鐘志成馬丹娟汪安石李怡杜倩怡趙衛(wèi)何天文★

455例季節(jié)性發(fā)熱病人登革病毒感染情況分析

鐘志成1馬丹娟2汪安石1李怡1杜倩怡1趙衛(wèi)3何天文1★

目的 對2014年8月至10月我院接受診療的季節(jié)性1發(fā)熱癥狀為主、懷疑登革熱人群感染情況進行總結(jié)。 方法 455例懷疑登革病毒感染病例中，采用ELISA檢測方法對146例疑似病例進行登革病毒NS1抗原檢測，采用RT-QPCR方法對309例疑似病例進行登革病毒核酸檢測，其中采用兩種方法共同檢測共76例。 結(jié)果 登革病毒NS1檢測陽性率達43.1%，RT-QPCR檢測陽性率達44.1%，兩種方法檢測陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異。其中，重癥登革熱預(yù)警病例8例，登革Ⅱ型病例11例。 結(jié)論 2014年秋季廣州市登革熱處于疫情爆發(fā)期，重型病例較以往明顯增多，同時今年新出現(xiàn)Ⅱ型病例明顯增多，需要衛(wèi)生部門加以注意，協(xié)同居民加強蚊媒傳播疾病防治工作。

登革熱；NS1-IgM；ELISA；RT-QPCR

［ABSTRACT］Objective To analyze the situation of dengue infection among outpatient clients in our hospital mainly with seasonal fever syndrome from August to October，2014.Methods Among 455 clients with suspicious fever，146 cases were tested by ELISA with dengue NS1 and 309 cases were tested by dengue RT-QPCR reagents.And 76 cases were tested by both two methods.Results Positive rate of dengue ELISA test was 43.1%in 146 cases，and the positive rate of RT-QPCR test was 44.1%in 309 cases，including 8 potential server cases and 11 cases of dengue typeⅡ.There was no significant difference between the two test methods.Conclusions There was a dengue outbreak in Guangzhou and the dengue virus typeⅡ infection also showed an inclination of increase this autumn.A corporation between the local residents and the health organization of mosquito extermination is urgent and important.

［KEY WORDS］Dengue fever；NS1-IgM；ELISA；RT-QPCR

登革病毒是一種主要經(jīng)蚊媒傳播的人獸共患類病毒，其可引起登革熱和登革出血熱，在大中華地區(qū)主要傳播媒介為白蚊伊蚊和中華按蚊?；颊吒腥静《竞蠹毙云鸩?，出現(xiàn)發(fā)熱，全身肌肉、骨關(guān)節(jié)痛，皮疹，淋巴結(jié)腫大等癥狀。該病傳播迅猛、發(fā)病率高、尤以熱帶地區(qū)多發(fā)。1995年、2002年以及2006年廣東地區(qū)均發(fā)生過局部疫情報道，其余年份偶有局部地區(qū)出現(xiàn)散發(fā)病例或輸入性病例［1-3］。2014年入秋以來，登革病毒感染病例較往年明顯增多并呈爆發(fā)趨勢。截至2014年10月，廣東省確診感染病例已超過30 000例，死亡病例6例，其中廣州市死亡病例5例。本研究對我院就診病例共455疑似登革病毒感染病例 （其中采用ELISA檢測146例，RT-QPCR檢測309例，采用兩種檢測方法共同檢測76例）進行感染情況分析總結(jié)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

病例選取來我院就診的，有流行病學(xué)史，具頭痛、惡心、嘔吐、腹痛、發(fā)熱（包括急性上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃體炎）、肌肉酸痛、登革熱共同暴露史、抽搐、血尿、皮疹等可能的臨床癥狀，臨床懷疑登革病毒感染人群為對象。年齡涵蓋范圍為7天至72歲，平均年齡22.7歲。

1.2 檢測方法

采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的DENV Detect ELISA檢測試劑盒進行檢測登革病毒NS抗原保守區(qū)域。使用中山大學(xué)達安基因股份有限公司生產(chǎn)的登革病毒通用型核酸檢測試劑盒（熒光探針法）和Ⅱ型核酸檢測試劑盒（熒光探針法）進行檢測，對登革熱基因型進行初步區(qū)分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計資料分析采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計。對所分析資料進行初步分組，分組情況為：學(xué)齡前（～5Y）；學(xué)齡（5Y～16Y）；成人（16Y～50Y）；老年（50Y～）。后期描述中各年齡分組以學(xué)齡前組、學(xué)齡組、成人組和老年組代替。組內(nèi)統(tǒng)計比較采用2×4/2×2卡方分析，兩種檢測方法陽性率比較采用Fisher確切概率法分析。比較結(jié)果取P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清NS1檢測結(jié)果分析

采用ELISA試劑盒對登革病毒NS1抗原檢測共完成血清檢測例數(shù)146例，檢出陽性63例，檢測陽性率為43.1%（見表1）。學(xué)齡前組、學(xué)齡組、成人組和老年組陽性檢出率分別為 10.5%、40.0%、71.7%及81.8%。綜合其余各組感染情況相比較，學(xué)齡前兒童感染率明顯較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2=40.6，P=0.001）；學(xué)齡組檢出率相比成人/老人組陽性檢出率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2= 8.72，P=0.003）；而老年組和成人組在陽性檢出率方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.47，P=0.48）。

表1 癥狀人群NS1抗原檢測情況Table 1 NS1 antigen test results among symbolic clients

2.2 核酸RT-PCR檢測結(jié)果情況

采用RT-PCR方法完成登革病毒核酸檢測309例，其中檢出陽性137例，陽性檢出率為44.1%（見表2）。學(xué)齡前組、學(xué)齡組、成人組和老年組陽性檢出率分別為 18.1%、52.3%、69.2%及65.5%。綜合其余各組感染情況相比較，學(xué)齡前兒童感染率相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2=26.1，P＜0.05）；學(xué)齡兒檢出率相比成人/老人組陽性檢出率有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.94，P=0.047）；老年組和成人組間陽性檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2= 0.47，P=0.50）。學(xué)齡前兒童人群未檢出登革熱Ⅱ型病例，學(xué)齡兒童組、成人組以及老年組分別檢出1例、7例和3例Ⅱ型核酸陽性病例。值得注意的是老年組就診人群共檢出2例重型預(yù)警登革熱病例，其中2例重型預(yù)警病例均不是Ⅱ型登革熱病毒感染索造成，老年組癥狀不明顯，往往造成就醫(yī)時間滯后，如果合并其它基礎(chǔ)性疾病者可能導(dǎo)致危重病例。

2.3 兩種檢測方法檢測陽性率比較

采用兩種方法共同檢測病例共76例。NS抗原為登革病毒感染后早期即可表達，采用ELISA檢測方法對NS1抗原進行檢測；RT-QPCR方法檢測病毒核酸。RT-QPCR檢測結(jié)果為通用型以及登革病毒Ⅱ型之中一項陽性為陽性統(tǒng)計。統(tǒng)計比較采用Fisher確切概率法分析，檢測結(jié)果見表3。采用RT-QPCR和ELISA兩種方法進行登革病毒檢測，兩種方法在登革病毒陽性檢出率上無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.31）。

表2 癥狀人群RT-QPCR檢測情況Table 2 RT-QPCR test results among symbolic clients

表3 76例采用ELISA以及RT-QPCR檢測登革病毒情況比較Table 3 Comparison between ELISA and RT-QPCR with dengue virus among 76 cases

2.4 重型預(yù)警病例以及型間分布情況

重型預(yù)警病例診斷標(biāo)準(zhǔn)采用中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布的國衛(wèi)辦醫(yī)函〔2014〕746號文件。包括二次感染或合并基礎(chǔ)疾病等高危人群，出血、少尿、血漿滲漏、退熱后惡化等臨床指征及綜合實驗室指征血小板快速下降，HCT升高等。重型預(yù)警病例情況見下表4。

表4 重癥預(yù)警病例分布情況Table 4 Distribution among the severe alert cases

重癥預(yù)警病例中Ⅱ型病例1例，為60歲老年男性，其余7例均為成年組（16Y～50Y）。以上8病例臨床均出現(xiàn)鏡下或肉眼血尿、血漿滲漏等癥狀，同時出現(xiàn)血小板快速下降或極低值、HCT升高等，符合重癥預(yù)警標(biāo)準(zhǔn)。重癥預(yù)警病例約占總陽性病例的3%（8/211），其中大部分為非Ⅱ型病例（7/ 8）。

3 討論

由于人口遷徙流動增加和地球變暖等因素的影響，登革熱目前在全球發(fā)病率呈上升趨勢，預(yù)計占世界40%的人口即大約25億人口面臨罹患登革病毒感染危險。據(jù)估計，每年大約有將近1億人感染登革熱病毒，感染形式十分嚴(yán)峻［4］。

近年來，局部地區(qū)的登革熱呈不斷爆發(fā)趨勢，廣東、廣西、福建、浙江、云南和海南等南方重點?。ㄗ灾螀^(qū)）登革熱繼續(xù)面臨境外輸入和本地暴發(fā)擴散的雙重壓力，存在局部暴發(fā)的可能［6-7］，不同年份雖有局部暴發(fā)，但出現(xiàn)本年度地區(qū)大規(guī)模疫情尚屬首次。

此次爆發(fā)結(jié)果證明，廣州市區(qū)登革病毒I型已經(jīng)在蚊媒宿主本地化并在人群中傳播，多數(shù)I型登革病毒陽性就診病例近期內(nèi)并無出境記錄可以對其進行佐證。既往我們認(rèn)為登革Ⅱ型病例來自輸入性病例，此次檢測中多數(shù)Ⅱ型病毒感染病例并無出境記錄，是否為本地登革病毒Ⅱ型既往已存在尚值得討論，但綜合廣州市疫情來看，此次Ⅱ型登革病毒以輸入性病例進行解釋可能性明顯降低。因此，對市區(qū)蚊蟲進行采樣了解媒介昆蟲感染情況并進行遺傳學(xué)分析，掌握病毒進化情況，將對衛(wèi)生行政部門的決策起到作用［9］。

學(xué)齡前組相比其它組具有統(tǒng)計學(xué)意義，反映了避免蚊蟲接觸可有效預(yù)防登格病毒感染。通過對比76例采用兩種檢測方法之間的比較結(jié)果進行分析，采用ELISA抗原檢測結(jié)果陽性率和采用逆轉(zhuǎn)錄核酸檢測各年齡組陽性率以及總陽性率均沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差異，可見兩者均可作為急性期感染快速診斷標(biāo)準(zhǔn)，和報道結(jié)果相似［5］。目前在我國國內(nèi)Ⅱ型登革病毒感染例數(shù)多為個案，但根據(jù)疫情流行地區(qū)東南亞等國家報道，Ⅱ型登革病毒感染后發(fā)生重癥的可能性明顯增高［8］。因而通過核酸分型區(qū)分不同型別感染，對于某些重癥病例可起到提前預(yù)警作用。綜合分析，排除可能在抗原特異性方面引起的假陽性，在人群快速診斷方面NS1抗原檢測經(jīng)濟學(xué)上優(yōu)勢更加明顯，在疾病爆發(fā)時進行人群篩查起到重要作用；而對感染人群進行核酸分型則可能在重癥預(yù)警時起到提示性作用。

與其它地區(qū)感染情況有所不同，東南亞地區(qū)登革發(fā)病為全年發(fā)病，感染重型病例主要以Ⅱ型為主。我國廣東地區(qū)每年均有發(fā)病病例，并且多與蚊媒繁殖季節(jié)關(guān)聯(lián)，呈現(xiàn)季節(jié)性爆發(fā)性，8～10月易出現(xiàn)，并且多以非Ⅱ型為主，且少有重癥病例。本年度廣東地區(qū)爆發(fā)，我院就診病例發(fā)病情況也多以非Ⅱ型為主，Ⅱ型病例僅占6%（11/158），且本院內(nèi)就診的重型預(yù)警病例多為非Ⅱ型病例，僅有一例為成人Ⅱ型病例。這個是我院就診病人發(fā)病新特點之一，可能在本地蚊蟲體內(nèi)登革病毒Ⅱ型尚未成為優(yōu)勢病毒株而以Ⅰ型多見。但在人群敏感性方面，中國人群罹患病毒類型為非Ⅱ型登革病毒后表現(xiàn)的相應(yīng)癥狀是否更加嚴(yán)重，是否具有新的特點值得進一步研究。

登革病毒感染后的大部分病例轉(zhuǎn)歸呈現(xiàn)自限性的特點，病毒感染后造成的死亡率大約在4/10萬，重型病例一般在癥狀出現(xiàn)得4至7天內(nèi)出現(xiàn)，及時對重癥預(yù)警病例的對癥治療可以進一步降低死亡率［10］，但它仍是一個重大的公共衛(wèi)生類疾病。廣東地區(qū)發(fā)病和蚊蟲滋生季節(jié)性高度接近而非全年發(fā)病，學(xué)齡前組和其它組之間的統(tǒng)計學(xué)差異明顯，說明避免接觸蚊媒叮咬可顯著減低登革病毒感染幾率，因而加強對季節(jié)性蚊媒的消殺和清除積水、減少接觸對預(yù)防登革病毒感染顯得非常重要。

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Analysis of dengue infection among 455 seasonal fever clients

ZHONG Zhicheng1，MA Danjuan2，WANG Anshi1，LI Yi1，DU Qianyi1，ZHAO Wei3，HE Tianwen1★
（1.The Medical Genetics Center of Guangdong Women and Children Hospital，Guangzhou，Guangdong，China，511442；2.The Clinical Laboratory of Guangdong Women and Children Hospital，Guangzhou，Guangdong，China，511442；3.School of Public Health and Tropical Medicine，Southern Medical University，Guangzhou，Guangdong，China，510515）

國家自然科學(xué)基金（31270974）；國家自然科學(xué)基金（31470271）；NSFC-廣東聯(lián)合基金（U1132002）作者單位：1.廣東省婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東，廣州 511442 2.廣東省婦幼保健院檢驗科，廣東，廣州 511442 3.南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)院中心實驗室，廣東，廣州 510515

何天文，E-mail：love830415@126.com

注：鐘志成、馬丹娟與汪安石為并列第一作者