張麗勤

[摘要] 目的 研究對葉百部中非生物堿的化學(xué)成分，并明確其結(jié)構(gòu)。 方法 采用滲漉、提取等操作，提取對葉百部中的非生物堿，經(jīng)核磁和薄層色譜對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。 結(jié)果 從對葉百部中提取出3個(gè)化合物，結(jié)構(gòu)確證為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。 結(jié)論 對葉百部中非生物堿的化學(xué)成分主要為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。

[關(guān)鍵詞] 對葉百部；非生物堿；化學(xué)成分

[中圖分類號] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）08（c）-0091-04

[Abstract] Objective To study the chemical components of non-alkaloids in Stemonaceae Stemona tuberosa and clarify their structures. Methods By operations of percolation and extraction，non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa were extracted and their structures were confirmed by nuclear magnetism and thin-layer chromatography. Results There were 3 chemical compounds extracted from Stemonaceae Stemona tuberosa and their structures were confirmed as β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol. Conclusion The chemical components of non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa mainly include β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol.

[Key words] Stemonaceae Stemona tuberosa；Non-alkaloid；Chemical component

百部為常用中藥，又名百部貨、婆婦草、百條根、百部草、鬧虱藥等，性味甘、苦，微溫，歸肺經(jīng)，具有潤肺止咳、殺蟲滅虱的功效[1]，臨床應(yīng)用比較廣泛，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。百部的主要化學(xué)成分和主要活性成分是生物堿，其殺蟲和止咳效果也是生物堿藥理活性的集中體現(xiàn)[2]。國內(nèi)外對于百部類生物堿的化學(xué)成分研究較多，但是對非生物堿類成分尚無系統(tǒng)的研究[3-4]。百部的藥理作用研究也較多，但大都限于百部不同濃度水提物和醇提物制劑[5]?；瘜W(xué)成分的系統(tǒng)研究對于百部藥理作用機(jī)制的闡明是必需的，同時(shí)也是發(fā)現(xiàn)有生物活性的新化合物的基礎(chǔ)和前提。本研究中就對葉百部中非生化堿的化學(xué)成分進(jìn)行研究。

1材料與方法

1.1 材料

核磁共振光譜儀為Bruker DRX-300/600型核磁共振儀測定型（TMS為內(nèi)標(biāo)）；恒溫水浴鍋為國華電器有限公司生產(chǎn)。

薄層硅膠GF254、薄層硅膠H、100～200目及200～300目柱硅膠均購自青島海洋化工廠；常規(guī)用試劑均為AR級，水為重蒸水；10%硫酸乙醇溶液、溴甲酚綠乙醇溶液等顯色劑均按《中草藥有效成分提取分離》參考書中方法配制[6]。

百部藥材購自河北安國（大百部）Stemona Tuberosa Lour.。

1.2 方法

1.2.1 藥材的提取與分離 對葉百部藥材52 kg經(jīng)95%乙醇滲漉提取，滲漉液經(jīng)濃縮后，加入5%稀鹽酸，將pH調(diào)解至1～2，過濾，濾液用濃氨水堿化至pH=10，用氯仿萃取至濾液無碘化鉍鉀反應(yīng)，回收氯仿，得總生物堿部分。將氯仿萃取后堿液（約50 L）用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋干，用pH試紙檢測，基本為中性。稠膏用水稀釋后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取物420 g，正丁醇萃取物600 g。將乙酸乙酯萃取物420 g進(jìn)行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜檢測，合并相同流分，共分成11組分（Ⅰ～Ⅺ）。組分Ⅰ經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從石油醚-醋酸乙酯流份中得到化合物1。組分Ⅲ經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從二氯甲烷-乙酸乙酯流份中得到化合物3。另外組分Ⅲ的二氯甲烷-乙酸乙酯（50∶1和25∶1）流份合并后再經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶1）梯度洗脫，從二氯甲烷-甲醇流份中得到化合物2。提取分離流程見圖1。

1.2.2 成分的提取 為進(jìn)一步明確對葉百部的化學(xué)成分和今后探討對葉百部治療疾病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及更好地控制該藥的質(zhì)量，本研究開展對葉百部的生物堿化學(xué)成分研究的同時(shí)開展了非生物堿部分的化學(xué)成分研究。通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結(jié)晶等方法從中分離。

2 結(jié)果

2.1 成分提取的結(jié)果

通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結(jié)晶等方法從中分離得到了3個(gè)化合物，根據(jù)其波譜數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)，確定這3個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)分別鑒定為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇（表1）。

2.2 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1 白色粉末，易溶于二氯甲烷、氯仿，10%H2SO4顯紫色，初步推測該化合物為甾醇或三萜類成分。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）譜顯示δH5.3（1H，d，J=4.4 Hz）為典型的烯氫信號，δH 4.61（1H，m）為連氧次甲基質(zhì)子信號，δH1.25[brs，（CH2）n]為一組長鏈脂肪烴的強(qiáng)強(qiáng)偶合峰，δH1.02（3H，s）、δH 0.78～0.94（m，5×CH3）和δH0.68（3H，s）顯示有7個(gè)甲基氫信號，這些信號進(jìn)一步證明了該化合物為一甾醇類成分。將該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)β-谷甾醇棕櫚酸酯數(shù)據(jù)[7]對照一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇棕櫚酸酯（圖2）。

2.2.2 化合物2 白色針晶，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇，溴甲酚綠反應(yīng)和三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)均為陽性，表示結(jié)構(gòu)中含有羧基和酚羥基。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜顯示芳香區(qū)存在兩組氫信號δH6.83（1H，d，J=9.0Hz），δH7.43～7.45（2H，m），說明該化合物可能存在三取代苯環(huán)，且存在鄰位取代氫；δH12.43（1H，s）為羧基質(zhì)子信號，δH9.78（1H，s）為酚羥基質(zhì)子信號，δH3.80（3H，s）為甲氧基上的氫信號。經(jīng)與文獻(xiàn)[8]3-羥基-4-甲氧基苯甲酸數(shù)據(jù)對照一致，故鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（圖3）。

2.2.3 化合物3 無色針晶，10%硫酸乙醇顯紫紅色，與對照品β-谷甾醇共薄層，經(jīng)3種不同的溶劑系統(tǒng)展開，Rf值均一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3 討論

百部作為我國的傳統(tǒng)中藥，具有很好的止咳、殺蟲效果，在臨床上一直有著廣泛的應(yīng)用。在對葉百部的有效成分中，對葉百部中的生物堿是發(fā)揮殺蟲和止咳效果的核心成分，也是既往研究的重點(diǎn)[9]。目前國內(nèi)已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，對葉百部中生物堿的殺蟲效果是市面上最強(qiáng)效殺蟲劑的10倍左右，其止咳效果也遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于常規(guī)藥物[10-11]。鑒于對葉百部的藥用價(jià)值，近年來關(guān)于其化學(xué)成分的研究不斷增多，其藥理作用也從傳統(tǒng)的止咳、殺蟲逐漸擴(kuò)展至抗菌、鎮(zhèn)痛、止咳、殺蟲等諸多方面，針對對葉百部藥理活性成分的研究也不斷豐富。目前學(xué)者對百部化學(xué)成分的研究報(bào)道主要集中在生物堿類和二苯乙烯類成分，而其他成分較少報(bào)道[12-13]。隨著百部藥理作用、臨床應(yīng)用研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)百部除具有殺蟲、鎮(zhèn)咳祛痰作用外，尚具有抗菌和抗病毒、松弛支氣管平滑肌、中樞鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等多方面的作用，這是生物堿類成分遠(yuǎn)不能包羅的[14]。根據(jù)中藥整體作用的特點(diǎn)，百部這些功效可能是其在生物體內(nèi)通過多種類型的化學(xué)成分發(fā)揮協(xié)同作用而表現(xiàn)出的綜合效應(yīng)[10]。鑒于此，有必要對百部的非生物堿類化學(xué)成分也進(jìn)行深入研究，為百部進(jìn)一步研究、開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。在本次研究中，筆者通過反復(fù)硅膠柱色譜，從對葉百部的85%乙醇提取物中共分離得到3個(gè)化合物。通過光譜數(shù)據(jù)分析等手段，鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：β-谷甾醇棕櫚酸酯（化合物1）、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（化合物2）、β-谷甾醇（化合物3）。在既往的臨床研究中，對葉百部的生物堿成分一直被認(rèn)為是該中藥材活性成分研究的重點(diǎn)，截至到目前，約有11個(gè)藥理活性較好生物堿完成了結(jié)構(gòu)確證和藥理活性評價(jià)[15]。但是關(guān)于對葉百部中非生物堿的研究，僅在近幾年內(nèi)才逐漸得到重視，越來越多的非生物堿化合物被發(fā)現(xiàn)。王珺等[16]對對葉百部中的非生物堿進(jìn)行了研究，提取出的11個(gè)化合物中9個(gè)為新型化合物，大大豐富了對葉百部非生物堿成分研究的內(nèi)容。在本次研究中發(fā)現(xiàn)的3個(gè)化合物，均為對葉百部中含量較高的非生物堿，與既往的相關(guān)研究有著諸多相互佐證之處，提取和結(jié)構(gòu)確證手段也較為可靠。通過本次的研究，使我們對對葉百部的非生物堿成分有了更為清晰的認(rèn)識，為將來實(shí)現(xiàn)這些化合物的合成和分子水平的結(jié)構(gòu)研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2015-02-02 本文編輯：衛(wèi) 軻）