余　晶，馮幼平，吳毅平

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院整形外科湖北武漢430030）

微針導(dǎo)入自體富血小板血漿對面部年輕化的療效研究

余晶，馮幼平，吳毅平

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院整形外科湖北武漢430030）

目的：探討經(jīng)微針皮膚導(dǎo)入自體富血小板血漿對面部年輕化的療效與安全性。方法：對18例健康志愿者，抽取16ml靜脈血，通過2次離心后得到約2.0ml自體富血小板血漿；采用電動納米微針在面部逐點振動點刺，同時將自體富血小板血漿滴注到皮膚，通過微針制造的針孔導(dǎo)入皮膚組織內(nèi)發(fā)揮療效。每30d重復(fù)一次，3個月為一療程，每次治療前后采用MC760數(shù)字皮膚測試儀測試面部皮膚，比較皮膚水分、彈性、色斑、油脂等變化，通過皮膚狀態(tài)問卷評估志愿者對治療的滿意度。結(jié)果：18例志愿者面部皮膚水分、彈性、色斑、油脂等指標(biāo)和主觀評分在治療前后，自身對照有明顯改善（P＜0.05），無并發(fā)癥發(fā)生。結(jié)論：使用微針導(dǎo)入自體富血小板血漿對面部年輕化治療的療效，為面部年輕化治療提供了新的方法。

微針；自體富血小板血漿；面部年輕化；皮膚狀態(tài)；評估

年輕的皮膚光滑、潤澤而富有彈性，是面部美的基礎(chǔ)。隨環(huán)境變化及年齡增長皮膚會逐漸衰老，出現(xiàn)皮膚變薄、干燥、粗糙、皺紋、松弛下垂、色素沉著等改變［1］，嚴(yán)重影響到面部外觀?，F(xiàn)今社會，一方面隨著環(huán)境污染、生活壓力增大，皮膚衰老加??；另一方面，隨著人口老齡化加劇和人們求美意識的增長，越來越多的人關(guān)注如何延緩皮膚衰老，保持青春容顏。

基于對皮膚衰老機(jī)制的研究，目前的抗皮膚衰老的方法有內(nèi)服抗氧化劑、微量營養(yǎng)元素、丁基羥基甲苯（BHT）等，外用物理防護(hù)、抗氧化劑、保濕劑、維A酸、金屬元素、中醫(yī)藥治療等，此外，激光治療、化學(xué)剝脫術(shù)、肉毒素注射治療、填充劑治療等醫(yī)療美容方式日趨流行［2］。

自體富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）［3］是經(jīng)全血立離心后得到的濃聚血小板的血漿，經(jīng)激活后血小板α-顆粒釋放大量生長因子，如血小板源性生長因子（PDGF），轉(zhuǎn)化生長因子β1、β2（TGF-β1、β2），成纖維細(xì)胞生長因子（FGF），血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），類胰島素生長因子（IGF）以及表皮生長因子（EGF）等。生長因子在組織再生及修復(fù)過程中對細(xì)胞的運動、增殖及組織血管形成發(fā)揮重要作用，因此，富血小板血漿被廣泛的應(yīng)用于骨組織修復(fù)、創(chuàng)面修復(fù)、肌肉關(guān)節(jié)運動損傷修復(fù)，以及整形美容外科等領(lǐng)域。

Alessio Redaelli等［4］將富血小板血漿注射到臨床患者的面部及頸部后，面頸部皺紋減少，皮膚整體的均勻性及質(zhì)感提高，收到了良好的美容效果。但目前將自體富血小板血漿用于面部年輕化的療效尚無足夠的臨床報道。微針治療通過微針穿刺皮膚角質(zhì)層打開通往真皮層的微孔通道，能提高藥物特別是大分子藥物的頭皮速率和吸收量［5］；此外，微針通過給皮膚造成的微小的損傷能刺激皮膚再生［6］。我院對18例健康志愿者采用微針導(dǎo)入自體富血小板血漿面部年輕化治療，取得了良好效果，現(xiàn)報道如下。

1　資料和方法

1.1臨床資料

本組選取健康志愿者18名，其中女性15名，男性3名，年齡25～49歲，平均（35.30±7.025）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①平素體健，無傳染病、血液性疾病、精神性疾病、活動性疾病及嚴(yán)重的皮膚?。ň植繚兓蚋腥镜龋?；②2個月內(nèi)未接受任何面部美容治療；③無皮膚過敏史；④靜脈血血小板計數(shù)大于100 000/μl；⑤采血前3個月未使用影響血小板功能藥物及與受試功能相關(guān)的藥品及保健品；⑥不在妊娠及哺乳期內(nèi)，無不良嗜好（如：吸煙、嗜酒、吸毒等）。

1.2儀器和材料

納米晶片促滲儀（納晶SPE10，蘇州納通生物納米技術(shù)有限公司），MC760數(shù)字皮膚分析儀（德國Courage Khazaka公司）。

1.3治療方法

1.3.1自體富血小板血漿的制備：受試者餐后休息1h，取坐位，在不扎止血帶的情況下肘前采集靜脈血16ml于含有抗凝劑（枸櫞酸抗凝葡萄糖-A，1∶10）的無菌真空采血管中，另留取1ml靜脈血用于全血血小板計數(shù)。將16ml含有抗凝劑的靜脈血轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，采用2次離心法制備PRP，在室溫條件下，第一次以200g離心10min，全血分為三層，最下層1/2為紅細(xì)胞，上層為淡黃色的清亮血漿，兩層交界處有一白色薄層，稱黃衣層（buffer coat）。取全部上清及黃衣層，進(jìn)行二次離心，800g×10min。離心后離心管底部白色沉淀即為濃縮血小板，取出3/4上清液（貧血小板血漿，platelet-poor plasma，PPP），充分混勻后即為富血小板血漿（見圖1），取50微升進(jìn)行血小板計數(shù)。在使用前加入激活劑（10%氯化鈣，1∶10），混勻后靜置10s后，PRP形成凝膠狀。

1.3.2皮膚測試：將室內(nèi)溫度控制在22℃左右、濕度在40%～50%范圍內(nèi)。18名受試者清潔面部，在測前30min進(jìn)入測試環(huán)境中安靜待測。MC760數(shù)字皮膚分析儀測試：受試者首先清潔面部，15min后，使用數(shù)碼相機(jī)采集原始照片，使用皮膚水分探頭、皮膚彈性探頭、皮膚暗斑探頭及皮膚油脂探頭分別測試受試者面部皮膚的水分、彈性、暗斑及油脂含量，將檢測儀的探頭垂直置于皮膚上，3～5s待穩(wěn)定后讀取數(shù)值，取4個固定部位，各測3次，取平均值作統(tǒng)計分析。

圖1　二次離心法制備自體富血小板血漿

1.3.3治療方法：清潔皮膚，分別于治療前、治療后使用數(shù)碼相機(jī)采集原始照片和MC760數(shù)字皮膚分析儀測試。將激活的PRP呈點狀滴注在治療區(qū)域的皮膚表面，然后使用電動納米晶片促滲儀開始逐點振動點刺：將促滲儀垂直置于皮膚表面，晶片接觸皮膚，接通電源，晶片開始上下振動點刺皮膚，每點維持1s后，旁移5mm即一個晶片的寬度，進(jìn)行下一點的點刺；依法逐點點刺全面部皮膚，依次從額頭、面頰、下頜、鼻部、上唇（見圖2）。術(shù)后將留取的PPP與2ml左旋維生素C溶液冷凍后，滴入單層紗布，敷貼在全面部15min。術(shù)后可常規(guī)冰敷以舒緩輕微的不適和微紅。每次治療間隔30d，3次1個療程。使用常規(guī)護(hù)膚品涂抹面部，期間不能行其他面部美容治療、口服與美容相關(guān)藥品及營養(yǎng)品。

1.3.4療效評定標(biāo)準(zhǔn)：采用受試者主觀評價，自身對治療前和最后一次治療后皮膚狀態(tài)進(jìn)行問卷調(diào)查分析。皮膚干燥、粗糙、出油、彈性、松弛、發(fā)紅、刺癢、敏感、色素、光澤這10個項目，癥狀程度由無到嚴(yán)重分5個等級，評分由1到5分（無=5分、輕= 4分、中=3分、重=2分、嚴(yán)重=1分），滿分為50分，受試者主觀評分越高，即自身對皮膚狀態(tài)越滿意。客觀評價：MC760數(shù)字皮膚分析儀測試指標(biāo)，在治療前和最后一次治療后的變化。

1.3.5統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，治療前后檢測或評分的數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用t檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖2　電動納米微針導(dǎo)入自體富血小板血漿面部皮膚年輕化治療

圖3　32歲女性，微針導(dǎo)入自體富血小板血漿治療前后比較

表1　治療前后MC760數(shù)字皮膚分析儀檢測結(jié)果

表1　治療前后MC760數(shù)字皮膚分析儀檢測結(jié)果

項目水分彈性油脂暗斑治療前25.87±0.80 40.23±1.26 56.41±0.71 53.60±1.12治療后35.63±1.34 54.87±0.65 45.23±0.41 48.01±0.73 P值＜0.05＜0.05＞0.05＜0.05參考范圍0～29非常缺水，30～40偏干，41～99充足0～47不足，48～65正常，66～99好0～27不足，28～57正常，58～99過多0～49亮白，50～99暗啞

2　結(jié)果

2.1自體富血小板血漿的有效性

經(jīng)過二次離心法得到的富血小板血漿（PRP）中血小板的濃度（980.63±3.59）×109/L是全血血小板濃度（158.17±1.26）×109/L的6.2倍，符合有效的PRP血小板濃度［3］。

2.2問卷調(diào)查結(jié)果

治療前后皮膚狀態(tài)問卷評分，18名志愿者在治療前的皮膚狀態(tài)評分為27.65±1.76，治療結(jié)束后的評分為40.03±5.87，皮膚狀態(tài)明顯改善（P＜0.05），其中皮膚干燥、彈性、松弛、色澤明顯改善（P＜0.05）。

2.3MC760數(shù)字皮膚分析儀檢測結(jié)果（見表1）

18名受試者，在治療前后面部皮膚水分、彈性及暗斑均明顯改善（P＜0.05），油脂分泌由過度變?yōu)檎?，但差異物統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。典型病例見圖3。

2.4不良反應(yīng)

在所有接收治療的志愿者中，未見針孔感染、瘀斑、色素沉著等不良反應(yīng)。

3　討論

皮膚衰老導(dǎo)致皮膚外觀及功能減退，帶給人們心理及生理上的不適，因此皮膚的抗衰老治療一直是人們關(guān)注的焦點。學(xué)者們試圖從皮膚衰老的機(jī)制出發(fā)，探索抵抗皮膚衰老、使皮膚年輕化的方法。

皮膚衰老分為內(nèi)源性衰老及外源性衰老，內(nèi)源性衰老主要指自然衰老，主要由機(jī)體內(nèi)在因素引起的，如Hayflick、Spiering［7］等提出及證實的基因調(diào)控學(xué)說、Harman［8］等提出及證實的自由基學(xué)說、Harley等［9］提出的端粒衰老假說等，表現(xiàn)為皺紋、松弛、下垂等。外源性衰老主要是由光老化引起的，除了紫外線，還有吸煙、皮膚彈力纖維變性、皮膚血運障礙、基質(zhì)金屬蛋白酶上調(diào)、煙霧中氧自由基增多及雌激素合成被抑制等因素。造成皮膚衰老加劇的環(huán)境因素（如外傷、環(huán)境污染等）被稱為“衰老因素”，這些“衰老因素”可造成皮膚大分子損傷，直接或間接的影響血管內(nèi)皮細(xì)胞胞間粘附因子-1（ICAM-1）的表達(dá)，最終造成皮膚細(xì)胞的隨機(jī)損傷［10］。光老化是自然老化與紫外線損害共同作用的結(jié)果，使Ⅰ型膠原表達(dá)減少，Ⅰ型和Ⅲ型膠原比值逐漸倒置，表現(xiàn)比自然衰老明顯，出現(xiàn)皮膚粗糙、較深的皺紋、斑狀色素沉著、毛細(xì)血管擴(kuò)張、皮膚彈性下降等。綜上所訴，皮膚衰老主要表現(xiàn)為皮膚整體膚質(zhì)下降、屏障功能減弱、表皮更新減慢及傷后恢復(fù)能力下降。

增加皮膚血管及膠原的含量對皮膚抗衰老治療中起至關(guān)重要的作用。自體富血小板血漿［3，11，14］是經(jīng)全血立離心后得到的濃聚血小板的血漿，血小板、白細(xì)胞及纖維蛋白構(gòu)成，經(jīng)激活后血小板α-顆粒釋放大量生長因子，如血小板源性生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子β1、β2，成纖維細(xì)胞生長因子，血管內(nèi)皮生長因子，類胰島素生長因子以及表皮生長因子等。這些細(xì)胞因子能促進(jìn)多種細(xì)胞增殖，對中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等有趨化作用，能促進(jìn)損傷局部毛細(xì)血管的生成；其中TGF-β對成纖維細(xì)胞及其他間葉組織來源細(xì)胞有明顯刺激作用，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)如膠原與纖維蛋白的合成，有利于組織修復(fù)及傷口愈合。Alessio等［4］通過23名臨床志愿者隧道法面部注射富血小板血漿連續(xù)3個月觀察面部皺紋、患者及醫(yī)生滿意程度，得到了良好的效果。Kakudo等［12］將富血小板血漿與成纖維細(xì)胞混合后觀察到富血小板血漿在其增殖過程中產(chǎn)生良好的促進(jìn)作用。Anderson等［13］在面部年輕化的研究中也提到了富血小板血漿的積極作用。

筆者通過納米微針導(dǎo)入自體富血小板血漿用于面部年輕化治療，經(jīng)3個月的治療后，由受術(shù)者主觀的皮膚狀態(tài)問卷評分及客觀的MC760數(shù)字皮膚分析儀檢測結(jié)果表明，微針導(dǎo)入自體富血小板血漿治療后皮膚水分、彈性、皮膚亮白度方面均明顯改善，皮膚油分含量由分泌不足多調(diào)整到分泌適中。本研究表明，富血小板血漿在皮膚抗衰老、面部年輕化的過程中起積極作用。

微針導(dǎo)入是將皮膚角質(zhì)層人為打孔，在不破壞真皮層的情況下暫時使角質(zhì)層的屏障功能減弱，使富血小板血漿能夠通過孔洞直達(dá)真皮層，更充分的被真皮層毛細(xì)血管網(wǎng)吸收，即使使用較少的劑量也可達(dá)到令人滿意的療效，且納米微針只打破皮膚表層，角質(zhì)層內(nèi)不含血管及神經(jīng)，使整個實驗過程實現(xiàn)相對無痛治療。此外，由于微針造成的通道形成皮膚組織微小創(chuàng)傷，刺激皮膚再生修復(fù)功能，在保持皮膚組織完整的情況下使膠原及彈力蛋白增加，從而延緩皮膚衰老。本研究使用的電動微針與滾輪微針相比有以下優(yōu)勢：①滾輪是向前滾動的，往前推會撕裂皮膚，創(chuàng)傷大，疼感重，且只有部分針能進(jìn)入皮膚；電動微針是上下針，創(chuàng)傷小，疼感比滾輪微針輕很多倍，且針?biāo)俸蜕顪\都由芯片控制的，深度和速度都可以達(dá)到最佳，效果比滾輪操作要更好；②電動微針的針頭是可以調(diào)節(jié)長短的，可根據(jù)皮膚的厚度調(diào)節(jié)針頭長短；而滾輪的每個微針只帶一個尺寸；③電動微針的針頭適應(yīng)于操作鼻子、鼻溝、眼部等滾輪微針不容易操作到位的部分。

總之本研究表明，微針導(dǎo)入自體富血小板血漿在皮膚抗衰老、面部年輕化的過程中起積極作用，且治療安全，無痛苦，無不良反應(yīng)，為面部年輕化治療提供了新的方法，值得進(jìn)一步的研究。

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編輯/張惠娟

Effect of delivery autologous platelet rich plasma into skin with microneedle for
facial rejuvenation

YU Jing，F(xiàn)ENG You-ping，WU Yi-ping
（Department of Plastic Surgery，Tongji Hospital，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，Hubei，China）

Objective To observe the clinical effect of delivering autologous platelet rich plasma into skin with microneedles for facial rejuvenation.Methods 18 cases volunteers were treated for facial rejuvenation by delivery autologous platelet rich plasma into skin through micropores which the microneedle made.The 2ml autologous platelet rich plasma was extracted from 16ml whole blood by centrifuge.One session every 30 days，all 18 volunteers were treated 3 times.We assess its effect by questionaires for subjective evaluation，and objective evalation with digital skin analyzers to record the raw pictures and data before and after treatment.Results All 18 volunteers were obsevered significantimprovement of facial skin scores，miosture，elasticity，complexion，olein（P＜0.05）.ConclusionIt is efficient to improve faciacal skin texture by delivering autologous Platelet Rich Plasma into skin with microneedle，it is an alternative for facial rejuvenation.

microneedle；autologous platelet rich plasma；facial rejuvenation；skin condition；estinmate

·皮膚美容·

R622

A

1008-6455（2015）17-0033-05

馮幼平，男，副主任醫(yī)師；E-mail：411348986@qq.com

2015-07-26

2015-08-28