王福根 高福平 魏 謹(jǐn) 馬 平

胃癌是危害我國(guó)人民健康的重大疾病之一，發(fā)病率位于常見致死癌癥的第2 位［1］。我國(guó)地廣人多，成人幽門螺旋桿菌感染率高達(dá)40%～60%，屬于胃癌高發(fā)國(guó)家，每年胃癌新發(fā)病例約40 萬(wàn)例，死亡約35 萬(wàn)例。熱休克蛋白(heat-shock protein，HSPs)是一組高度保守的蛋白家族，存在于多種生物體內(nèi)，當(dāng)機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)時(shí)新合成或合成增加。HSPs 的亞型熱休克蛋白90(heat-shock protein 90，HSP90)與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控及生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)［2］。近年來(lái)，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)表明HSP90 與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系。我院采用免疫組化87-8973 二步法檢測(cè)胃癌組織中HSP90 的表達(dá)，分析其與患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集南京市高淳人民醫(yī)院2009 年1月至2014 年12 月進(jìn)行手術(shù)切除胃癌的80 例患者，并收集20 例癌旁正常組織作為對(duì)照(距離癌組織＞5 cm)，所有病例均經(jīng)病理診斷明確。男性患者57 例，女性23 例;年齡27 ～78 歲，中位年齡62 歲;按照TNM分期，I+II 期33 例，Ⅲ+IV 期47 例?；颊咝g(shù)前均未行放、化療。

1.2 試劑兔抗人單克隆抗體HSP90(HSP90AB1)購(gòu)自南京偉沃生物科技有限公司。87-8973 試劑盒及DAB 試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。所有標(biāo)本經(jīng)4%的中性甲醛固定，石蠟包埋，3 ～4 μm 厚連續(xù)切片。免疫組化采用87-8973 二步法染色，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行規(guī)范操作。

1.3 結(jié)果判讀腫瘤細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。每張切片的陽(yáng)性強(qiáng)度分為:無(wú)著色為0 分，淡黃色1分，棕黃色及棕褐色分別2 分、3 分，高倍鏡下隨機(jī)對(duì)每張切片的1 000 個(gè)細(xì)胞。按陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比評(píng)分:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分。2 項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相加，0 ～2 分為陰性，3 ～6 分為陽(yáng)性。由2 位高年資病理科醫(yī)師經(jīng)雙盲法判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例或百分比表示，統(tǒng)計(jì)分析采用χ2檢驗(yàn)，以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HSP90 蛋白在胃癌組織、癌旁正常組織中的表達(dá)

80 例胃癌中，51 例呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為63.75%;20 例胃正常組織中，6 例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為30.00%。胃癌組織中HSP90 蛋白表達(dá)高于其對(duì)應(yīng)癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.44，P=0.01)。

2.2 HSP90 的表達(dá)與胃癌臨床病理特征關(guān)系不同腫瘤分化程度、侵犯深度、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移及TNM 分期的胃癌組織HSP90 陽(yáng)性率不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);不同性別、年齡、腫瘤大小、部位、Borrmann 分型的胃癌組織HSP90 陽(yáng)性率進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表1。

3 討論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素多步驟復(fù)雜的過(guò)程［3，4］。HSPs 是由Tissieres 等于20 世紀(jì)70 年代發(fā)現(xiàn)的一類新蛋白。HSPs 在生物體內(nèi)發(fā)揮分子伴侶的功能，可維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定，提供細(xì)胞生存率，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育以及基因轉(zhuǎn)錄中起重要的作用。當(dāng)機(jī)體受到各種理化因素侵?jǐn)_時(shí)，機(jī)體激活HSP 基因表達(dá)HSPs，保護(hù)細(xì)胞免于凋亡。HSP90 是小分子HSPs 家族中的重要成員，在蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)功能、亞基組裝等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。HSP90 的過(guò)度表達(dá)對(duì)維護(hù)腫瘤細(xì)胞穩(wěn)定起著重要作用。HSP90 是一種ATP 酶依賴的分子伴侶，HSP90 的構(gòu)象可以發(fā)生改變，其ATP/ADP 結(jié)合部位有構(gòu)象轉(zhuǎn)換的作用，HSP90 以開放及閉合形式發(fā)揮著作用，是其作為分子伴侶的重要特征之一［5］。HSP90 的底物蛋白涉及到幾乎所有的細(xì)胞過(guò)程。

HSP90 也可與其輔助的分子伴侶調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡，該調(diào)控是通過(guò)腫瘤壞死因子受體、AKT 與NFKB 介導(dǎo)的，然而，HSP90 另一重要作用是促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)化。HSP90 可與底物蛋白如突變蛋白、蛋白激酶、激素受體等相互發(fā)生作用，促使它們維持在一種易被激活的狀態(tài)［6］。HSP90 在大多數(shù)腫瘤中表達(dá)增高。胰腺癌中HSP90a 呈選擇性高表達(dá)［7］，且HSP90 高表達(dá)和胰腺癌的臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性。杜文眾等［8］認(rèn)為HSP90的表達(dá)水平與垂體腺瘤侵襲性有關(guān)，其表達(dá)水平有可能作為判斷垂體腺瘤侵襲性和預(yù)后的指標(biāo)。王桂蘭等［9］研究發(fā)現(xiàn)涎腺腫瘤惡性組HSP90 陽(yáng)性率顯著高于良性組，HSP90 可促進(jìn)涎腺惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本文HSP90 在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

正常胃組織中HSP90 存在的表達(dá)是其作為分子伴侶參與細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的調(diào)節(jié)，而在胃癌組織中HSP90 的過(guò)表達(dá)，可能與HSP90 調(diào)節(jié)和穩(wěn)定胃癌細(xì)胞的惡性增殖有關(guān)。對(duì)于HSP90 與不同腫瘤病理特征及預(yù)后的關(guān)系報(bào)道尚無(wú)一致結(jié)論。Pick 等［10］研究認(rèn)為HSP90 與乳腺癌的腫瘤大小、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。Kurahashi 等［11］在前列腺癌中的研究發(fā)現(xiàn)HSP90 與腫瘤大小、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌中HSP90 蛋白的陽(yáng)性率與腫瘤分化程度、侵犯深度、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移及TNM 分期相關(guān)，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

表1 80 例胃癌患者胃癌組織中HSP90 的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

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