覃幼玲等

【摘要】目的探討桂西壯族散發(fā)性激素耐藥型腎病綜合征（SRNS）患者NPHS2基因突變及其特點。方法采用DNA序列直接測定法檢測50例桂西壯族散發(fā)性SRNS患兒（觀察組）血清NPHS2 基因全部外顯子及其周圍的部分內(nèi)含子，并與30例健康青少年（對照組）進行比較。結果觀察組NPHS2基因的8個外顯子均未檢測到錯義突變，但檢測到 3個NPHS2 基因多態(tài)性即288C>T、954C>T和1038A>G；觀察組的基因型和等位基因頻率與對照組分別進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論提示NPHS2基因多態(tài)可能不是桂西壯族散發(fā)性 SRNS 患兒的主要致病原因。

【關鍵詞】NPHS2基因；激素耐藥型腎病綜合征；種族

中圖分類號：R692 文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.04.001

【Abstract】ObjectiveTo explore the mutation and characteristics of NPHS2 gene in patients with sporadic steroidresistant nephritic syndrome （SRNS） in Zhuang ethnic group in western Guangxi.MethodsDirect measurement of DNA sequence was applied to test all the exons and some surrounding introns of serum NPHS2 gene in 50 cases of children with sporadic SRNS （observation group），and then compared them with those of 30 healthy children （control group）.Results No missense mutation was found in the detection of the 8 exons of NPHS2 gene in the observation group，but 3 polymorphism of NPHS2 gene （288C>T，954C>T and 1038A>G） were found.The genotype and allele frequency of the observation group were compared with those of the control group respectively，difference was not statistically significant（P>0.05）.ConclusionThe results show that the mutation of NPHS2 gene may not be the main cause of sporadic SRNS in Zhuang ethic group in western Guangxi.

【Key words】NPHS2 gene；SRNS；ethnic group

原發(fā)性腎病綜合征（PNS）是常見的腎小球疾病，大量蛋白尿是PNS的主要臨床表現(xiàn)，也是腎臟病理不斷進展的主要因素之一。PNS經(jīng)足量糖皮質激素治療4周無效應者稱為激素耐藥型腎病綜合征（SRNS） [1]，臨床上10%～20%的PNS患者對糖皮質激素耐藥，逐漸發(fā)展為終末期腎病（ESRD）。隨著分子生物學與遺傳學研究的深入， NPHS2基因突變可引起散發(fā)性或家族性SRNS得到證實。目前，國際上散發(fā)性SRNS患兒NPHS2基因突變的研究已有報道，我國針對散發(fā)性SRNS患兒NPHS2基因突變的研究相對較少。本研究應用直接測序技術分析桂西壯族散發(fā)性SRNS患兒NPHS2基因突變及其特點。

1對象與方法1.1研究對象選擇2011年5月～2013年5月收治于右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科的50例散發(fā)性SRNS患兒（觀察組），男38例，女12例；年齡（12.13±3.68）歲。選擇尿檢正常的30 例健康桂西壯族青少年人群作為對照組，男19例，女11例；年齡（12.45±3.54）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，知情同意書由患兒家長簽署。

1.2病例的入選和排除標準（1）發(fā)病年齡：3個月～18歲；（2）腎病綜合征：大量蛋白尿（尿蛋白>35 g/L）、低白蛋白血癥（血漿白蛋白≤30 g/L）、高脂血癥（血漿膽固醇高于 5.7 mmol/L）、不同程度的水腫；（3）激素耐藥為潑尼松1.5～2.0 mg·kg1·d1治療4周后尿蛋白未轉陰的患兒[1]；（4）籍貫為桂西地區(qū)，壯族，來自不同家族，父母非近親結婚；（5）無腎臟疾病家族史。排除標準：（1）繼發(fā)性腎病綜合征：乙型肝炎病毒相關性腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性紫癜腎炎等；（2）遺傳性腎病。

1.3方法

1.3.1基因組DNA提取從外周靜脈抽取研究對象的空腹血樣5 ml，置于含有枸櫞酸鈉和EDTA抗凝試管中，應用北京天根生化科技有限公司提供的TIAN amp Blood DNA Kit（血液基因組DNA提取試劑盒），提取DNA的樣品嚴格按照操作說明書進行，確保得到高質量的DNA樣品，保存在-80℃的冰箱中備用。

1.3.2引物設計和合成從美國國立醫(yī)學圖書館的國家生物計算信息中心的 Nucleotide 數(shù)據(jù)庫獲得的基因組序列和 NPHS2基因外顯子序列（Gene Bank：NT_004487.17），應用引物設計軟件 Primer 5設計擴增NPHS2 的8個外顯子全部編碼區(qū)及其周圍的部分內(nèi)含子區(qū)域，全部引物委托大連TaKaRa公司合成。NPHS2基因8個外顯子的引物序列和PCR產(chǎn)物見表1。