湯杰，宋冰娜，鄭盼*，丁梅

(1.國藥集團(tuán)致君(深圳)制藥有限公司，廣東 深圳 518118；2.國藥集團(tuán)致君(深圳)坪山制藥有限公司，廣東 深圳 518118)

·中藥工業(yè)·

HPLC測定冠心丹參膠囊中主成分的含量

湯杰1，宋冰娜2，鄭盼1*，丁梅1

(1.國藥集團(tuán)致君(深圳)制藥有限公司，廣東 深圳 518118；2.國藥集團(tuán)致君(深圳)坪山制藥有限公司，廣東 深圳 518118)

目的：測定冠心丹參膠囊中丹參素、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量。方法：采用高效液相色譜法，以C18柱為色譜柱；流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫；流速為0.8 mL·min-1；檢測波長為270、203 nm。結(jié)果：丹參素鈉和丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1分別在7.1～113.6、11.7～187.2、6.6～105.0、6.9～110.2、7.3～116.0、31.2～499.4、27.1～433.7 μg·mL-1呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率分別是99.51%(RSD=0.91%)、97.73%(RSD=1.35%)、97.20%(RSD=0.78%)、98.47%(RSD=0.69%)、99.12%(RSD=0.31%)、96.64%(RSD=0.86 %)和97.98%(RSD=1.02%)。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為冠心丹參膠囊中主成分的含量測定方法。

冠心丹參膠囊；高效液相色譜；含量測定

冠心丹參膠囊是由丹參、三七和降香油3味中藥組成的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、理氣止痛之功能。用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶刺痛、心悸氣短，是治療冠心病心絞痛的常用藥物。該制劑臨床應(yīng)用時(shí)間長，單用或聯(lián)合用藥療效確切[1-2]。以降香油代替冰片入藥降低了不良反應(yīng)[3]，得到醫(yī)生和患者的認(rèn)可。隨著中藥地位日益提高，中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也越來越受到重視，《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定以丹參酮ⅡA作為冠心丹參膠囊的質(zhì)量控制指標(biāo)[4]。然而中藥制劑的有效成分復(fù)雜，單一質(zhì)控指標(biāo)不盡合理，本研究采用HPLC建立冠心丹參膠囊中丹參水溶性成分(丹參素鈉、丹酚酸B)、脂溶性成分(隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA)和三七主成分(人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1)的含量測定方法，為冠心丹參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供參考。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

E2695-2486型高效液相色譜儀(美國Waters公司)；SPD-20A二極管陣列檢測器(美國waters公司)；超聲清洗器(頻率為40 KHz，功率為300 W)；AL204型萬分之一電子天平、XP6型十萬分之一電子天平(美國Metteler-Toledo公司)。

1.2 試藥

丹酚酸B對照品、丹參素鈉、隱丹參酮對照品、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111562-201313，110855-201412，110852-200806，11086-200406，110766-200619，110703-201128，110704-201424)；冠心丹參膠囊[國藥集團(tuán)致君(深圳)坪山制藥有限公司，批號分別為PC-130101，PC-140603，PC-140702]；乙腈和甲醇均為色譜純；磷酸為分析純；水為純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，采用70%甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為113.6、187.2、105.0、110.2、386.0、499.4、433.7 μg·mL-1的對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取研磨均勻的冠心丹參膠囊0.3 g，加入20 mL 70 %甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，8000 r·min-1離心濾過，取續(xù)濾液，以0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件

以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸為流動相B，按表1所示進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長分別為270 nm(檢測丹參成分)、203 nm(檢測三七成分)；柱溫為30 ℃；流速為0.8 mL·min-1；進(jìn)樣量為10 μL。

2.4 陰性對照溶液的制備

參照冠心丹參膠囊的處方工藝過程制備缺丹參或三七的陰性樣品，照2.2項(xiàng)下的供試品制備方法處理，制成缺丹參或三七的陰性樣品溶液。

表1 流動相梯度洗脫表

2.5 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入色譜儀，按照2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測，記錄色譜圖。在與丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品相應(yīng)的保留時(shí)間處沒有色譜峰，說明陰性對照溶液無干擾，見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取按2.1項(xiàng)制備的丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的對照品儲備液適量，質(zhì)量濃度分別為丹參素鈉：7.1、14.2、28.4、56.8、113.6 μg·mL-1；丹酚酸B：11.7、23.4、46.8、93.6、187.2 μg·mL-1；隱丹參酮：6.6、13.1、26.3、52.5、105.0 μg·mL-1；丹參酮Ⅰ：6.9、13.8、27.6、55.1、110.2 μg·mL-1；丹參酮ⅡA：7.3、14.5、29.0、58.0、116.0 μg·mL-1；人參皂苷Rg1：31.2、62.4、124.9、249.7、499.4 μg·mL-1；人參皂苷Rb1：27.1、54.2、108.4、216.9、433.7 μg·mL-1，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾后，按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對其進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。結(jié)果見表2。

表2 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

注：A.丹參主成分混合對照品(270 nm)；B.供試品(270 nm)；C.缺丹參陰性對照品(270 nm)；D.三七主成分混合對照品(203 nm)；E.供試品(203 nm)；F.缺三七陰性對照品(203 nm)；1.丹參素鈉；2.丹酚酸B；3.隱丹參酮；4.丹參酮Ⅰ；5.丹參酮ⅡA；6.人參皂苷Rg1；7.人參皂苷Rb1。圖1 冠心丹參膠囊中主成分的HPLC圖

2.7 精密度試驗(yàn)

按2.1項(xiàng)下方法制備對照品溶液，在2.3項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次。丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.23%、0.27%、0.37%、0.42%、0.13%、0.10%、0.57%，表明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品，按2.2項(xiàng)方法制備6份供試品溶液，進(jìn)行含量測定。丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.87%、1.1%、0.69%、0.99%、1.73%、2.1%、1.65%、1.42%，表明測定方法的重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號的供試品溶液，分別于配制后0、2、4、8、12 h進(jìn)樣測定，結(jié)果丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為0.15%、0.33%、0.21%、0.44%、0.37%、0.46%、0.29%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取6份已知含量的同一批次供試品約0.3 g，精密加入1 mL濃度分別為1.369 1、2.673 0、0.178 5、0.256 3、0.400 5、6.176 8、3.017 3 mg·mL-1的丹參素鈉、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA以及人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品含量測定

取生產(chǎn)批號為PC-130101、PC-140603、PC-140702的冠心丹參膠囊的內(nèi)容物，混勻，分別按2.2項(xiàng)下方法制備3個(gè)批次供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

冠心丹參膠囊成分復(fù)雜，各成分的色譜行為及儀器的響應(yīng)值也有差異。本研究采用二極管陣列檢測器對樣品進(jìn)行190～400 nm全波長掃描。結(jié)果顯示，檢測波長為203、270 nm時(shí)，分離度、峰形、柱效及出峰的穩(wěn)定性較為滿意，結(jié)合已發(fā)表文獻(xiàn)[5-7]，選擇270 nm作為丹參成分檢測波長，203 nm作為三七成分檢測波長。

3.2 流動相的選擇

本研究考察了乙腈-0.1%磷酸、乙腈-甲醇-1.7%甲酸、甲醇-0.1%磷酸，乙腈-水等不同流動相，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸為流動相時(shí)色譜圖的基線較穩(wěn)定，且在本研究所采用梯度下分離效果最好。

3.3冠心丹參膠囊是治療冠心病心絞痛的常用藥物，藥效確切，安全性好，受到廣大醫(yī)生和患者的認(rèn)可。其成分眾多，包括丹參水溶性成分如丹參素和丹酚酸B等，脂溶性成分如隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA等，三七成分如人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等。本研究建立了冠心丹參膠囊中丹參和三七的7種主成分含量的綜合測定方法，為提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好地對其生產(chǎn)過程進(jìn)行質(zhì)控提供參考。

根據(jù)本研究結(jié)果，除了質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)丹參酮ⅡA等丹參脂溶性成分以外，冠心丹參膠囊中丹參水溶性成分丹參素和丹酚酸B、三七成分人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1均較高。丹參水溶性成分具有擴(kuò)張血管、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞等作用[8-9]，人參皂苷類成分對心血管系統(tǒng)也具有保護(hù)作用[10]，建議增加丹參水溶性成分以及三七成分作為冠心丹參膠囊的質(zhì)控指標(biāo)。

與冠心丹參膠囊處方相同的制劑中，冠心丹參滴丸以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[10]。與冠心丹參膠囊處方相近的制劑中，復(fù)方丹參滴丸以丹參素鈉為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[11]。復(fù)方丹參片則以丹酚酸B、丹參酮IIA以及三七總皂苷為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[4]。不同的中藥制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)各不相同，然而對于處方相同或相近的制劑，應(yīng)建立多個(gè)共同質(zhì)控指標(biāo)，以提高同類制劑的質(zhì)量，以確保臨床安全有效。

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DeterminationofMainComponentsinGuanxinDanshenCapsulesbyHPLC

TANGJie1，SONGBingna2，ZHEGNPan1*，DINGMei1

(1.SinopharmZhijun(Shenzhen)PharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China; 2.SinopharmZhijun(Shenzhen)PingshanPharmaceuticalCo.,Ltd.Shenzhen，Guangdong518118，China)

Objective：To determine the content of the tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1in Guanxin Danshen Capsules.Methods：HPLC was performed on C18column using acetonitrile-0.1% phosphoric acid (gradient elution) as the mobile phase at a flow rate of 0.8 mL·min-1.The detection wavelengths were set at 270 nm and 203 nm.The column temperature was 30 ℃.Results：Tanshinol natrium，salvianolic acid B，cryptotanshinone，tanshinoneⅠ，tanshinoneⅡA，ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1showed good linearity in the concentration range of 7.1-113.6，11.7-187.2，6.6-105.0，6.9-110.2，7.3-116.0，31.2-499.4 and 27.1-433.7 μg·mL-1，respectively.And their average recovery rates were 99.51% (RSD=0.91%)，97.73% (RSD=1.35%)，97.20% (RSD=0.78%)，98.47% (RSD=0.69%)，99.12% (RSD=0.31%)，96.64% (RSD=0.86%) and 97.98% (RSD=1.02%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be used for the determination of the main components in Guanxin Danshen Capsules.

Guanxin Danshen Capsules；HPLC；content determination

2015-06-26)

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鄭盼，碩士，研究方向：藥理學(xué)；TEL：(0755)29528333-8203,E-mail:zhengpan@szzhijun.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.10.020