后IL-8水平明顯下降；治療后IL-8水平明與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；③治療前IL-17水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），給予口服復方甘草酸苷片治療后IL-17水平明顯下降；治療后IL-17水平明與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；④治療前IL-22水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），給予口服復方甘草酸苷片治療后IL-22水平明顯下降；治療后IL-22水平明與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3　討論

研究認為機體內(nèi)T輔助細胞高通過分泌IL-17 和IL-22等細胞因子引起機體免疫功能紊亂造成患者免疫水平失衡是慢性蕁麻疹發(fā)病機制的一個關鍵環(huán)節(jié)［7-9］。研究發(fā)現(xiàn)IL-4和IL-8等細胞因子表達水平升高在慢性蕁麻疹過敏性疾病中起到非常關鍵的作用［10］。進一步的研究認為機體中多種細胞因子促使外周血IgE水平高于正常，誘發(fā)機體免疫功能紊亂從而導致機體產(chǎn)生一系列超敏反應的病理生理現(xiàn)象［11］。本次研究中發(fā)現(xiàn)慢性蕁麻疹患者治療前血清中IL-4、IL-8、IL-17和IL-22水平高于健康對照組。提示慢性蕁麻疹患者發(fā)病期外周血中T輔助細胞高表達，導致IL-4、IL-8、IL-17和IL-22水平同時升高。所以從本實驗研究提示慢性蕁麻疹患者機體存在免疫紊亂導致的超敏反應。在皮膚科的臨床診療中為了增加慢性蕁麻疹的治療效果并減少不良發(fā)應，多以抗組胺的基礎上聯(lián)合多種調(diào)節(jié)免疫的藥物進行聯(lián)合治療，聯(lián)合用藥治療方法的近期治療效果有一定程度的提高，但是臨床遠期療效還是差強人意［12-14］。因此本次研究提示治療慢性蕁麻疹應以調(diào)節(jié)免疫水平為首選治療方案，其他抗組胺藥物只用于緩解癥狀。

藥理學研究認為18-β甘草酸苷能顯著抑制正常人外周血單一核淋巴細胞產(chǎn)生炎性細胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ和TNF-α［15-16］。在自身免疫性疾病治療的研究中，也發(fā)現(xiàn)18-β甘草酸苷具有抑制初始T細胞向Thl、Th2、Thl7細胞分化，減少其相關細胞因子合成的作用［17］。研究報道稱18-β甘草酸苷是一種非常有效的免疫調(diào)節(jié)劑，它具有多途徑抗炎、抗過敏、免疫雙向調(diào)節(jié)、止癢、保肝的作用［18-19］。本研究發(fā)現(xiàn)，實驗組口服復方甘草酸苷片后明顯降低外周靜脈血中的IL-4、IL-8、IL-17和IL-22濃度水平與健康對照組無差別。提示甘草酸苷片可以改善慢性蕁麻疹患者機體的免疫紊亂抑制超敏反應的發(fā)生。

綜上所述，慢性蕁麻疹患者機體免疫功能紊亂為基礎導致的系列超敏反應的臨床病癥，臨床治療宜采取口服甘草酸苷片調(diào)節(jié)慢性蕁麻疹患者免疫功能至平衡狀態(tài)治本，再配合抗組胺改善癥狀，進而提高慢性蕁麻疹的治愈率，改善患者生活質(zhì)量。

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編輯/張惠娟

Effect of glycyrrhizin on chronic urticaria patients in IL-4，IL-8，IL-17 and IL-22

ZHANG Yu-gang
（Department of Dermatology，Chinese Medicine Hospital of Fengrun District，Tangshan 064000，Hebei，Chinese）

Objective BasedonmeasurementofchronicurticariapatientsserumIL-4andIL-8，IL-17and IL-22 before and after 18 beta glycyrrhizin in the treatment of glycyrrhizin mechanism on treating chronic urticaria.Methods The levels of serum IL-22，IL-8，IL-17 and IL-4 in 20 cases of chronic urticaria were detectedbyblotWesternassayand20casesofhealthycontrols.Results Inpatientswithchronicurticaria by 18 beta glycyrrhizin treatment IL and serum concentrations of IL-4（22.75±6.87pg/ml），IL-8 concentration（20.26±4.52pg/ml），IL-17 concentration（24.62±7.28pg/ml）and IL-22 concentration （23.26±9.04pg/ml），higherthanthehealthycontrolgroup（P＜0.05）.Afterthetreatment，concentrationofIL-4was（14.44±4.29pg/ml），IL-8concentration（12.24±3.32pg/ml），IL-17concentration（13.32±1.61pg/ml），IL-22 concentration（14.32±1.59pg/ml），treatment significantly decreased（P＜0.05），and healthy control differencenostatisticalsignificance（P＞0.05）.Conclusion Theserumofpatientswithchronicurticariaof IL-4andIL-8，IL-17andIL-22levelsdifferentfromnormal，suggestingthatchronicurticariapatientswith thedisorderofimmunefunctioninthebody；and18betaglycyrrhizicacidglycosidestreatmentofserumIL-4 and IL-8，IL-17 and IL-22 reduced obviously，18 beta glycyrrhizin tips may through the influence of T helpercellrelatedcytokinestoplayaroleintreatmentofchronicurticaria.

chronic urticaria；glycyrrhizin；IL-4；IL-8；IL-17；IL-22

R758.24

A

1008-6455（2015）16-0029-03

2015-05-26

2015-07-21