李思　張福平　林家棟　潘蘭兵　易恒潔　李維

摘要：選擇健康、生長發(fā)育良好的赤水烏骨雞母雞、飼養(yǎng)條件相同的普通母雞各4羽，采胸肌烘干后制粉備用。選擇200只雌性健康斷奶小白鼠，隨機(jī)分成5組，A組為對照組，只飼喂小白鼠專用飼料，B、C組每日分別按體質(zhì)量灌服普通雞肌肉粉1.2、2.4 g/kg；D、E組每日分別按體質(zhì)量灌服赤水烏骨雞肉粉1.2、2.4 g/kg。試驗(yàn)期為4周，每周測定各組增質(zhì)量。在第4周末期測定小白鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，進(jìn)行負(fù)重游泳和缺氧試驗(yàn)，測定各組小白鼠血液中溶菌酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶3類血清酶的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加烏骨雞肌肉對小白鼠增質(zhì)量、負(fù)重游泳時間、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響顯著比添加普通雞肌肉好，各組酶指標(biāo)E>D>C>B>A。耐缺氧時間長短分別為E>D>C>B>A。以上結(jié)果說明，赤水烏骨雞肉具有良好的保健效果，對增強(qiáng)小白鼠的體質(zhì)和免疫力均有促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：烏骨雞肌肉；小白鼠；早期發(fā)育

中圖分類號： S873 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：1002-1302（2015）07-0220-03

烏骨雞原產(chǎn)于我國，是營養(yǎng)豐富的滋補(bǔ)食品，又具有特殊的藥用價值，聞名古今中外?，F(xiàn)在，由烏骨雞加工的藥品多種多樣，其系列產(chǎn)品有：烏雞白鳳丸、烏雞白鳳片、烏骨白鳳補(bǔ)精、烏雞婦康糖漿、烏雞補(bǔ)酒、烏雞桂風(fēng)酒、烏雞桂園補(bǔ)酒、烏雞酒、烏雞調(diào)經(jīng)丸、烏雞鴨精等[1]。國內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)描述出烏骨雞的營養(yǎng)保健功能，主要有補(bǔ)血、抗衰老[3]、抗氧化和清除自由基、抗誘變、抗紫外線和金屬離子的富集等作用[2-8]。烏骨雞作為生活中常見、經(jīng)濟(jì)的保健食品，生產(chǎn)高品質(zhì)烏骨雞具有廣大的市場前景和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。本試驗(yàn)通過研究烏骨雞肉對小鼠早期發(fā)育的影響探討赤水烏骨雞的營養(yǎng)保健價值，旨在為提高烏骨雞的保健和藥用價值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

同源赤水烏骨雞、普通肉雞各4羽，取自貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院養(yǎng)雞場。14～18 g初生雌性小白鼠200只，購自貴陽醫(yī)學(xué)院動物室。

1.2 主要儀器設(shè)備

小鼠飼養(yǎng)籠、小鼠灌胃針、烘箱、離心粉碎機(jī)、溶菌酶（lysozgme）檢測試劑盒、過氧化氫酶（Catalase，CAT）測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）測試盒（購自南京建成試劑公司）、分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、電子天平、秒表等常用試驗(yàn)器具。

1.3 試驗(yàn)步驟

1.3.1 雞肉樣品制備

普通雞與烏骨雞用窒息法處死，去毛、洗凈，剝離雞肉、骨頭、內(nèi)臟，雞肉砍碎后放在干燥箱內(nèi)，在100 ℃條件下烘約4 h，然后在80 ℃條件下烘干后粉碎，裝袋標(biāo)記備用。

1.3.2 小鼠分組飼養(yǎng)

初生小白鼠自購買后預(yù)飼3 d，第4 d開始試驗(yàn)前期操作，即分組分梯度飼喂小白鼠，稱質(zhì)量按體質(zhì)量一致原則隨機(jī)分為5個組。每個組20只小鼠，分別為：A組（對照組）：喂食正常飼料；B組（普通雞肉Ⅰ組）：每日喂食烘干普通雞肉1.2 g/kg，相當(dāng)于60 kg的人每天食用普通雞肉濕重約240 g；C（普通雞肉Ⅱ組）：每日喂食烘干普通雞肉 2.4 g/kg；D組（烏骨雞肉Ⅰ組）：每日喂食烘干赤水烏骨雞肉1.2 g/kg；E組（烏骨雞肉Ⅱ組）：每日喂食烘干赤水雞肉 2.4 g/kg。飼料為配合專用顆粒小鼠料（購自貴陽康牧獸藥飼料），其飼料成分見表1。小鼠灌胃第1天開始，每天早上取空腹小鼠使用電子天平稱質(zhì)量，以精確計算所需灌胃雞肉粉質(zhì)量。

1.4 測定項(xiàng)目與方法

1.4.1 體質(zhì)量指標(biāo)測定

體質(zhì)量指標(biāo)采第1天、第7天、第14天、第21天、第28天的數(shù)據(jù)，按組別總體質(zhì)量除以小鼠數(shù)量的平均體質(zhì)量為參考。

1.4.2 負(fù)重游泳試驗(yàn)

末次喂養(yǎng)后1 d進(jìn)行游泳試驗(yàn)。每組小鼠各取體質(zhì)量相近的7只小鼠，在其尾根部綁上負(fù)荷占其體質(zhì)量5%的鉛皮，置游泳箱（50 cm×50 cm×40 cm）中游泳，水溫（25±1.0）℃，記錄小鼠自游泳開始至沉下水8 s不浮起，即小鼠游泳時間（min）。

1.4.3 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測定

連續(xù)灌胃4周后，小鼠稱質(zhì)量后頸椎脫臼處死，取脾臟和胸腺，去盡筋膜，稱質(zhì)量。根據(jù)免疫器官指數(shù)的計算公式：免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（kg），得出免疫器官指數(shù)。

1.4.4 耐缺氧試驗(yàn)測定方法

取小鼠7只，放入廣口瓶中，蓋上瓶蓋，與一氧化碳發(fā)生裝置連接，秒表計時開始，直至小白鼠死亡，作為小白鼠耐低張性缺氧時間。

1.4.5 血清中溶菌酶總酶活性的測定

采用試劑盒進(jìn)行測定。小鼠眼眶采血，輪胎式離心機(jī)離心30 min，取上層血漿進(jìn)行測定。

1.4.6 血液中過氧化氫酶（CAT）的測定 采用試劑盒進(jìn)行測定。小鼠眼眶采血，取50 μL全血加蒸餾水至5 mL充分混勻放置10 min，用分光光度計在405 nm處測定絡(luò)合物生成量，計算CAT活力。

1.4.7 小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶的測定

采用試劑盒進(jìn)行測定。小鼠眼眶采血，取肝抗凝素全血用雙蒸水分別配成1 ∶49和1 ∶99的血溶液測定酶促反應(yīng)中還原型谷胱甘肽的消耗，求出酶活力。但是這2個底物在沒有酶的條件下，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)（稱非酶促反應(yīng)），所以最后計算時必須減去非酶促反應(yīng)的部分[9]。

1.4.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

對測定的數(shù)據(jù)輸入Excel電子表格，計算各組數(shù)據(jù)的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，對得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，評判各組數(shù)據(jù)優(yōu)劣，得出結(jié)論。

2 結(jié)果與分析

2.1 體質(zhì)量指標(biāo)測定

各組增質(zhì)量差異極顯著。添加普通雞肉和添加烏骨雞肉的小鼠增質(zhì)量與對照組相比均顯著增加，D組與B組、E組與C組增質(zhì)量相比差異極顯著；C組與B組、E組與D組增質(zhì)量相比差異不顯著（表2）。說明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠增質(zhì)量，增加雞肉劑量對小鼠增質(zhì)量有一定效果，但差異不顯著。

2.2 負(fù)重游泳試驗(yàn)

添加普通雞肉和添加烏骨雞肉的小鼠游泳時間與對照組相比均顯著增加，各試驗(yàn)組與對照組相比體質(zhì)量均有增加（表3），小鼠體質(zhì)量變化也可能是影響小鼠負(fù)重游泳時間的因素之一。

添加同一種雞肉的試驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量變化不顯著。而D組與B組相比游泳時間顯著增加，E組與C組相比顯著增加。這表明添加烏骨雞肉比添加普通雞肉更能夠增強(qiáng)小鼠體力，有抗疲勞作用。

2.3 脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測定

添加普通雞肉和烏骨雞肉的小鼠與對照組相比脾臟指數(shù)均極顯著增加。D組與B組相比脾臟指數(shù)顯著增加，E組與C組相比顯著增加 （表4），說明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠脾臟指數(shù)。此外，添加烏骨雞肉組與添加普通雞肉組及對照組相比，胸腺指數(shù)顯著增加，添加普通雞肉組與對照組相比胸腺指數(shù)有所增加，但差異不顯著（表4），說明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠胸腺指數(shù)。

2.4 小鼠耐缺氧試驗(yàn)結(jié)果分析

試驗(yàn)組小白鼠曲張性耐缺氧時長高于對照組，添加烏骨雞肉組相比普通雞肉組差異顯著，且E組比D組也有顯著差異（表5）。

2.5 溶菌酶的測定結(jié)果分析

添加普通雞肉能顯著提高小鼠血清中的溶菌酶含量，添加烏骨雞肉的小鼠血清中溶菌酶含量明顯高于添加普通雞肉的小鼠（表6）。

2.6 過氧化氫酶活力的測定結(jié)果分析

添加普通雞肉能顯著提高小鼠血液中的CAT活力，而添

加烏骨雞肉的小鼠血液中的CAT活力極顯著高于對照（P<001）（表7），說明添加烏骨雞肉對增加小鼠血液中的CAT活力好于添加普通雞肉。

2.7 小鼠全血中谷胱甘肽過氧化物酶活力的測定結(jié)果分析

添加雞肉能明顯提高小鼠血液中谷胱甘肽過氧化物酶活力，尤其是E組谷胱甘肽過氧化物酶活力極顯著高于對照（表8）。與添加普通雞肉相比，同等添加量情況下添加烏骨雞肉增加谷胱甘肽過氧化物酶活力的幅度更大。

3 討論

小鼠生長迅速，且與人的生長發(fā)育過程相似，所以小鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)的結(jié)果對人有一定的參考價值。由于試驗(yàn)組較對照組增加了蛋白質(zhì)的供應(yīng)量，所以添加雞肉組與對照組相比的結(jié)果可比性較差，而比較烏骨雞組與普通雞組間的差異更具有參考意義。

在增質(zhì)量試驗(yàn)中，C組與B組相比增質(zhì)量不顯著，E組與D組相比增質(zhì)量不顯著，說明增加雞肉劑量對小鼠增質(zhì)量差異不顯著，但也可能是添加雞肉的劑量超過了小鼠的消化吸收能力。D組與B組相比增質(zhì)量極顯著增加，E組與C組相比也極顯著增加，說明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠增質(zhì)量，進(jìn)一步證實(shí)了烏骨雞促進(jìn)動物生長的生物學(xué)作用。

在負(fù)重游泳試驗(yàn)中，添加烏骨雞肉和添加普通雞肉的小鼠與對照組相比小鼠游泳時間均極顯著增加，但也可能受小鼠體質(zhì)量變化的影響，由于各試驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量變化不顯著，因此可以通過比較烏骨雞組與普通雞組間的差異，分析對小鼠負(fù)重游泳時間的影響。D組與B組相比負(fù)重游泳時間顯著增加，E組與C組相比也顯著增加。說明添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠負(fù)重游泳時間，這表明添加烏骨雞肉能夠增強(qiáng)小鼠體力，有抗疲勞作用。

在脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的測定試驗(yàn)中，D組與B組相比脾臟指數(shù)極顯著增加，E組與C組相比脾臟指數(shù)也極顯著增加；對于胸腺指數(shù)，烏骨雞肉組和普通雞肉組相比，胸腺指數(shù)顯著增加。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加烏骨雞肉能顯著提高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，說明烏骨雞肉能增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

在缺氧試驗(yàn)中，B組耐缺氧時長較A組無顯著差異，C組、D組較A組有顯著提高（P<0.05），E組較對照組有極顯著高（P<0.01），說明添加烏骨雞肉有提高小鼠體質(zhì)的功能，且與添加量呈正相關(guān)。

小鼠血清溶菌酶含量測定中，B組小白鼠血清溶菌酶含量較A組無顯著差異，C組較對照組小白鼠有顯著提高，D組較A組小白鼠也顯著提高（P<0.05），E組較A組含量提高極顯著。過氧化氫酶活力測定中，B組、C組較A組顯著提高，D組、E組較A組極顯著提高。谷胱甘肽過氧化物酶活力測定中，B組、C組、D組較A組小白鼠顯著提高，E組較A組極顯著提高。以上3種酶是動物機(jī)體抗衰老、抗病能力、抗病毒能力等的指標(biāo)之一。小白鼠飼喂烏骨雞肉1個月以后血液中3種酶的含量、活力均高出未食用雞肉和食用普通雞肉的小鼠，證明赤水烏骨雞肉具有能增強(qiáng)抗病能力、增強(qiáng)體質(zhì)、延緩細(xì)胞衰老等保健功能。

通過上述研究，我們初步證實(shí)了赤水黑羽烏骨雞肉能增強(qiáng)小白鼠的體質(zhì)和免疫力，其保健價值遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過普通雞肉。本研究為進(jìn)一步探究烏骨雞的保健價值、藥用方法及開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

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