陳麗華，邢媛媛，彭琳琳，劉之力（大連市皮膚病醫(yī)院激光科遼寧大連116021）

·基礎(chǔ)研究·

405nm光線對(duì)小鼠皮脂腺及膠原纖維的影響研究

陳麗華，邢媛媛，彭琳琳，劉之力
（大連市皮膚病醫(yī)院激光科遼寧大連116021）

目的：評(píng)價(jià)405nm光線對(duì)小鼠皮脂腺及膠原纖維的影響。方法：根據(jù)激光照射次數(shù)的不同，將80只昆明種小鼠分為照射2次組、4次組、6次組及8次組，每組各20只。觀察每組不同照射次數(shù)后皮膚組織學(xué)變化。結(jié)果：經(jīng)照射后，小鼠的皮脂腺數(shù)目較未照射對(duì)照側(cè)減少，真皮膠原纖維及真皮厚度均較對(duì)照側(cè)增厚，且隨著照射次數(shù)的增多，結(jié)果更加顯著。結(jié)論：405nm光線照射能夠減少皮脂腺數(shù)目，并且具有真皮膠原重建作用。

405nm光線；皮脂腺；膠原纖維；小鼠；照射

近年來(lái)，不少學(xué)者將光療法應(yīng)用于嫩膚治療，并對(duì)射頻用于換膚和面部提緊的臨床療效及安全性進(jìn)行了多中心的前瞻性評(píng)價(jià)研究。筆者在使用Aurora光波射頻治療機(jī)治療面部痤瘡的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，患者面部皮脂的分泌也相對(duì)減少，且面部皮膚狀態(tài)年輕化，但對(duì)療效的評(píng)價(jià)大部分是主觀評(píng)價(jià)，對(duì)激光照射后組織學(xué)的研究比較少，因此筆者利用昆明小鼠作為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究了Aurora光波射頻治療機(jī)所發(fā)射的405nm光線對(duì)小鼠皮脂腺、膠原纖維及真皮厚度的影響，歸納其中的規(guī)律，為皮脂腺疾病開拓一種安全有效的新型治療方式。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1儀器設(shè)備：Aurora光波射頻治療機(jī)，由以色列ViemedicGmbH及武漢奇智科技股份有限公司提供；CollagenⅣ、Ⅶ型膠原染色及小鼠膠原纖維抗人單克隆抗體，購(gòu)自美國(guó)lnvitrogen公司。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：2個(gè)月齡雌性昆明小鼠80只，體重（20±2）g，8～10周齡。由大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。隨機(jī)分為A、B、C、D四組，分別為照射2次組、4次組、6次組及8次組，每組各20只。

1.2方法

1.2.1光照治療：將80只昆明小鼠用2.5%的利多卡因溶液行腹腔注射麻醉，麻醉后以脊柱為界。將背部左右兩側(cè)皮膚用硫化鋇液進(jìn)行脫毛，脫毛后以左側(cè)為對(duì)照側(cè)，不接受光照治療；右側(cè)為治療側(cè)，接受光照治療。每次治療面積為5個(gè)光斑，連續(xù)照射2次。每組小鼠按治療次數(shù)進(jìn)行治療，每次間隔4d。每組小鼠相應(yīng)治療結(jié)束后，維持飼養(yǎng)15d，取材進(jìn)行組織學(xué)觀察。

1.2.2組織學(xué)觀察：分別切取治療側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚，面積均為3cm×2cm作為標(biāo)本，并以l0%甲醛緩沖固定液固定，梯次濃度乙醇逐級(jí)脫水，石蠟包埋，切片。HE染色測(cè)定真皮膠原纖維的厚度；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)昆明小鼠治療側(cè)和對(duì)照側(cè)真皮中膠原蛋白的含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用不等距重復(fù)測(cè)量方差分析的分析方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分析軟件為SPSS l7.0，對(duì)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)描述采用檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。

2　結(jié)果

2.1肉眼觀察

經(jīng)過(guò)Aurora光波射頻治療機(jī)照射的昆明小鼠皮膚未發(fā)生紅斑及水皰，肉眼觀察治療側(cè)和對(duì)照側(cè)，外觀無(wú)明顯差異。

2.2組織學(xué)觀察

2.2.1 HE染色：顯示治療側(cè)組織每視野中皮脂腺數(shù)目比對(duì)照側(cè)明顯減少，形態(tài)變化未見明顯改變（圖1）；表皮變得平坦，真皮膠原纖維厚度增加；膠原纖維密集（圖2）。

2.2.2免疫組織化學(xué)染色（SP染色）：顯示治療側(cè)較對(duì)照側(cè)真皮中膠原蛋白的厚度明顯增加，分布也更加密集（圖3）。

2.3對(duì)真皮厚度的影響：與未照射對(duì)照側(cè)比較，激光照射后真皮厚度值D組＞B組＞C組＞A組。見表l。

表1　各組真皮厚度值描述（±s，μm）

表1　各組真皮厚度值描述（±s，μm）

注：*P＜0.01表示各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別A組B組C組D組真皮厚度129.226±20.809*179.298±22.366*161.455±18.799*228.369±21.427*

圖1　激光照射8次后治療側(cè)與對(duì)照側(cè)皮脂腺數(shù)目與形態(tài)（HE染色切片，× 100）：顯示治療側(cè)（1A）組織每視野中皮脂腺數(shù)目相比對(duì)照側(cè)（1B）明顯減少，形態(tài)變化未見明顯改變

圖2　激光照射8次后治療側(cè)（2A）與對(duì)照側(cè)（2B）真皮膠原纖維（HE染色切片，× 100）：顯示治療側(cè)真皮膠原纖維厚度增加，可見膠原纖維密集

圖3　激光照射8次后治療側(cè)（3A）與對(duì)照側(cè)（3B）膠原蛋白厚度（免疫組化染色）：顯示治療側(cè)真皮中膠原蛋白厚度明顯增加，分布更加密集

3　討論

皮脂腺功能異?？蓪?dǎo)致痤瘡、脂溢性皮炎等多種疾病。已知皮脂腺分泌增多，使毛囊、皮脂腺導(dǎo)管角化栓塞，皮脂瘀積于毛囊形成脂栓，同時(shí)毛囊內(nèi)痤瘡丙酸桿菌繁殖引起炎癥反應(yīng)是尋常痤瘡的主要病因之一［1］。尋常痤瘡是一種常見于青少年的皮膚病。全世界約有80%的人口在某個(gè)時(shí)期患有不同程度的痤瘡?？股刂委燄畀徰装Y性損害已經(jīng)有40多年的歷史，近年來(lái)，痤瘡丙酸桿菌耐藥性問(wèn)題日益明顯，導(dǎo)致藥物療效降低［2］。痤瘡不僅影響患者的生活質(zhì)量，亦會(huì)引發(fā)不同程度的心理和社會(huì)問(wèn)題，因此尋找安全有效的治療方法是研究熱點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)選擇昆明小鼠作為動(dòng)物模型，是因?yàn)槔ッ餍∈蟮幕蚝推つw結(jié)構(gòu)與人類相似，非常適合進(jìn)行激光嫩膚研究。目前該動(dòng)物模型已經(jīng)得到國(guó)內(nèi)外同行的認(rèn)可。

Hongcharut［3］等在使用寬光譜的光源（550～700nm），能量密度為150J/cm2對(duì)22例患者的背部的尋常型痤瘡進(jìn)行照射，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，皮損處皮脂的分泌可被清除數(shù)周，此后呈分泌降低狀態(tài)，并可持續(xù)至光照射20周左右，重復(fù)治療4次能對(duì)皮脂分泌產(chǎn)生顯著的抑制效應(yīng)。章偉［4］等采用光動(dòng)力療法與強(qiáng)脈沖藍(lán)光治療中、重度痤瘡發(fā)現(xiàn)，能夠發(fā)射402～405nm的藍(lán)光，不僅能夠殺滅痤瘡丙酸桿菌、抗炎的作用，還具有抑制皮脂分泌的作用。Aurora光波射頻治療機(jī)可以發(fā)射405nm波長(zhǎng)的光線，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究，表明治療側(cè)組織每視野中皮脂腺的數(shù)目比對(duì)照組明顯減少，確定了光療法對(duì)于皮脂腺的作用，同時(shí)在研究的過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)通過(guò)組織病理學(xué)對(duì)比研究，結(jié)果表明，Aurora光波射頻治療機(jī)對(duì)真皮纖維組織增生重構(gòu)療效確切。皮膚老化常表現(xiàn)為皺紋、皮膚彈性下降、色素?fù)p害、毛細(xì)血管擴(kuò)張等［5］。顯微鏡下組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為真皮膠原退行性變，排列紊亂［6］，膠原纖維、彈力纖維減少，真皮層變薄。因此非損傷性激光嫩膚療效的評(píng)價(jià)多是通過(guò)組織學(xué)水平檢測(cè)真皮膠原水平的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。國(guó)內(nèi)有學(xué)者應(yīng)用1 550nm鉺玻璃點(diǎn)陣激光不同能量密度和微孔密度組合照射昆明小鼠背部皮膚，觀察照射前、后小鼠皮膚I型、III型膠原纖維和彈力纖維的變化情況，發(fā)現(xiàn)小鼠真皮厚度、成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)、膠原纖維和彈力纖維均增加［7］，以及點(diǎn)陣CO2激光進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示點(diǎn)陣CO2激光可有效促進(jìn)I型膠原的合成，增加真皮厚度［8］，但均未同時(shí)對(duì)皮脂腺的影響進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合對(duì)皮脂腺、真皮厚度、膠原纖維及膠原蛋白的觀察，客觀評(píng)價(jià)了405nm光線對(duì)昆明小鼠上述研究對(duì)象的作用，而且，隨著照射次數(shù)的增加，皮脂腺數(shù)目的減少、真皮厚度以及膠原纖維的增加結(jié)果愈加顯著，雖然昆明小鼠皮膚較薄，與人類皮膚組織存在一定差異，但本結(jié)論對(duì)于皮脂腺分泌所引起的疾病以及真皮膠原重建的作用仍具有一定參考價(jià)值，為該譜段光線在臨床治療中的療效提供了科學(xué)依據(jù)。它的無(wú)創(chuàng)性、有效性及操作簡(jiǎn)單，顯示出良好的應(yīng)用前景。但其長(zhǎng)期效果以及治療參數(shù)的選擇上還有待進(jìn)一步的研究。

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［7］張淑蘭，應(yīng)朝霞，王永賢，等.鉺玻璃點(diǎn)陣激光嫩膚參數(shù)優(yōu)化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［J］.中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2012，21（8）:1317-1318.

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編輯/張惠娟

Efects of 405nm laser irradiation on the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice

CHEN li-hua，XING yuan-yuan，PENG Lin-lin，LIU Zhi-li
（Department of Laser，Dalian Dermatosis Hospital，Dalian116021，Liaoning，China）

Objective To determine the effects of 405nm laser with diferent time on the changes of the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice.Methods Eighty mice were divided into four groups:the two times，four times，six times and eight times.Hematoxylin and immunohistochemical staining SP were performed to determ ine the changes of skin histology after laser irradiation.Results The number of sebaceous gland was decreased，the collagenic fibers and the dermis were thicker than before irradiation.And with the increase of the times of irradiation，the rusults were more significant.Conclusion 405nm laser irradiation can decrease the number of sebaceous gland and rebuild the collagenic fibers of dermis.

405nm laser；sebaceous gland；collagen fibers；mice；irradiation

Q813.1

A

1008-6455（2015）20-0037-03

2015-06-25

2015-09-27