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        竹蓀水提物的體外抗氧化活性研究

        2015-08-20 12:08:26呂瑞金蓮周侯全
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年7期

        呂瑞 金蓮 周侯全

        摘要:采用回流提取法對(duì)竹蓀中的水溶性成分進(jìn)行提取,分別測定提取物的總還原能力及對(duì)·OH、DPPH·的清除作用,并與合成抗氧化劑維生素C進(jìn)行比較。結(jié)果表明:竹蓀水提物對(duì)·OH、DPPH·具有不同程度的清除能力,但均低于維生素C。研究結(jié)果為竹蓀的抗氧化、抗衰老等作用的研究提供了一定參考。

        關(guān)鍵詞:竹蓀;水提物;體外抗氧化;抗衰老作用;保健價(jià)值

        中圖分類號(hào):R284.1;S646.801 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2015)07-0347-02

        自由基又稱游離基,其性質(zhì)非?;顫姡芘c其他任何惰性物質(zhì)在惰性條件下發(fā)生連鎖反應(yīng)。存在于人體的自由基,在生理情況下能提高機(jī)體免疫力,而在病理情況下,則會(huì)對(duì)組織產(chǎn)生不可逆的損傷,直接導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生[1]。因此,從食物中尋找安全有效的清除自由基成分,成為了人們?nèi)諠u關(guān)心的問題。

        竹蓀別稱竹參、面紗菌,為鬼筆科竹蓀屬真菌,是寄生在枯竹根部的一種隱花菌類,也是一種名貴的食用菌,具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、益氣補(bǔ)腦、寧神健體等功效,自古就被列為"草八珍"之一?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也證明,竹蓀中含有能抑制腫瘤的成分[2];另有報(bào)道指出[3],竹蓀中富含蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素,此外還含有豐富的多糖,是難得的營養(yǎng)佳品。目前,對(duì)于竹蓀的研究多集中于對(duì)其抗菌作用的評(píng)價(jià)[4-5]以及多糖抗氧化作用的評(píng)價(jià)方面[6],而未見關(guān)于其水溶性成分總體抗氧化作用的報(bào)道。由于竹蓀多以水溶性部位供人們食用,因此本研究以竹蓀水提物作為樣品,探索其對(duì)羥自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力以及其總還原能力,以期為綜合評(píng)價(jià)竹蓀的食用、保健價(jià)值提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        竹蓀購于四川省綿陽市本地市場,經(jīng)綿陽師范學(xué)院天然藥物研究所邊清泉教授鑒定,為鬼筆科竹蓀屬植物竹蓀(Dictyophora indusiata)。

        主要試劑為二苯代苦味?;杂苫―PPH·)(美國Sigma公司)、維生素C(四川科龍?jiān)噭┯邢薰荆?;硫酸亞鐵、雙氧水(30%)、鄰二氮菲、鹽酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、乙醇(95%)、鐵氰化鉀、三氯乙酸、三氯化鐵,均為四川科倫試劑公司的分析純?cè)噭?。試?yàn)用水為1次蒸餾水。

        1.2 主要儀器

        主要儀器為:UV-1700紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);800型高速離心機(jī)(江蘇省金壇市通濟(jì)儀器廠);AY120 型電子分析天平(日本島津公司)。

        1.3 試驗(yàn)方法

        1.3.1 竹蓀水提物的制備 將竹蓀洗凈烘干后,粉碎至過80目篩;準(zhǔn)確稱取5.000 0 g竹蓀粉末于圓底燒瓶中,加入150 mL蒸餾水(料液比1 g ∶30 mL),于95 ℃下回流提取 2 h;過濾并將濾液濃縮后,用蒸餾水配制成濃度為5 g/L的溶液,置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.3.2 對(duì)照品維生素C溶液的配制 準(zhǔn)確稱取0.500 0 g維生素C,用蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中定容,得濃度為5 g/L的溶液,避光保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.3.3 羥基自由基(·OH)清除試驗(yàn) Fenton反應(yīng)是產(chǎn)生羥自由基的經(jīng)典反應(yīng),其機(jī)理如下:

        Fe2++H2O2→Fe3++·OH+OH-。

        此體系產(chǎn)生的·OH,可使體系中橙紅色絡(luò)合物Fe2+-鄰二氮菲被氧化為Fe3+-鄰二氮菲,致使體系顏色變淺,從而在536 nm處的最大吸收峰消失。如果在加入H2O2前加入羥自由基清除劑,則Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基被清除或部分清除,此氧化過程受到抑制,使得該吸收波長下吸光度降低不明顯,因此可以通過測定536 nm處的吸光度來判斷受試物的抗氧化能力[7]。試驗(yàn)設(shè)為5組:空白組、未損傷組、損傷組、樣參組、樣品組,對(duì)照品為維生素C。

        按照表1所示加入反應(yīng)試劑,并分別加入不同體積提取液(0.2、0.6、1.0、1.4、1.6 mL),將各反應(yīng)管搖勻后,置于恒溫水浴中,于37 ℃下保溫60 min,于536 nm處測定吸光度,按下式計(jì)算羥自由基清除率:

        ·OH清除率=(D2-D1)-(D3-D4)D0-D3×100%。

        式中:D0為未損傷管吸光度;D1為樣參管吸光度;D2為樣品管吸光度;D3為損傷管吸光度;D4為空白管吸光度。

        1.3.4 DPPH自由基清除試驗(yàn) 按表2的方法進(jìn)行加樣,并加入不同體積提取液(0.2、0.6、1.0、1.4、1.6 mL),于室溫下避光反應(yīng)20 min,將對(duì)照組進(jìn)行光譜掃描,以出現(xiàn)最大吸收峰的波長為測定波長。經(jīng)光譜掃描可知,DPPH自由基模型反應(yīng)中顯色產(chǎn)物的最大吸收波長為517 nm,因此選擇在517 nm下測定各組受試物的吸光度,以維生素C為對(duì)照品。

        通過測定各溶液的吸光度,按下式計(jì)算自由基清除率:清除率=(D1-D2)-(D3-D4)D1-D2×100%。

        式中:D1為模型組吸光度;D2為模型空白組吸光度;D3為樣品組吸光度;D4為樣參組吸光度。

        1.3.5 總還原能力的測定 采用普魯士藍(lán)法[8],取不同體積(0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2.0、2.2 mL)的樣品溶液于離心管中,加入2.5 mL pH值為6.6的磷酸鹽緩沖溶液、2.5 mL1%的鐵氰化鉀溶液,混勻后于50 ℃水浴保溫20 min;然后加入2.5 mL 10%的三氯乙酸溶液,振蕩混勻后,于3 000 r/min離心10 min,取上清液5 mL,加入5 mL 蒸餾水和1 mL 0.1% 的FeCl3溶液,混勻后反應(yīng)10 min,在700 nm處測定吸光度,并以相同濃度的維生素C水溶液作對(duì)照,每個(gè)濃度梯度樣品溶液平行測定3次。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 竹蓀水提物對(duì)·OH的清除作用

        按照“1.3.3”節(jié)的方法測定各溶液吸光度,以添加樣品的體積為橫坐標(biāo)、清除率為縱坐標(biāo)作圖,比較竹蓀提取物和維生素C對(duì)·OH的清除效果,結(jié)果見圖1。

        由圖1可知,在所選體積范圍內(nèi),竹蓀水提物對(duì)·OH的清除率隨著加入體積的增加而增大并最終趨于平緩,說明其藥效漸趨飽和;而同濃度的維生素C在相同條件下清除率卻有明顯的量效關(guān)系。說明相較于維生素C而言,竹蓀水提物對(duì)·OH的清除能力較弱。羥自由基是生物體內(nèi)一種氧化能力很強(qiáng)的自由基,會(huì)造成機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的氧化性損傷[9],竹蓀水提物對(duì)羥自由基的清除能力較弱也在一定程度上說明了其對(duì)抗機(jī)體生物分子的氧化性損傷能力不夠強(qiáng),而此結(jié)果還須要進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

        2.2 竹蓀水提物對(duì)DPPH自由基的清除作用

        按照“1.3.4”節(jié)的方法進(jìn)行試驗(yàn),并以等濃度的維生素C作比較,通過測定各溶液吸光度,計(jì)算出相應(yīng)濃度下的清除率,分別以加入量、清除率為橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)作圖,詳見圖2。

        從圖2可知,在所選的體積范圍內(nèi),竹蓀水提物對(duì)DPPH自由基的清除率有明顯的量效關(guān)系,說明竹蓀水提物對(duì)DPPH自由基有一定的清除作用,但其清除能力不及相同條件下等濃度的維生素C對(duì)照品。有文獻(xiàn)報(bào)道,天然抗氧化劑清除DPPH·的能力在某種程度上被認(rèn)為可以反映抗氧化劑的清除自由基總能力[10],因此說明竹蓀水提物具有一定的自由基清除能力。

        2.3 竹蓀水提物的總還原能力評(píng)價(jià)

        按照“1.3.5”節(jié)的方法進(jìn)行試驗(yàn),以吸光度為指標(biāo)評(píng)價(jià)竹蓀水提物的總還原能力,并以等濃度維生素C作對(duì)照。以加入體積-吸光度建立坐標(biāo)繪圖,得樣品和維生素C總還原能力的對(duì)比圖,詳見圖3。

        從圖3可知,在試驗(yàn)水提物的體積范圍內(nèi),總還原能力隨著加入體積的增大而增強(qiáng),但均低于相同條件下的維生素C,說明竹蓀具有一定的還原能力,雖不及還原劑維生素C,但此結(jié)果也可再次證明竹蓀水提物具有一定的抗氧化能力。

        3 結(jié)論

        本試驗(yàn)采用回流提取法對(duì)竹蓀中水溶性成分進(jìn)行了提取,并評(píng)價(jià)了提取物的總還原能力以及對(duì)·OH、DPPH·的清除能力。試驗(yàn)結(jié)果表明,在一定濃度范圍內(nèi),竹蓀水提物的總還原能力較強(qiáng),但其對(duì)·OH清除能力較弱,而對(duì)DPPH·的清除能力較強(qiáng),但其清除率均不及相同條件下的還原劑維生素C。結(jié)果說明,竹蓀水提物具有一定的抗氧化能力,由于竹蓀的食用部位多為其水溶性成分,因而可推斷食用竹蓀可起到抗氧化、抗衰老等作用,但其可靠的保健作用還須進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)驗(yàn)證。

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