劉曉燕，周靈玲，胡曉蕾（麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水323000）

溫度與抗凝劑對假性血小板減少的影響

劉曉燕，周靈玲，胡曉蕾
（麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水323000）

目的探討溫度和抗凝劑對假性血小板減少（PTCP）的影響。方法 選擇確定為假性血小板減少的6例，每例采2管EDTA抗凝血（E1，E2）和1管枸櫞酸鈉抗凝血（C1），其中E2管采血后置37℃水浴孵育15分鐘后置室溫，其余兩管（E1和C1）采血后直接置室溫測，在采血即時及15、30、45、60、90、120分鐘后用儀器計數(shù)各管血小板數(shù)，比較不同抗凝劑在室溫下，以及統(tǒng)一抗凝劑（EDTA抗凝）在37℃水浴15分鐘后和在室溫下的血小板計數(shù)差異。結(jié)果EDTA抗凝劑和枸櫞酸鈉抗凝劑在各時間點血小板計數(shù)值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計數(shù)均維持在真值的80%左右；EDTA抗凝血在37℃水浴后和在室溫下直接測定比較，15分鐘內(nèi)兩者均可以將血小板計數(shù)保持在真值的80%以上，超過15分鐘，在室溫下測定的血小板計數(shù)下降非常明顯（P＜0.05或P＜0.01），而37℃水浴后的血小板計數(shù)則可以在2小時內(nèi)計數(shù)保持真值的80%以上。結(jié)論對于不能即時檢測、手工檢測以及冬季送檢的標本，在37℃水浴15分鐘后再測定可以避免PTCP的發(fā)生。

假性血小板減少；血小板聚集；EDTA；枸櫞酸鈉；溫度

假性血小板減少（pseudothrombocytopenia，PTCP）是由于血小板聚集導(dǎo)致儀器計數(shù)血小板數(shù)減少的假象，由Mant等［1］1975年首次報道。國內(nèi)大部分報道認為PTCP為EDTA依賴性［2-3］，改用枸櫞酸鈉抗凝標本即可排除血小板聚集的影響而得到準確的計數(shù)，這一方法甚至被應(yīng)用于臨床，但作者在工作中發(fā)現(xiàn)枸櫞酸鈉抗凝血血小板易聚集，并且冬天多見。國外近年來也有非抗凝劑依賴性PTCP的病例報道［4］。本文重點觀察比較EDTA、枸櫞酸鈉不同抗凝劑及不同溫度對PTCP的影響，以探討較準確的血小板計數(shù)方法。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2012年12月～2014年2月在本院檢查血常規(guī)、標本經(jīng)涂片染色鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板聚集、排除抽血不當?shù)仍?，確認為假性血小板減少的病例6例。所有觀察對象在知情同意原則下參與本次測試。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑Beckman Coulter LH750全自

動血細胞分析儀及配套試劑和質(zhì)控品；OLYMPUS顯微鏡；K2EDTA和枸櫞酸鈉抗凝管由BD公司提供。

1.2.2實驗方法每例分別采集EDTA抗凝血2管（E1，E2）、枸櫞酸鈉抗凝血（1:9）1管（C1），采血后用儀器即時（5分鐘內(nèi)）檢測三管的血小板數(shù)，后將E1，C1靜置于25℃，E2置37℃水浴15分鐘后，分別于采血后15、30、45、60、90、120分鐘儀器計數(shù)血小板數(shù)，并同時推片染色鏡檢血小板聚集情況及手工計數(shù)血小板。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用t檢驗。

3　結(jié)果

2.1總體情況采血后2小時內(nèi)，室溫靜置的EDTA和枸櫞酸鈉抗凝血血小板計數(shù)越來越少，鏡下聚集越來越明顯，在15分鐘內(nèi)血小板計數(shù)下降最快，但還基本維持在正常參考范圍內(nèi)；37℃水浴15分鐘后置室溫的EDTA抗凝血血小板計數(shù)穩(wěn)定在正常參考范圍內(nèi) （＞100×109/L）。詳見圖1。

2.2抗凝劑的影響對6例PTCP患者進行分析，以血小板手工計數(shù)值為真值，計算血小板比值（血小板數(shù)比值=實際測得血小板數(shù)/真值），可見各時間點兩種抗凝劑抗凝血的儀器血小板計數(shù)值無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計數(shù)均維持在真值的80%左右，詳見表1。

圖1　血小板隨時間變化關(guān)系圖

表1　室溫下EDTA與枸櫞酸鈉對血小板計數(shù)影響的比較（±s，%）

表1　室溫下EDTA與枸櫞酸鈉對血小板計數(shù)影響的比較（±s，%）

抗凝劑　n　15min　30min　45min　60min　90min　120min EDTA　6　0.85±0.15　0.71±0.21　0.54±0.23　0.35±0.21　0.28±0.21　0.21±0.18枸櫞酸鈉　6　0.78±0.16　0.58±0.16　0.39±0.16　0.33±0.12　0.33±0.15　0.33±0.15

2.3溫度的影響EDTA抗凝血在37℃水浴孵育15分鐘后再進行血小板計數(shù)，可以在2小時內(nèi)使計數(shù)準確性保持在真值的80%以上，而同樣經(jīng)EDTA抗凝血在室溫中進行血小板檢測，則只有在抽血后15分鐘內(nèi)可以將計數(shù)保持在真值的80%以上，超過15分鐘后，與37℃水浴后比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），詳見表2。

表2EDTA抗凝劑在37℃水浴后與直接室溫中對血小板計數(shù)的影響（%）

與室溫比較*P＜0.05，**P＜0.01

3　討論

據(jù)國際血液學(xué)標準化委員會（ICSH）1993年的建議，血細胞計數(shù)用EDTA鹽抗凝。因此，引起假性血小板減少的報道最多見的是EDTA依賴性，但是EDTA假性血小板減少的機制目前還不清楚，探索PTCP的原因?qū)τ赑TCP的及時發(fā)現(xiàn)、解決以及臨床意義的研究均大有裨益。

本文6例PTCP患者在血液離體后，血小板發(fā)生聚集，血小板計數(shù)隨著時間的延長逐漸降低至100×109/L以下。不同的抗凝劑 （EDTA和枸櫞酸鈉）在室溫下，實驗顯示各時間點血小板計數(shù)值無統(tǒng)計學(xué)差異，且在15分鐘內(nèi)，兩組血小板計數(shù)均維持在真值的80%左右；而將經(jīng)EDTA抗凝血分別置于37℃水溫和室內(nèi)溫度中，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過37℃水浴后的血小板計數(shù)在2個小時內(nèi)血小板計數(shù)都可以保持真值的80%，而直接放置室內(nèi)的血小板計數(shù)則只在15分鐘內(nèi)可以保持真值的80%，兩種溫度下比較，除了15分鐘內(nèi)血小板計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，其余時間段，室溫組血小板降低明顯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

本次檢測結(jié)果顛覆了“改用枸櫞酸鈉抗凝標本即可排除血小板聚集的影響而得到準確的計數(shù)”這一結(jié)論，提示用枸櫞酸鈉抗凝來解決PTCP的方法并不準確。血液標本在抽血15分鐘內(nèi)血小板計數(shù)尚可以維持在真值的80%以上，但超過15分鐘即可能造成PTCP，對于不能即時檢測、手工檢測以及冬季送檢的標本，在37℃水浴15分鐘后再測定可以避免PTCP的發(fā)生。遺憾的是，本文沒有探討經(jīng)枸櫞酸鈉抗凝血在不同溫度下的血小板計數(shù)情況，所以結(jié)論不夠全面，需要進一步探討。

［1］ Mant MJ，Doery JCG，Gauldie J，et al.Pseudothrombocytopenia due to platelet aggregation and degranulation in blood chelated in EDTA.Scand J Hematol，1975，15（3）:161

［2］張建萍.EDTA依賴性假性血小板減少癥及檢測方法分析.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（20）:2782

［3］李芳，杜宗孝.乙二胺四乙酸二鈉相關(guān)假性血小板減少現(xiàn)象及糾正方法分析.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2011，33（2）:169

［4］KurataY，HayashiS，JouzakiK，etal.Fourcasesof pseudothrombocytopenia due to platelet cold agglutinins. Rinsho Ketsueki，2006，47（8）:78