潘俊秀 范楚平 范如艷 陳禮娟 肖志兵 劉 嬋

南華大學(xué)附屬郴州市第一人民醫(yī)院 郴州市兒童哮喘防治技術(shù)研發(fā)中心，湖南省郴州市 423000

哮喘是當(dāng)今世界最常見的慢性疾病之一，是由多種炎癥細(xì)胞參與的氣道可逆性慢性炎癥，易感者對各種激發(fā)因子具有氣道高反應(yīng)性，引起氣道縮窄。表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、呼吸困難、胸悶或咳嗽等癥狀。呼吸道病毒感染是誘發(fā)哮喘急性發(fā)作的最重要因素，病毒感染誘發(fā)哮喘急性發(fā)作的機(jī)制主要有：產(chǎn)生氣道炎性因子；產(chǎn)生特異性IgE，形成Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)；損傷氣道上皮，引起氣道高反應(yīng)。本研究應(yīng)用直接免疫熒光法（DIF）對哮喘急性發(fā)作患兒支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行7種病毒抗原檢測分析，探討病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象 實(shí)驗(yàn)組為2013－2014年本院住院兒童哮喘急性發(fā)作患兒，共67例，對其支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行呼吸道病毒檢測，男35例，女32例。年齡0～5歲，其中＜6個月32例，～2歲26例，～5歲9例。對照組為2013－2014年本院門診隨診兒童哮喘緩解期患兒，共73例，對其支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行呼吸道病毒檢測，男39例，女34例。年齡0～5歲，其中＜6個月33例，～2歲29例，～5歲11例。診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會兒科分會呼吸學(xué)組頒布的標(biāo)準(zhǔn)[1，2］。兩組在年齡構(gòu)成、性別以及病程之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組患兒一般資料比較（±s）

表1 兩組患兒一般資料比較（±s）

組別 例數(shù) 年齡（歲） 性別（男／女） 病程（月）對照組 73 2.73±1.05 39／34 3～26（5）實(shí)驗(yàn)組 67 2.84±1.02 35／32 3～25（6）

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集。實(shí)驗(yàn)組患兒入院給予常規(guī)抗哮喘治療，癥狀緩解1d后進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，對照組患兒隨診當(dāng)天進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，兩組皆取第二管支氣管肺泡灌洗液1～2ml然后保存于6～8ml PBS的離心管充分混合，立即送檢[3～6］。

1.2.2 病毒病原學(xué)分析。樣本懸液于2 500r／min離心5min，收集細(xì)胞做細(xì)胞涂片，應(yīng)用直接免疫熒光法檢測呼吸道7種常見病毒：RSV、ADV、IFA、IFB、PIVⅠ、PIVⅡ、PIVⅢ。

1.2.3 試劑與儀器。試劑盒為美國DHI公司生產(chǎn)，采用日本Olympus cx21型熒光顯微鏡。

2 結(jié)果

2.1 兩組支氣管肺泡灌洗液病毒檢出率比較 見表2。實(shí)驗(yàn)組病毒檢出率明顯高于對照組（P＜0.01），以RSV檢出率最高，提示病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV是引起兒童哮喘急性發(fā)作的主要病毒。

2.2 不同年齡兒童哮喘急性發(fā)作支氣管肺泡灌洗液病毒檢測分布情況 見表3。不同年齡兒童哮喘急性發(fā)作病毒檢測分布情況提示6個月以下年齡組陽性率最高，為84.4%，其中RSV陽性率高達(dá)59.4%，提示病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV是引起嬰幼兒哮喘急性發(fā)作的主要病毒。

表3 不同年齡兒童哮喘急性發(fā)作支氣管肺泡灌洗液病毒檢測分布情況（n）

3 討論

哮喘是常見的慢性疾病之一，全世界大約有3億哮喘患者。哮喘患病率在不同人群介于1%～3%，并且在大多數(shù)國家仍在上升，尤其在年幼兒童。2002年我國兒童哮喘流行病學(xué)調(diào)查顯示患病率為0.5%～3%，個別地區(qū)則高達(dá)5%，哮喘已成為嚴(yán)重的公眾衛(wèi)生問題，從而引起世界各國的極大關(guān)注[7］。支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞參與的氣道可逆性慢性炎癥，這種氣道炎癥使易感者對各種激發(fā)因子具有氣道高反應(yīng)性，并可引起氣道平滑肌痙攣、黏膜腫脹、分泌增加。表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、呼吸困難、胸悶或咳嗽等癥狀。常在夜間或清晨發(fā)作、加劇，常常出現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣流受限，使患者肺功能不同程度下降[8～11］。呼吸道病毒感染是誘發(fā)哮喘的最重要因素，年齡越小相關(guān)性越大，嬰幼兒高達(dá)90%的哮喘發(fā)作與呼吸道病毒感染有關(guān)。引起兒童呼吸道感染的病毒種類主要有呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等，這些病毒感染與哮喘發(fā)病密切相關(guān)。病毒感染誘發(fā)哮喘的機(jī)制主要有：產(chǎn)生氣道炎性因子；產(chǎn)生特異性IgE，形成Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)；損傷氣道上皮，引起氣道高反應(yīng)。Johnson等[12］研究表明RSV感染患兒呼吸道上皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤，混合纖維素、痰液，且存在黏膜腫脹，從而導(dǎo)致呼吸道明顯阻塞，易導(dǎo)致喘息。

病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV感染是引起兒童哮喘急性發(fā)作的主要病毒，與患兒年齡、季節(jié)、地區(qū)差異、氣候有一定關(guān)系。田曼等[13］報告南京地區(qū)哮喘病毒檢出率為43.5%，RSV感染是兒童哮喘急性發(fā)作的主要病毒，1月和2月為感染高峰，嬰幼兒最常見。劉春艷等[14］報告北京地區(qū)兒童RSV感染平均年齡為4個月。趙明波等[15］報告昆明地區(qū)兒童RSV感染發(fā)病年齡1歲以下占57.05%，10～12個月為感染高峰。Lee等[16］報告臺灣地區(qū)兒童RSV感染高峰為春季和秋季。提示兒童RSV感染狀況與地區(qū)差異及各地氣候不同影響到RSV的繁殖有關(guān)。

本研究顯示實(shí)驗(yàn)組支氣管肺泡灌洗液病毒檢出率明顯高于對照組，以RSV檢出率最高，提示病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV是引起哮喘急性發(fā)作的主要病毒。不同年齡兒童哮喘急性發(fā)作支氣管肺泡灌洗液病毒檢測分布情況提示6個月以下年齡組陽性率最高，為84.4%，其中RSV陽性率高達(dá)59.4%，提示病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV是引起兒童哮喘急性發(fā)作的主要病毒，特別是6個月以下兒童更為明顯。與相關(guān)文獻(xiàn)報道鼻咽拭子病毒檢測具有一致性[17，18］。

綜上所述，病毒感染與兒童哮喘急性發(fā)作有密切相關(guān)性，RSV感染是引起嬰幼兒哮喘急性發(fā)作的主要病毒。

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