朱守兵，劉祎，章雪江，傅立強（紹興市中心血站，浙江　紹興312000）

血液核酸篩查中的質(zhì)量控制探討

朱守兵，劉祎，章雪江，傅立強
（紹興市中心血站，浙江紹興312000）

目的探索建立以內(nèi)對照循環(huán)數(shù)（CT）為監(jiān)控對象的血液核酸篩查質(zhì)量控制方法，為血液核酸篩查的有效開展提供質(zhì)量保障。方法對8993份標本使用Cobas s201核酸篩查系統(tǒng)進行6混樣檢測，以±3s作為內(nèi)對照CT質(zhì)控上下限，CT＞+3s為失控，即檢測結(jié)果無效，CT＜-3s為告警，檢測結(jié)果有效，但必須進行關(guān)注。結(jié)果3個混樣池 （pool）內(nèi)對照CT＜-3s，5個pool內(nèi)對照CT＞+3s；檢出陽性pool 25個，有效拆分16個，陽性pool有效拆分率64.0%，陽性標本均為HBV DNA陽性，核酸篩查總陽性率1.78‰。結(jié)論建立了以內(nèi)對照CT為監(jiān)測目標的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法能夠保障核酸篩查結(jié)果穩(wěn)定有效。

核酸檢測；質(zhì)量控制；內(nèi)對照循環(huán)數(shù)；質(zhì)控圖

目前血液核酸檢測在全國血液系統(tǒng)逐步推廣，核酸檢測靈敏度高，可以有效縮短病毒檢測窗口期，并能篩查出隱匿性乙肝，在保障血液安全方面與現(xiàn)有的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）具有很重要的互補作用［1-3］，然而對于核酸檢測的質(zhì)量控制還處于探索階段。作者在核酸檢測中進行了一些探索，在借鑒ELISA質(zhì)量控制方法的基礎(chǔ)上結(jié)合核酸檢測自身的特點建立了以內(nèi)對照為監(jiān)測目標的質(zhì)量控制體系，最終檢測結(jié)果說明該質(zhì)量控制體系能夠保障核酸檢測結(jié)果穩(wěn)定有效。

1　材料與方法

1.1標本來源與檢測2014年4～10月本血站行ELISA檢測 （項目包括HBsAg、HCV抗體、HIV抗體、梅毒螺旋體抗體）且ALT陰性標本8993份，每份標本5mL，采用非可替EDTA-K2分離膠抗凝管，標本采集后4小時內(nèi)離心分離血清，標本檢測采用6混樣同時檢測HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA，檢測結(jié)果陰性的混樣池（pool）內(nèi)所有標本均判為陰性，對陽性的pool進行單檢拆分，如果陽性pool內(nèi)所有標本單檢拆分結(jié)果均為陰性則pool內(nèi)所有標本均判為陰性，此pool為無效拆分pool，單檢拆分時有標本為陽性結(jié)果的pool為有效拆分pool，所有檢測在7天內(nèi)完成。

1.2試劑與儀器Cobas?TaqScreen MPX核酸檢測試劑盒（瑞士羅氏公司，批號：S00984，S00979）、50IU/mL HBV DNA質(zhì)控品、50IU/mL HCV RNA質(zhì)控品、200IU/mL HIV RNA質(zhì)控品 （北京康徹斯坦公司，批號：201404001）、Cobas s201核酸檢測系統(tǒng)（瑞士羅氏公司）。

1.3質(zhì)量控制方法每批檢測陰陽性對照及內(nèi)對照必須符合試劑盒說明書要求，能檢出HBV DNA質(zhì)控品、HCV RNA質(zhì)控品、HIV RNA質(zhì)控品，以最初兩天所有pool內(nèi)對照CT求平均值（）和標準差（s），以±3s為質(zhì)控上下限?？刂坪竺?個月所有實驗，內(nèi)對照CT＞+3s為失控，此pool檢測結(jié)果無效，CT＜-3s為告警，此pool檢測結(jié)果有效，但必須進行關(guān)注，1個月結(jié)束。以本月所有內(nèi)對照CT求和s，用與前面相同的方法控制以后所有實驗。

2　結(jié)果

2.1核酸篩查結(jié)果共檢測2592個pool，8993份標本，其中陽性pool 25個，pool陽性率0.96%，共有效拆分鑒定16個pool，9個pool未拆分成功，有效拆分率64.0%，經(jīng)拆分共16份標本陽性，鑒定結(jié)果均為HBV DNA陽性，核酸檢測總陽性率1.78‰。

表1　6～10月內(nèi)對照CT變化情況

圖1　5月質(zhì)控圖

圖2　6～10月質(zhì)控圖

3　討論

核酸檢測從在血液系統(tǒng)試點到不斷推進已有2年多時間，至今全國還沒有形成成熟統(tǒng)一的質(zhì)量控制方法，深圳血液中心莊乃保等［4］曾經(jīng)通過檢測HBV DNA質(zhì)控品使用即刻法對核酸檢測進行質(zhì)量控制，但HCV RNA、HIV RNA并沒有HBV DNA質(zhì)控品穩(wěn)定性高，因此對于HCV RNA、HIV RNA質(zhì)控品是否可以借鑒與HBV DNA質(zhì)控品相同的方法還需更多的實驗。山東血液中心的張妍等［5］通過觀察核酸檢測過程中多項指標的變化情況對質(zhì)量進行持續(xù)監(jiān)測。在總結(jié)各種質(zhì)量控制方法的優(yōu)缺點和分析核酸檢測自身特點的基礎(chǔ)上，作者對核酸檢測的質(zhì)量控制進行了一些探索：由于核酸檢測的過程中內(nèi)對照和標本在相同的條件下進行提取和擴增，因此內(nèi)對照提取和擴增情況可以很好地反映目的基因的提取和擴增情況，由于提取和擴增條件受環(huán)境影響較小，因此內(nèi)對照擴增相對穩(wěn)定，所有pool內(nèi)對照CT的CV僅為1.21%，根據(jù)這些特點作者建立了以內(nèi)對照CT為監(jiān)控目標的質(zhì)控法。本質(zhì)量控制體系監(jiān)控結(jié)果顯示：6月以來共3個pool內(nèi)對照CT＜-3s，與ELISA方法的質(zhì)控判斷標準不同，此pool結(jié)果有效，但必須作為告警點，同時注意觀察是偶發(fā)還是系統(tǒng)誤差造成，共5個pool內(nèi)對照CT＞+3s，此pool結(jié)果無效，提取或者擴增抑制物對標本的污染、隨機誤差、儀器運行中的任何異常等均可造成這一結(jié)果。

本文共檢出陽性pool 25個，有效拆分鑒定16 個pool，有效拆分率64.0%，高于山東血液中心的結(jié)果［5］，16份陽性標本經(jīng)鑒定均為HBV DNA陽性，核酸檢測總陽性率1.78‰，與國內(nèi)其他血液系統(tǒng)的結(jié)果比較一致［1，3］，從核酸檢測的結(jié)果來看，本質(zhì)量控制方法能夠保障核酸檢測結(jié)果穩(wěn)定有效。

［1］鄭優(yōu)榮，梁浩堅，李仲平，等.核酸檢測技術(shù)在廣州地區(qū)獻血者血液篩查中的應(yīng)用.中國輸血雜志.2013，26（12）:1211 ［2］鄒崢嶸，謝云崢，伍曉菲，等.上海地區(qū)無償獻血者乙型肝炎病毒隱匿性感染情況和突變分析.中國輸血雜志，2013，26（8）:701

［3］安萬新，鄧雪蓮，梁曉華，等.大連市血液中心 HBsAg陰性獻血者 HBV感染的確認與 HBV核酸檢出效率的評估.中國輸血雜志，2014，27（3）:268

［4］莊乃保，葉賢林，李活，等.血液乙型肝炎核酸篩查質(zhì)量控制方法的研究.中國輸血雜志，2008，21（11）:844

［5］張妍，唐建華，李英蓮，等.核酸檢測實驗室常用質(zhì)量監(jiān)控指標的探討.中國輸血雜志，2014，27（6）:620