朱彥劉瑩買買提祖農(nóng)?買蘇爾劉鳳霞阿地力江?伊明**

毛吾蘭?買買提依明3張盼盼2阿卜杜熱伊木江?如則2陳勝國(guó)2

1. 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室（烏魯木齊 830011）;

2. 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室; 3.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物教研室

伊木薩克片對(duì)異常黏液質(zhì)型陽痿病證模型大鼠陰莖組織形態(tài)學(xué)的影響*

朱彥劉瑩1△買買提祖農(nóng)?買蘇爾1△劉鳳霞2阿地力江?伊明2**

毛吾蘭?買買提依明3張盼盼2阿卜杜熱伊木江?如則2陳勝國(guó)2

1. 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室（烏魯木齊 830011）;

2. 新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室; 3.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物教研室

目的 研究伊木薩克片對(duì)異常黏型陽痿病證大鼠陰莖組織形態(tài)學(xué)的影響，探尋其對(duì)陰莖勃起功能障礙治療作用的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。方法 取70只性功能正常雄性SD大鼠，其中10只為正常對(duì)照組，余60只為造模組，采用芫荽實(shí)+菠菜實(shí)+濕寒性環(huán)境的干預(yù)條件建立異常黏液質(zhì)證候模型，22周后通過APO勃起實(shí)驗(yàn)，從證候模型中篩出陽痿病證模型，并將其分為病證模型組、藥物干預(yù)組，未成陽痿的大鼠則分為證候模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱證候模型組）。藥物干預(yù)3周后，對(duì)陰莖組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果 （1）HE染色顯示，正常對(duì)照組結(jié)構(gòu)清楚完好。證候模型組大鼠陰莖組織有一定水腫的表現(xiàn)，同時(shí)伴有間質(zhì)纖維化樣的改變。病證模型組陰莖組織中、重度水腫，間質(zhì)纖維化明顯。病證藥物干預(yù)組陰莖組織有一定程度的恢復(fù)。（2）VG染色結(jié)果顯示，證候模型組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維低于正常對(duì)照組（P＜0.05）。病證模型組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維低于證候模型組（P＞0.05）。病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維高于病證模型組（P＜0.05）。（3）Masson染色結(jié)果與VG染色結(jié)果相一致。結(jié)論 異常黏液質(zhì)型陽痿病證大鼠陰莖組織形態(tài)學(xué)可發(fā)生明顯改變，維藥伊木薩克片有促進(jìn)其修復(fù)的作用。

伊木薩克片; 陽萎; 陰莖組織

勃起功能障礙（Erectile dysfunction，ED），俗稱陽痿，是指男子陰莖不舉或舉而不堅(jiān)為主要特征的病癥，并可伴性欲減低與早泄等癥狀[1]。根據(jù)維吾爾醫(yī)學(xué)體液論，可將陽痿分為異常血液質(zhì)型陽痿、異常膽液質(zhì)型陽痿、異常黑膽質(zhì)型陽痿與異常黏液質(zhì)型陽痿，其中以異常黏液質(zhì)型陽痿的發(fā)病率最高[2]。維藥伊木薩克片源自1874年出版的維吾爾醫(yī)學(xué)典籍《醫(yī)科思熱愛扎穆》[3]，現(xiàn)已作為異常黏液質(zhì)型陽痿病證的經(jīng)典對(duì)證藥物。在前期研究工作中，本課題組以維醫(yī)理論為指導(dǎo)，采用濕寒環(huán)境和濕寒飼料復(fù)合干預(yù)的方法建立異常黏液質(zhì)證候大鼠模型，并成功在此基礎(chǔ)上篩選出陽痿模型，而伊木薩克片的干預(yù)治療，能明顯改善維醫(yī)異常黏液質(zhì)型陽痿病證大鼠勃起功能與交配能力[4]。本研究就形態(tài)學(xué)角度研究維醫(yī)異常黏液質(zhì)型陽痿病證大鼠模型陰莖組織的改變及維藥伊木薩克片的影響，從而探索該模型大鼠勃起功能改變及該藥調(diào)節(jié)作用的組織病理學(xué)基礎(chǔ)。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

具有正常性功能的清潔級(jí)雄性（SD）大鼠70只（由交配實(shí)驗(yàn)和APO勃起實(shí)驗(yàn)證實(shí)），雌性大鼠20只，體重（200±20）g由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

二、主要儀器與試劑

BIC - 400 型人工氣候箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），BS - 1105 型電子天平（北京賽多科斯天平有限公司），DHG - 9245A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。阿樸嗎啡（Apomorphine,APO，美國(guó)Sigma公司）、黃體酮（浙江仙琚治藥股份有限公司，批號(hào)：120804）、雌二醇（寧波市三生藥業(yè)有限公司，批號(hào)：B130613）、伊木薩克片(新疆和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130501)。VG染色試劑盒（邁鑫生物 MST - 8001）、Masson病理特殊染色套組（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。

三、實(shí)驗(yàn)方法

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備

70只雄性SD大鼠，經(jīng)交配實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有正常性功能后，從中隨機(jī)抽取10只為正常對(duì)照組，余60只為造模組。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，大鼠自由飲食水，12/12h晝夜交替飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（22±2）℃、濕度為（50±5）%，并對(duì)大鼠生物學(xué)表征進(jìn)行觀察和記錄，1周后進(jìn)入造模階段。

（二）濕寒性飼料的制備

按每1 kg大鼠常規(guī)飼料中加入芫荽實(shí)和菠菜實(shí)各150 g。飼料由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心制備，芫荽實(shí)和菠菜實(shí)均購(gòu)自新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院草藥房。。

（三）異常黏液質(zhì)證與陽痿病證大鼠模型的建立與分組[4]

正常對(duì)照組于常規(guī)方法飼養(yǎng)，溫度為（22±2）℃、濕度為（50±5）%，每日給500 g普通飼料，1000 mL水，200 g墊料。造模組放置于人工氣候箱中飼養(yǎng)[溫度（8±2）℃，濕度（85±5）%]，于10：00～20：00/22：00～10：00分兩批交替放入。造模組每組每日給濕寒飼料500 g，水與墊料同上。造模組與正常組均隨機(jī)飲食水，12/12h人工照明，固定每日20：00～22：00給予飼料、水，更換墊料，并動(dòng)態(tài)觀測(cè)生物學(xué)表征的變化，22周后，通過生物學(xué)表征變化確定征候模型建立后，用APO陰莖勃起實(shí)驗(yàn)和交配實(shí)驗(yàn)從中篩選出陽痿病證模型，將其隨機(jī)分為病證模型組、病證藥物干預(yù)組，未成陽痿者為證候模型，從中隨機(jī)抽出16只設(shè)為證候模型組（其余模型用于其它研究）。

（四）藥物干預(yù)

分組完畢后，將藥物干預(yù)組于常規(guī)條件下飼養(yǎng)，常規(guī)飲食，并用對(duì)證藥物伊木薩克片250 mg/kg灌胃，每天1次，余各組均予以等劑量蒸餾水灌胃，干預(yù)3周，并行生物學(xué)表征觀測(cè)、APO陰莖勃起實(shí)驗(yàn)和性行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過與正常對(duì)照組和模型組的比較，確定藥物的干預(yù)效果。

（五）取材

藥物干預(yù)3 周后，將所有大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉，在恥骨聯(lián)合下緣，從根部將陰莖剪斷，生理鹽水洗去血漬，以濾紙包裹后于10%甲醛溶液中固定。

（六）觀察指標(biāo)與方法

將固定的陰莖組織進(jìn)行石蠟包埋切片，行常規(guī)HE染色。同時(shí)，按照VG染色試劑盒及Masson病理特殊染色套組說明書操作，光鏡下觀察結(jié)果，每個(gè)樣本隨機(jī)選取10個(gè)視野，運(yùn)用Image J 圖像分析軟件分析海綿體平滑肌細(xì)胞與膠原纖維的比值。

（七）統(tǒng)計(jì)

結(jié) 果

一、陰莖組織HE染色結(jié)果

圖1 各組大鼠陰莖組織形態(tài)學(xué)染色結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，正常對(duì)照組大鼠陰莖組織中含有大量平滑肌及膠原纖維，血竇豐富，內(nèi)皮細(xì)胞呈扁平狀附著血竇內(nèi)壁表面。核質(zhì)分界明顯，胞核深染，胞漿豐富，無水腫表現(xiàn)。證候模型組大鼠陰莖組織中基質(zhì)疏松，間質(zhì)有纖維化改變，部分細(xì)胞核染色較淺并伴有空泡樣病變，提示出現(xiàn)水腫。病證模型組大鼠陰莖組織基質(zhì)明顯疏松，間質(zhì)纖維化明顯，細(xì)胞核著色淺，伴有空泡樣改變，核質(zhì)邊界不清，提示水腫明顯。病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織明顯修復(fù)，水腫明顯減輕，間質(zhì)纖維化得到改善。

二、陰莖組織VG染色結(jié)果

光鏡下觀察結(jié)果如圖1所示，VG染色后大鼠陰莖組織膠原纖維染色為紅色，平滑肌組織染色為黃色，核為藍(lán)褐色,平滑肌多與膠原纖維交織。正常對(duì)照組大鼠陰莖組織中平滑肌與膠原纖維豐富，分布均勻，排列整齊、致密。證候模型組大鼠陰莖組織膠原纖維明顯增多，平滑肌明顯減少。病證模型組大鼠陰莖組織較證候模型組膠原纖維進(jìn)一步增多，平滑肌進(jìn)一步減少。病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織較病證模型組膠原纖維明顯減少，平滑肌明顯增多。

結(jié)果如圖2，表1所示：與正常對(duì)照組相比，證候模型、病證模型組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了43.64%、49.09%（P＜0.05）。與證候模型組相比，病證模型組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了9.68%（P＞0.05）。與病證模型組相比，病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值增加了67.86%（P＜0.05）。

圖2 各組大鼠陰莖組織VG染色結(jié)果柱狀圖

表1 大鼠陰莖VG染色平滑肌/膠原纖維結(jié)果（±s）

表1 大鼠陰莖VG染色平滑肌/膠原纖維結(jié)果（±s）

注: 與正常對(duì)照組比較,*: P＜0.05; 與證候模型組比較,△: P＜0.05;與病證模型組比較,#: P＜0.05

樣本含量 平滑肌/膠原纖維 變化率 P值正常對(duì)照組 10 0.55±0.05證侯模型組 16 0.31±0.04*-43.64 0.000病證模型組 15 0.28±0.03*-49.09 0.000病證藥物干預(yù)組 14 0.47±0.06*#-14.55 0.000

三、陰莖組織Masson染色結(jié)果

光鏡下觀察如圖1所見，Masson染色后陰莖組織膠原纖維染色為藍(lán)色，平滑肌組織染色為紅色，核為藍(lán)褐色，平滑肌多與膠原纖維交織。正常對(duì)照組大鼠陰莖組織中平滑肌與膠原纖維豐富，分布均勻，排列整齊、致密。證候模型組膠原纖維明顯增多，平滑肌明顯減少。病證模型組大鼠陰莖組織較證候模型組膠原纖維進(jìn)一步增多，平滑肌進(jìn)一步減少。病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織較病證模型組膠原纖維明顯減少，平滑肌明顯增多。

結(jié)果如圖3，表2所示：與正常對(duì)照組相比，證候模型、病證模型組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了40.29%、46.42%（P＜0.05）。與證候模型組相比，病證模型組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了12.50%（P＞0.05）。與病證模型組相比，病證藥物干預(yù)組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值增加了61.78%（P＜0.05）。

表2 大鼠陰莖Masson染色平滑肌/膠原纖維結(jié)果（±s）

表2 大鼠陰莖Masson染色平滑肌/膠原纖維結(jié)果（±s）

注: 與正常對(duì)照組比較,*: P＜0.05; 與證候模型組比較,△: P＜0.05;與病證模型組比較,#: P＜0.05

樣本含量 平滑肌/膠原纖維 變化率 P值正常對(duì)照組 10 0.53±0.05證候模型組 16 0.32±0.04*-40.29 0.000病證模型組 15 0.28±0.01*-46.42 0.000病證藥物干預(yù)組 14 0.44±0.05*#-14.67 0.000

討 論

流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，全球現(xiàn)大約1.52億男性患有ED，估計(jì)2025年將有3.22億男性受到這一疾病的困擾[6,7]。 顯然ED已成為當(dāng)今困擾人類健康的一大難題，目前患者接受最容易也是最為廣泛的治療方法為藥物治療，但其治療效果尚有不足。

維吾爾醫(yī)學(xué)作為祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中不可分割的一部分，有其獨(dú)立的理論體系，并對(duì)陽痿、早泄等男科疾病有其獨(dú)特治療優(yōu)勢(shì)。維醫(yī)學(xué)體液論認(rèn)為[5,8,9]人體及其組織均具有 4 種體液質(zhì)（血液質(zhì)、膽液質(zhì)、黏液質(zhì)、黑膽質(zhì)）的對(duì)立統(tǒng)一關(guān)系，機(jī)體的體液平衡失調(diào)，及產(chǎn)生異常體液是疾病產(chǎn)生的核心因素。在四種不同證型陽痿中，以異常黏液質(zhì)性最為多見。

異常黏液質(zhì)型陽痿屬全身性疾病，多因常食生寒生濕性食物、居住與工作環(huán)境寒濕過盛、缺乏運(yùn)動(dòng)、食品與環(huán)境污染等原因?qū)е聺窈畬傩云?，肝臟功能改變，產(chǎn)生異常黏液質(zhì)體液，使機(jī)體熱能下降，物質(zhì)代謝活動(dòng)減慢，代謝產(chǎn)物滯集于器官組織內(nèi)，進(jìn)而導(dǎo)致腦的精神力減退，神經(jīng)反射與傳導(dǎo)功能的敏感性降低，神經(jīng)調(diào)節(jié)功能紊亂、性欲降低，并產(chǎn)生相關(guān)病理性變化，引發(fā)陽痿[10,11]。此類人群表現(xiàn)為面色白皙無華，機(jī)體松弛，四肢冰涼，腰部冷痛、雙膝酸軟，尿次多、尿色清，嗜睡，流涎水，舌體大、苔白膩，脈象粗、緩、弱等異常黏液質(zhì)氣質(zhì)[9]。

在前期工作中，本課題組依據(jù)維吾爾醫(yī)學(xué)體液論，以“證候表征模型”為造模理念，以維吾爾醫(yī)學(xué)理論為指導(dǎo)，選擇具有濕寒屬性的菠菜實(shí)和芫荽實(shí)[12]，按一定比例與基礎(chǔ)大鼠飼料進(jìn)行配置而制備了不同的濕寒性飼料，在濕寒性環(huán)境中飼養(yǎng)，成功建立了異常黏液質(zhì)證大鼠模型。同時(shí)，通過APO勃起實(shí)驗(yàn)和交配實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該模型大鼠勃起功能顯著減退，交配能力顯著減弱。經(jīng)對(duì)證維藥伊木薩克片治療性干預(yù)后后，勃起功能和交配能力均得到顯著恢復(fù)[4]。隨后的系列研究[13-15]表明，該病證的發(fā)生與性腺軸神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂有關(guān)，而該對(duì)證維藥的調(diào)控機(jī)制亦是通過調(diào)節(jié)性腺軸相關(guān)激素來實(shí)現(xiàn)的。

陰莖勃起是通過陰莖海綿體平滑肌舒張來實(shí)現(xiàn)的，陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞數(shù)量上和形態(tài)上的改變，必然會(huì)引起陰莖海綿體平滑肌舒張和收縮功能上的改變[16,17]。本研究觀察了陽痿病證模型大鼠陰莖組織形態(tài)學(xué)的變化及對(duì)證藥物伊木薩克片的干預(yù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，證候模型和病證模型組大鼠陰莖組織發(fā)生了明顯的形態(tài)學(xué)損害，尤其在病證模型組大鼠陰莖組織可見基質(zhì)明顯疏松，間質(zhì)纖維化明顯，細(xì)胞核著色淺，伴有空泡樣改變，核質(zhì)邊界不清，水腫明顯，大鼠陰莖組織平滑肌細(xì)胞顯著減少，膠原纖維顯著增多。經(jīng)過伊木薩克片干預(yù)后，病證模型組大鼠陰莖組織明顯修復(fù)，水腫減輕，間質(zhì)纖維化得到改善，平滑肌細(xì)胞數(shù)量明顯增多。說明伊木薩克片可能是通過修復(fù)陽痿病證模型大鼠陰莖組織海綿體平滑肌細(xì)胞促進(jìn)大鼠勃起能力。該結(jié)果為以往研究中該病證的勃起功能的改變與伊木薩克片的調(diào)節(jié)機(jī)制提供了組織病理學(xué)基礎(chǔ)。

綜上所述，陰莖組織的形態(tài)學(xué)改變?cè)诰S醫(yī)異常黏液質(zhì)型陽痿病證的發(fā)生發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用，而海綿體平滑肌細(xì)胞的修復(fù)作用可能是伊木薩克片對(duì)其治療作用的關(guān)鍵機(jī)制之一，是該藥對(duì)異常黏液質(zhì)型陽痿病證勃起功能治療作用的組織病理學(xué)基礎(chǔ)，但其具體機(jī)制與作用方式還需要進(jìn)一步研究。

1 中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書編輯委員會(huì).中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書維吾爾醫(yī)學(xué)分冊(cè). 上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 2005: 120-124

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3 穆哈穆德愛扎木汗. 醫(yī)科思熱愛扎穆. 烏魯木齊: 新疆人民衛(wèi)生出版社, 2006: 1622-1633

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（2015-04-08收稿）

The effects of Yimusake on penis tissue morphological changes of rat models with abnormal balgam syndrome and impotence disease induced by Uyghur medicine＊

Zhu Yanliuying1△, Maimaitizunong?Maisuer1△, Liu Fengxia2, Adilijiang?Yiming2**,
Maowulan?Maimaitiyiming3, Zhang Panpan2, Abudureyimujiang?Ruze2, Chen Shengguo2
1.Department of Pathophysiology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China; 2.Department of Human Anatomy, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University; 3.Department of Biology, Collge of Basic Medicine, Xinjiang Medical University Corresponding author: Adilijiang?Yiming, E-mail: adljym@163.com

Objective To study the effects of Yimusake on penis tissue morphological changes of rat models with abnormal balgam syndrome and impotence disease induced by Uyghur medicine. Methods A total of 70 normal mature male SD rats were enrolled in the study, and 10 of them were randomly chosen as the control group, other 60 were treated with spinach and coriander diet in a cold and humid environment until the model of abnormal balgam syndrome was established. Biological characteristics of rats were observed about 22 weeks until establishment of abnormal balgam syndrome model, then through APO erectile experiment and mating experiment, the rats were randomly divided into abnormal balgam syndrome with impotencedisease model group and medication intervention group of abnormal balgam syndrome with impotence disease model. The non-impotence rats were abnormal balgam syndrome model group. After 3 weeks intervention, the morphological changes of penis tissues were observed. Results (1) HE staining showed that structure of penis tissue exhibits normal in normal control group, edema and interstitial fbrosis in abnormal balgam syndrome model group, signifcant edema and interstitial fbrosis in abnormal balgam syndrome with impotence disease model group, respectivey. Structure of rat penile tissue showed minor repair in medication intervention group. (2) V.G staining results showed that the ratio of smooth muscle/collagen fbers in penis tissue of rats in abnormal balgam syndrome model group was signifcantly lower than that in the normal control group (P＜0.05), and the ratio of smooth muscle/collagen fbers of abnormal balgam syndrome with impotence disease model group was lower than that of abnormal balgam syndrome model group (P＞0.05). The ratio of smooth muscle/collagen fibers of medication intervention group was higher than that of abnormal balgam syndrome with impotence disease model group (P＜0.05), lower than that of the normal control group (P＜0.05). (3) Masson staining results were similar with V.G staining results. Conclusion Signifcant morphological changes of penis tissue were found in abnormal balgam syndrome with impotence disease rat model induced by Uygur medicine, and the damages can be repaired by Yimusake.

Yimusake; impotence; penis tissue

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.06.002

R 698.1

資助: 國(guó)家自然科學(xué)基金（81160470，81260581）**

, E-mail: adljym@163.com

△為共同第一作者