劉海林 耿安靜 陸曉宇 朱將偉

摘要：利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜（豇豆）中氯磺隆等5種磺酰脲類除草劑殘留，首先用甲醇-磷酸鹽緩沖液提取蔬菜中的磺酰脲類除草劑，經(jīng)固相萃取柱凈化后用LC-MS/MS進(jìn)行分析，最終實(shí)現(xiàn)定性和定量測(cè)定。結(jié)果表明，此方法定量限可達(dá)0.6 μg/kg以下，回收率范圍為80.1%～91.2%，RSD為3.7%～6.7%，符合我國(guó)食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

關(guān)鍵詞：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；蔬菜；磺酰脲類除草劑；殘留

中圖分類號(hào)： TQ450.2+63 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0325-02

磺酰脲類除草劑是當(dāng)前使用量最大的一類除草劑，主要用于防除闊葉雜草及某些禾本科雜草，在現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮了極其重要的作用，但其應(yīng)用所導(dǎo)致的農(nóng)藥殘留給生態(tài)環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品安全造成諸多負(fù)面影響[1-2]。國(guó)際食品貿(mào)易組織對(duì)該類除草劑實(shí)行了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，歐美等國(guó)家均制定了農(nóng)作物中各種磺酰脲類除草劑的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)和官方檢測(cè)方法[3]。目前多采用色譜法、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫吸附分析法等方法對(duì)磺酰脲類除草劑進(jìn)行檢測(cè)。由于磺酰脲類除草劑的熱不穩(wěn)定性和低揮發(fā)性，一般不適宜采用氣相色譜分析，因此目前應(yīng)用最為廣泛的方法是HPLC法，但該法在應(yīng)用中容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，靈敏度也不夠高[3-4]。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）對(duì)磺酰脲類除草劑進(jìn)行分析，可顯著簡(jiǎn)化分析步驟，并且LC-MS/MS法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、檢測(cè)結(jié)果一般不需再次確證等優(yōu)點(diǎn)。在本試驗(yàn)中研究了豇豆中氯磺隆等5種磺酰脲類除草劑殘留分析的樣品前處理方法和液-質(zhì)聯(lián)用分離檢測(cè)條件，結(jié)果表明，本方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、凈化效果好，可用于分析豇豆等蔬菜中的磺酰脲類除草劑殘留量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫1200/6410高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)）；安捷倫 ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（3.0 mm×100 mm，1.8-Micron）；Waters固相萃取柱（Oasis HLB：200mg，6mL）；粉碎機(jī)；勻漿機(jī)；振蕩器；水浴、氮吹儀等。

乙腈（HPLC，德國(guó)Merck公司）；甲醇（HPLC，德國(guó)Merck公司）；甲酸（HPLC，美國(guó)J.T. Baker公司）；磷酸（優(yōu)級(jí)純）。農(nóng)藥標(biāo)樣：氯磺隆、噻吩磺隆、芐嘧磺隆、吡嘧磺隆、氯嘧磺?。兌染?98%）。

磷酸鹽緩沖溶液（pH值7.8）：稱取41.70 g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）和2.30 g磷酸二氫鉀（KH2PO4）加水溶解至1 000 mL。

磷酸鹽緩沖溶液（pH值2.0～3.0）：以上述磷酸鹽緩沖溶液（pH值7.8）為母液，加磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0～3.0。

提取液：將磷酸鹽緩沖溶液（pH值7.8）與甲醇按體積分?jǐn)?shù)50%混合均勻。

1.2 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18柱（安捷倫，3.0 mm×100 mm，1.8-Micron）；流動(dòng)相：A相（0.1%甲酸+4 mmol乙酸銨）、B相（甲醇）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

梯度洗脫程序：0 min（80%A）→0.5 min（80%A）→4.0 min（10%A）→9.0 min（10%A）→9.1 min（80%A）→110 min（80%A）。后運(yùn)行時(shí)間：1 min。流動(dòng)相速度：0.3 mL/min。

質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)：電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描（MRM），正離子模式，離子源參數(shù)（干燥氣流速10 L/min，干燥氣溫度320 ℃，霧化氣壓力275.8 kPa，毛細(xì)管電壓4 000 V）。質(zhì)譜采集參數(shù)見(jiàn)表1。

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品制備

取1 000 g待測(cè)蔬菜樣品（豇豆），人工去除葉、梗等雜物，進(jìn)行粉碎后備用。

1.3.2 提取

稱取20.0 g試樣于200 mL具塞錐形瓶中，加入80 mL提取液，加蓋后振蕩30 min（150 r/min），超聲提取10 min，布氏漏斗抽濾，轉(zhuǎn)移濾液至100 mL容量瓶中，用提取液清洗、轉(zhuǎn)移并定容至100 mL，混勻。移取20 mL上述溶液在40 ℃水浴中減壓濃縮至10 mL左右，加10mL磷酸鹽緩沖溶液（pH值2.0～3.0），并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0～3.0，待凈化[5]。

1.3.3 凈化

依次用5 mL甲醇、5 mL水、5 mL提取液淋洗活化固相萃取柱（Oasis HLB：200 mg，6 mL），將上述待凈化液轉(zhuǎn)移上柱，抽干；再用6 mL乙腈洗脫，收集至刻度管中，40 ℃氮吹至近干，移取2.00 mL體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇水溶液超聲溶解樣品，過(guò)0.2 μm濾膜，裝入進(jìn)樣瓶中待測(cè)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品測(cè)定

將除草劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行LC-MS/MS分析，以質(zhì)譜響應(yīng)值（定量離子的豐度）對(duì)應(yīng)濃度分別制作各除草劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線；經(jīng)處理的樣品提取物在上述色譜-質(zhì)譜條件下進(jìn)行分析，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線用外標(biāo)法計(jì)算樣品中各除草劑的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 萃取方法的優(yōu)化

在磺酰脲類除草劑殘留分析中常用的提取溶劑有乙腈、甲醇、磷酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖液-乙腈和磷酸鹽緩沖液-甲醇等。由于磺酰脲類除草劑為弱酸性，對(duì)pH值較敏感，大多數(shù)磺酰脲類除草劑的酸度系數(shù)pKa值在3.0～5.8的范圍內(nèi)，而提取液的pH 值一般以大于pKa 值2個(gè)單位為宜（這將有利于磺酰脲類除草劑從蔬菜中提取出來(lái)）。本試驗(yàn)比較了磷酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖液-乙腈和磷酸鹽緩沖液-甲醇作為提取溶劑的效果，結(jié)果表明，以磷酸鹽緩沖液-乙腈或者磷酸鹽緩沖液-甲醇為提取液時(shí)，其回收率（87%左右）較好，且穩(wěn)定，而以磷酸鹽緩沖溶液作為提取液時(shí)回收率極不穩(wěn)定；另外，在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)以磷酸鹽緩沖液-乙腈作為提取液時(shí)，溶出的雜質(zhì)加多，影響后續(xù)凈化與分析，因此最終確定以磷酸鹽緩沖液（pH值7.8）-甲醇作為提取液。

2.2 儀器分析條件的優(yōu)化

本試驗(yàn)比較了不同體系的流動(dòng)相（0.1%甲醇-甲酸水溶液；0.1%乙腈-甲酸水溶液；甲醇-0.1%甲酸+4 mmol乙酸銨；乙腈-0.1%甲酸+4 mmol乙酸銨）。結(jié)果表明，不同的流動(dòng)相對(duì)除草劑的離子化水平產(chǎn)生較大的影響，當(dāng)采用上述前2種流動(dòng)相體系時(shí)，5種待測(cè)除草劑的質(zhì)譜響應(yīng)值均顯著低于采用后2種流動(dòng)相時(shí)的響應(yīng)值（約低1個(gè)數(shù)量級(jí)），且峰形差；另外，采用乙腈-0.1%甲酸+4 mmol乙酸銨體系時(shí)，雖然響應(yīng)值較高，但峰形差，色譜分離效果也不理想。因此，最終選擇甲醇-0.1%甲酸+4 mmol乙酸銨作為流動(dòng)相，同時(shí)也對(duì)乙酸銨的濃度進(jìn)行了優(yōu)化，乙酸銨能有效改善峰形和調(diào)節(jié)離子化水平，但濃度高于4 mmol時(shí)并不能更好地發(fā)揮改善峰形的作用，過(guò)高的鹽分還會(huì)對(duì)基線的穩(wěn)定性產(chǎn)生負(fù)面作用，因此最終選取乙酸銨的濃度為4 mmol。

為了取得最佳的分析效果，在優(yōu)化了萃取及凈化方式、流動(dòng)相以及梯度洗脫程序等條件后，對(duì)各項(xiàng)質(zhì)譜參數(shù)也進(jìn)行了優(yōu)化（表1）。圖1為5種磺酰脲類除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流。

2.3 線性關(guān)系與檢出限

在上述經(jīng)優(yōu)化的測(cè)試條件下，取一系列濃度的除草劑標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)行分析，以各除草劑組分的質(zhì)譜響應(yīng)值對(duì)其濃度作出曲線，得到各除草劑的線性回歸方程，各除草劑在1～100 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。當(dāng)樣品中有磺酰脲類除草劑被檢出，且殘留濃度超過(guò)該線性范圍時(shí)，需經(jīng)稀釋處理后再次測(cè)定。5種磺酰脲類除草劑的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限等見(jiàn)表2，以3倍信噪比確定檢出限，以4倍檢出限作為定量限。

2.4 添加回收試驗(yàn)結(jié)果以及與其他標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定結(jié)果的比較

向2組空白豇豆樣品中加入除草劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使第1組樣品中各除草劑濃度為5.0 μg/kg，第2組中各除草劑濃度為20.0 μg/kg。按照上述分析測(cè)試流程及選定的參數(shù)測(cè)定5種除草劑的含量并計(jì)算回收率（n=5），其回收率范圍為80.1%～91.2%，RSD為3.7%～6.7%，均符合方法學(xué)上的要求。這2組豇豆樣品同時(shí)還按照GB/T 23817—2009《大豆中磺酰脲類除草劑殘留量的測(cè)定》進(jìn)行了測(cè)定（n=5），測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，2種方法的測(cè)定結(jié)果基本相當(dāng) （GB/T 23817—2009方法測(cè)定的回收率略高，但差異不顯著），按照GB/T 23817—2009測(cè)定的回收率為81.0%～95.0%。

3 小結(jié)

本研究所述方法較GB/T 23817—2009 《大豆中磺酰脲類除草劑殘留量的測(cè)定》等標(biāo)準(zhǔn)方法更為簡(jiǎn)便，極大地簡(jiǎn)化了樣品的前處理過(guò)程，縮短了分析時(shí)間，并可顯著減少試劑成本，各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)也都能滿足日常檢測(cè)工作的要求。運(yùn)用該檢測(cè)方法，豇豆樣品經(jīng)簡(jiǎn)便易行的前處理流程處理后，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析，能對(duì)豇豆中殘留的多種磺酰脲類除草劑進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，方法快捷、簡(jiǎn)便，具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，方法的定量限均低于GB 2763—2005《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》所規(guī)定的殘留限量值，適合于豇豆等蔬菜中磺酰脲類除草劑的定性與定量分析。

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