趙士偉，楚慧麗，李艷云，陳 雯，畢經(jīng)旺

肺癌是我國病死率最高的癌癥之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。非小細(xì)胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）患者約占肺癌的85%，且多數(shù)患者在疾病進(jìn)程中出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者預(yù)后。其中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTCs）的存在與轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有很大相關(guān)性，提示在常規(guī)的影像學(xué)和顯微鏡下診斷的臨床轉(zhuǎn)移之前可能已有腫瘤微轉(zhuǎn)移的發(fā)生。筆者于2013年10月—2014年4月利用免疫磁珠陰性富集法對35例NSCLC患者術(shù)后外周血中CTCs進(jìn)行檢測，并探討CTCs與臨床分期的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇在筆者所在醫(yī)院首次手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的肺癌患者35例。男19例，女16例；年齡43～80歲，中位年齡58歲。其中腺癌31例，鱗癌4例。均經(jīng)根治手術(shù)治療，術(shù)后原發(fā)腫瘤、淋巴結(jié)、轉(zhuǎn)移（Tumor，Node，Metastatis，TNM）分期為Ⅰ期13例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。

1.2 方法 所有研究對象在手術(shù)后第1天采用真空采血管采集肘正中靜脈血3.2ml（不含抗凝劑）于ACD抗凝管中。采血后應(yīng)在48 h內(nèi)完成所有實(shí)驗(yàn)。采用免疫磁珠富集技術(shù)分離CTCs，用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTCs，在熒光顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)CTCs。判讀標(biāo)準(zhǔn)為DAPI＋（單核），細(xì)胞核內(nèi)FISH信號點(diǎn)＞2個(gè)，且無血源性白細(xì)胞表面抗原著色，即 CD45－。外周血中 CTCs計(jì)數(shù)≥2 個(gè)／3.2ml定義為CTCs陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各組間的CTCs陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

35例NSCLC患者術(shù)后外周血中CTCs陽性率為28.6%（10／35）。Ⅰ期陽性率為 7.7%（1／13），Ⅱ期為 33.3%（2／6），Ⅲ期為43.8%（7／16）。陽性率Ⅲ期與Ⅰ期相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。具體檢測結(jié)果見表 1。

表 1 35例NSCLC患者術(shù)后外周血中CTCs檢測結(jié)果

3 討論

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是指由原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落入血的腫瘤細(xì)胞，由Ashworth于1869年首次提出[1]。絕大部分的CTCs可以由機(jī)體自身免疫系統(tǒng)清除，但是極少數(shù)的CTCs可以是逃離清除，最后定植在組織器官內(nèi)從而形成轉(zhuǎn)移病灶。對于肺癌微轉(zhuǎn)移患者，僅從影像學(xué)無法找到病灶。CTCs對于微轉(zhuǎn)移的診斷，可以提高肺癌治愈率，改善患者預(yù)后。Okumura 等[2]研究表明，在可手術(shù)切除的肺癌患者中，96.7%的患者在肺靜脈血中可檢測出CTCs，29.4%的患者可在外周血中檢測出CTCs。

由于CTCs在外周血中數(shù)量較少，所以從采集血中分離富集CTCs是進(jìn)行檢測的關(guān)鍵。目前用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測方法主要有免疫磁珠陽性富集分離法、流式細(xì)胞檢測法以及多聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)核酸擴(kuò)增法等[3]。

本研究采用免疫磁珠陰性富集法進(jìn)行富集，通過去除血漿，裂解紅細(xì)胞，利用表面包被磁珠的抗白細(xì)胞共同抗原的抗體去除白細(xì)胞，從而富集得到稀有細(xì)胞，最后在熒光顯微鏡下進(jìn)行鑒定判讀。本組35例應(yīng)用上述方法檢測NSCLC患者外周血中CTCs陽性率為28.6%。對于肺癌患者，隨著腫瘤的進(jìn)展或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，CTCs數(shù)量明顯增加[4]。存在高水平的CTCs數(shù)量提示有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)更高，因此對于原發(fā)性肺癌CTCs水平可作為評判遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的預(yù)后指標(biāo)[5]。血液中檢出的CTCs數(shù)量與腫瘤分期具有明顯的相關(guān)性。本文結(jié)果也表明，CTCs陽性率與腫瘤TNM分期相關(guān)，隨著分期進(jìn)展，CTCs陽性率也相應(yīng)增高。因此，外周靜脈血中CTCs的水平應(yīng)作為臨床分期的一個(gè)必要條件，若發(fā)現(xiàn)術(shù)后患者存在高水平的CTCs，則應(yīng)采取積極的治療措施。通過檢測CTCs來判斷是否存在復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而重新確定臨床分期、評估預(yù)后、并用來指導(dǎo)個(gè)體化治療[5，6]。這對于完善NSCLC術(shù)后的綜合治療，探討NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)的機(jī)制，降低術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率，提高生存率具有重要的意義。

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