陳麗華，邢媛媛，彭琳琳，劉之力（大連市皮膚病醫(yī)院激光科遼寧大連116021）

·基礎研究·

405nm光線對小鼠皮脂腺及膠原纖維的影響研究

陳麗華，邢媛媛，彭琳琳，劉之力
（大連市皮膚病醫(yī)院激光科遼寧大連116021）

目的：評價405nm光線對小鼠皮脂腺及膠原纖維的影響。方法：根據(jù)激光照射次數(shù)的不同，將80只昆明種小鼠分為照射2次組、4次組、6次組及8次組，每組各20只。觀察每組不同照射次數(shù)后皮膚組織學變化。結果：經(jīng)照射后，小鼠的皮脂腺數(shù)目較未照射對照側減少，真皮膠原纖維及真皮厚度均較對照側增厚，且隨著照射次數(shù)的增多，結果更加顯著。結論：405nm光線照射能夠減少皮脂腺數(shù)目，并且具有真皮膠原重建作用。

405nm光線；皮脂腺；膠原纖維；小鼠；照射

近年來，不少學者將光療法應用于嫩膚治療，并對射頻用于換膚和面部提緊的臨床療效及安全性進行了多中心的前瞻性評價研究。筆者在使用Aurora光波射頻治療機治療面部痤瘡的過程中發(fā)現(xiàn)，患者面部皮脂的分泌也相對減少，且面部皮膚狀態(tài)年輕化，但對療效的評價大部分是主觀評價，對激光照射后組織學的研究比較少，因此筆者利用昆明小鼠作為動物實驗模型，研究了Aurora光波射頻治療機所發(fā)射的405nm光線對小鼠皮脂腺、膠原纖維及真皮厚度的影響，歸納其中的規(guī)律，為皮脂腺疾病開拓一種安全有效的新型治療方式。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1儀器設備：Aurora光波射頻治療機，由以色列ViemedicGmbH及武漢奇智科技股份有限公司提供；CollagenⅣ、Ⅶ型膠原染色及小鼠膠原纖維抗人單克隆抗體，購自美國lnvitrogen公司。

1.1.2實驗動物：2個月齡雌性昆明小鼠80只，體重（20±2）g，8～10周齡。由大連醫(yī)科大學動物實驗中心提供。隨機分為A、B、C、D四組，分別為照射2次組、4次組、6次組及8次組，每組各20只。

1.2方法

1.2.1光照治療：將80只昆明小鼠用2.5%的利多卡因溶液行腹腔注射麻醉，麻醉后以脊柱為界。將背部左右兩側皮膚用硫化鋇液進行脫毛，脫毛后以左側為對照側，不接受光照治療；右側為治療側，接受光照治療。每次治療面積為5個光斑，連續(xù)照射2次。每組小鼠按治療次數(shù)進行治療，每次間隔4d。每組小鼠相應治療結束后，維持飼養(yǎng)15d，取材進行組織學觀察。

1.2.2組織學觀察：分別切取治療側和對照側皮膚，面積均為3cm×2cm作為標本，并以l0%甲醛緩沖固定液固定，梯次濃度乙醇逐級脫水，石蠟包埋，切片。HE染色測定真皮膠原纖維的厚度；免疫組織化學染色檢測昆明小鼠治療側和對照側真皮中膠原蛋白的含量。

1.3統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用不等距重復測量方差分析的分析方法對數(shù)據(jù)進行分析，分析軟件為SPSS l7.0，對數(shù)據(jù)的統(tǒng)計描述采用檢驗水準a=0.05。

2　結果

2.1肉眼觀察

經(jīng)過Aurora光波射頻治療機照射的昆明小鼠皮膚未發(fā)生紅斑及水皰，肉眼觀察治療側和對照側，外觀無明顯差異。

2.2組織學觀察

2.2.1 HE染色：顯示治療側組織每視野中皮脂腺數(shù)目比對照側明顯減少，形態(tài)變化未見明顯改變（圖1）；表皮變得平坦，真皮膠原纖維厚度增加；膠原纖維密集（圖2）。

2.2.2免疫組織化學染色（SP染色）：顯示治療側較對照側真皮中膠原蛋白的厚度明顯增加，分布也更加密集（圖3）。

2.3對真皮厚度的影響：與未照射對照側比較，激光照射后真皮厚度值D組＞B組＞C組＞A組。見表l。

表1　各組真皮厚度值描述（±s，μm）

表1　各組真皮厚度值描述（±s，μm）

注：*P＜0.01表示各組間比較差異有統(tǒng)計學意義

組別A組B組C組D組真皮厚度129.226±20.809*179.298±22.366*161.455±18.799*228.369±21.427*

圖1　激光照射8次后治療側與對照側皮脂腺數(shù)目與形態(tài)（HE染色切片，× 100）：顯示治療側（1A）組織每視野中皮脂腺數(shù)目相比對照側（1B）明顯減少，形態(tài)變化未見明顯改變

圖2　激光照射8次后治療側（2A）與對照側（2B）真皮膠原纖維（HE染色切片，× 100）：顯示治療側真皮膠原纖維厚度增加，可見膠原纖維密集

圖3　激光照射8次后治療側（3A）與對照側（3B）膠原蛋白厚度（免疫組化染色）：顯示治療側真皮中膠原蛋白厚度明顯增加，分布更加密集

3　討論

皮脂腺功能異?？蓪е吗畀彙⒅缧云ぱ椎榷喾N疾病。已知皮脂腺分泌增多，使毛囊、皮脂腺導管角化栓塞，皮脂瘀積于毛囊形成脂栓，同時毛囊內(nèi)痤瘡丙酸桿菌繁殖引起炎癥反應是尋常痤瘡的主要病因之一［1］。尋常痤瘡是一種常見于青少年的皮膚病。全世界約有80%的人口在某個時期患有不同程度的痤瘡?？股刂委燄畀徰装Y性損害已經(jīng)有40多年的歷史，近年來，痤瘡丙酸桿菌耐藥性問題日益明顯，導致藥物療效降低［2］。痤瘡不僅影響患者的生活質量，亦會引發(fā)不同程度的心理和社會問題，因此尋找安全有效的治療方法是研究熱點。

本實驗選擇昆明小鼠作為動物模型，是因為昆明小鼠的基因和皮膚結構與人類相似，非常適合進行激光嫩膚研究。目前該動物模型已經(jīng)得到國內(nèi)外同行的認可。

Hongcharut［3］等在使用寬光譜的光源（550～700nm），能量密度為150J/cm2對22例患者的背部的尋常型痤瘡進行照射，結果發(fā)現(xiàn)，皮損處皮脂的分泌可被清除數(shù)周，此后呈分泌降低狀態(tài)，并可持續(xù)至光照射20周左右，重復治療4次能對皮脂分泌產(chǎn)生顯著的抑制效應。章偉［4］等采用光動力療法與強脈沖藍光治療中、重度痤瘡發(fā)現(xiàn)，能夠發(fā)射402～405nm的藍光，不僅能夠殺滅痤瘡丙酸桿菌、抗炎的作用，還具有抑制皮脂分泌的作用。Aurora光波射頻治療機可以發(fā)射405nm波長的光線，通過本實驗研究，表明治療側組織每視野中皮脂腺的數(shù)目比對照組明顯減少，確定了光療法對于皮脂腺的作用，同時在研究的過程中還發(fā)現(xiàn)本實驗通過組織病理學對比研究，結果表明，Aurora光波射頻治療機對真皮纖維組織增生重構療效確切。皮膚老化常表現(xiàn)為皺紋、皮膚彈性下降、色素損害、毛細血管擴張等［5］。顯微鏡下組織學改變主要表現(xiàn)為真皮膠原退行性變，排列紊亂［6］，膠原纖維、彈力纖維減少，真皮層變薄。因此非損傷性激光嫩膚療效的評價多是通過組織學水平檢測真皮膠原水平的變化來實現(xiàn)的。國內(nèi)有學者應用1 550nm鉺玻璃點陣激光不同能量密度和微孔密度組合照射昆明小鼠背部皮膚，觀察照射前、后小鼠皮膚I型、III型膠原纖維和彈力纖維的變化情況，發(fā)現(xiàn)小鼠真皮厚度、成纖維細胞計數(shù)、膠原纖維和彈力纖維均增加［7］，以及點陣CO2激光進行動物實驗，結果顯示點陣CO2激光可有效促進I型膠原的合成，增加真皮厚度［8］，但均未同時對皮脂腺的影響進行相關實驗研究。本實驗結合對皮脂腺、真皮厚度、膠原纖維及膠原蛋白的觀察，客觀評價了405nm光線對昆明小鼠上述研究對象的作用，而且，隨著照射次數(shù)的增加，皮脂腺數(shù)目的減少、真皮厚度以及膠原纖維的增加結果愈加顯著，雖然昆明小鼠皮膚較薄，與人類皮膚組織存在一定差異，但本結論對于皮脂腺分泌所引起的疾病以及真皮膠原重建的作用仍具有一定參考價值，為該譜段光線在臨床治療中的療效提供了科學依據(jù)。它的無創(chuàng)性、有效性及操作簡單，顯示出良好的應用前景。但其長期效果以及治療參數(shù)的選擇上還有待進一步的研究。

［1］鄭燕敏，張兵.痤瘡治療藥物的現(xiàn)狀及進展［J］.上海醫(yī)藥，2008，29（6）:283.

［2］尹興平.痤瘡患者痤瘡丙酸桿菌耐藥性的研究進展［J］.國外醫(yī)學皮膚性病學分冊，2004，30（3）:153.

［3］HongcharuW，TaylorCR，ChangY，etal.Topical ALA-photodynamic therapy for the treatment of acne vulgaris［J］J Invest Dermatol，2000，115（2）:183-192.

［4］章偉，徐曉云，吳琰瑜，等.光動力療法與強脈沖藍光治療中度和重度痤瘡療效比較［J］.中華醫(yī)學美學美容雜志，2015，21（2）:118-119.

［5］李蕊聯(lián)，應朝霞，王梅，等.點陣CO2激光和Nd:YAG激光對自然老化小鼠真皮重塑的比較研究［J］.中國美容醫(yī)學，2012，21（10）:1782.

［6］尚英彬，王展，陳芳園，等.Q開關和長脈寬1 064nm Nd: YAG激光真皮膠原重建療效的比較性研究［J］.中國美容醫(yī)學，2014，23（2）:123.

［7］張淑蘭，應朝霞，王永賢，等.鉺玻璃點陣激光嫩膚參數(shù)優(yōu)化的動物實驗［J］.中國美容醫(yī)學，2012，21（8）:1317-1318.

［8］葛紅梅，蔣霞，劉盛秀，等.點陣CO2激光嫩膚的動物實驗研究［J］.安徽醫(yī)科大學學報，2010，45（5）:633.

編輯/張惠娟

Efects of 405nm laser irradiation on the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice

CHEN li-hua，XING yuan-yuan，PENG Lin-lin，LIU Zhi-li
（Department of Laser，Dalian Dermatosis Hospital，Dalian116021，Liaoning，China）

Objective To determine the effects of 405nm laser with diferent time on the changes of the sebaceous gland and the collagenic fibers in mice.Methods Eighty mice were divided into four groups:the two times，four times，six times and eight times.Hematoxylin and immunohistochemical staining SP were performed to determ ine the changes of skin histology after laser irradiation.Results The number of sebaceous gland was decreased，the collagenic fibers and the dermis were thicker than before irradiation.And with the increase of the times of irradiation，the rusults were more significant.Conclusion 405nm laser irradiation can decrease the number of sebaceous gland and rebuild the collagenic fibers of dermis.

405nm laser；sebaceous gland；collagen fibers；mice；irradiation

Q813.1

A

1008-6455（2015）20-0037-03

2015-06-25

2015-09-27