王曉娜，趙日強(qiáng)，章 林，劉慧娟，崔昌漢，章 森，周 勇，任曉光，孫景花

(1.吉林省林業(yè)科學(xué)研究院，吉林 長春 130033;2.吉林省林業(yè)廳，吉林 長春 130022;3.琿春市林業(yè)局，吉林 延邊133300;4.輝南縣林業(yè)局，吉林 通化 135100)

沙松(Abies holophylla Maxim)為國產(chǎn)冷杉屬中材質(zhì)優(yōu)良的樹種，因樹形優(yōu)美、生長快，被人們稱為“沙大個(gè)”“傻大個(gè)”［1］。目前，沙松種子育苗繁殖率較低［2］，且難以保持單株優(yōu)良性狀，而且扦插難度大［3，4］，影響了沙松種質(zhì)資源的保護(hù)與利用。2010 年以來，作者對沙松組織培養(yǎng)進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料

采集沙松優(yōu)樹上的成熟種子，以其成熟胚作為外植體。

1.2 方法

1.2.1 消毒處理

經(jīng)沙藏低溫處理60 d 的沙松成熟種子，用流水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上去種殼，并用70%酒精浸泡18 s，無菌水沖洗3 遍，再用0.1%氯化汞浸12 ～15 min，并不斷攪動(dòng)，無菌水漂洗數(shù)次。最后，用無菌濾紙吸干表面水分，取出胚進(jìn)行接種。

1.2.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

初代培養(yǎng):MS、SH、N6、WPM、改良DCR+6－BA、NAA。

繼代培養(yǎng):(1)1/2SH、1/2 改良GCR+NAA、IBA;(2)1/2SH+C。

供試培養(yǎng)基均附加3%蔗糖、0.6%瓊脂，pH 5.8 ～6.0，并在121℃高溫高壓環(huán)境下滅菌20 min。光照強(qiáng)度1 200 ～1 500 Lx，光照周期16 h/8 h，培養(yǎng)溫度22℃～25℃，濕度為70%左右。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)

2.1.1 不同培養(yǎng)基對沙松外植體不定芽誘導(dǎo)的影響

初代培養(yǎng)的目的是誘導(dǎo)胚分化出不定芽，建立沙松無菌苗體系。采用試驗(yàn)設(shè)計(jì)的MS 等5 種基本培養(yǎng)基，每種均附加6－BA 0.5 mg·L－1，接種外植體后進(jìn)行觀測，結(jié)果見表1。

表1 不同培養(yǎng)基對外植體不定芽誘導(dǎo)的影響Tab.1 The effect of different medium on explant adventitious bud induction

表2 不同激素組合對外植體誘導(dǎo)不定芽的影響Tab.2 The effect of different hormone combination on explant adventitious bud induction

從表1 中可以看出，不同培養(yǎng)基對外植體 成熟胚的誘導(dǎo)差異顯著，低鹽濃度改良DCR、SH、WPM 培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果突出，誘導(dǎo)率在48%～55%;而高鹽濃度MS 和N6 培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果較差，均在10%以下。經(jīng)進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在以后不定芽的生長中，高鹽濃度下誘導(dǎo)出的不定芽，易變異、生長慢，分離后不易長成有效苗。

2.1.2 不同激素組合對不定芽誘導(dǎo)的影響

以改良DCR 為基本培養(yǎng)基，附加不同組合的細(xì)胞分裂素6－BA 和生長素NAA，研究其對不定芽誘導(dǎo)的影響，結(jié)果見表2。

從表2 中可以看出，單獨(dú)使用6－BA，就能誘導(dǎo)出不定芽，其質(zhì)量濃度在2.0 mg·L－1時(shí)，誘導(dǎo)效果最佳，誘導(dǎo)率為63.16%;但6－BA 質(zhì)量濃度達(dá)到4.0 mg·L－1時(shí)，誘導(dǎo)率急劇下降到35.29%，且誘導(dǎo)出的不定芽容易產(chǎn)生變異。當(dāng)6－BA 與NAA 配合使用時(shí)，使用任何質(zhì)量濃度的NAA 都使得芽誘導(dǎo)率降低，高質(zhì)量濃度的NAA 可導(dǎo)致外植體完全不分化。這一結(jié)果符合Miller 和Skoog［5］關(guān)于器官分化方向的激素控制理論。

2.2 繼代培養(yǎng)

2.2.1 基本培養(yǎng)基和激素對不定芽伸長生長的影響

誘導(dǎo)出的不定芽要轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中，以使其更好地生長。繼代培養(yǎng)基對不定芽生長的影響試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 基本培養(yǎng)基和激素對不定芽伸長生長的影響Tab.3 The effect of basic medium and hormone on elongation growth of adventitious bud

從表3 中可以看出，沙松不定芽在轉(zhuǎn)接到無生長激素、低鹽濃度的基本培養(yǎng)基上生長適宜，其中1/2SH 生長狀況要好于1/2DCR。不同質(zhì)量濃度的生長素組合均對不定芽伸長有抑制作用，且隨著生長素濃度的升高，不定芽生長表現(xiàn)越差。

2.2.2 活性炭對沙松不定芽伸長生長的影響

表4 活性炭對不定芽伸長生長的影響Tab.4 The effect of activated carbon on elongation growth of adventitious bud

從表4 中可以看出，添加活性炭對不定芽生長影響很大，活性炭可促進(jìn)其伸長生長，隨著活性炭質(zhì)量濃度的增加，伸長生長越明顯，枯死率也明顯下降，當(dāng)活性炭質(zhì)量濃度達(dá)到0.10 mg·L－1時(shí)對沙松不定芽的伸長生長最為適宜。

3 結(jié)論

以沙松成熟胚為外植體，選用MS、SH、N6、改良DCR、WPM 為基本培養(yǎng)基，在每種培養(yǎng)基均附加6－BA 0.5 mg·L－1的誘導(dǎo)條件下，不定芽誘導(dǎo)效果差異顯著，低鹽濃度的改良DCR、SH、WPM 培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果突出，誘導(dǎo)率在48%～55%;而高鹽濃度的MS 和N6 培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果較差，均在10%以下;誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明，初代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基組合為改良DCR+6－BA 2.0 mg·L－1，誘導(dǎo)率可達(dá)到63.16%。

沙松不定芽在繼代生長階段，以無添加激素的1/2 SH 培養(yǎng)基上生長狀況最佳，30 d 平均伸長0.7 cm，添加0.1 mg·L－1的活性炭對沙松不定芽的伸長生長最為適宜。

［1］朱俊義，周繇.中國長白山木本植物彩色圖志［M］.長春:吉林大學(xué)出版社，2013.

［2］李廣祥，胡嘯妍.沙松播種育苗技術(shù)［J］.吉林林業(yè)科技，2004，33(5):24－25.

［3］麻廣輝，管清毅.沙松扦插繁殖技術(shù)［J］.中國林副特產(chǎn)，2004，10(5):15－16.

［4］孫岳胤，劉殿清，楊憲燁，等.沙松嫩枝扦插技術(shù)的研究［J］.中國林副特產(chǎn)，1999，2(1):14－15.

［5］曹孜義，劉國民.實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程［M］.蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，1999.