劉 喬，管曉輝，黃翠菊，夏 炎，沈明浩（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春　130118）

GA的提取分離工藝優(yōu)化及其體內(nèi)抗氧化活性作用

劉 喬，管曉輝，黃翠菊，夏 炎，沈明浩*
（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130118）

目的：探討利用漆酶破壁結(jié)合超聲波輔助法提取靈芝孢子粉中靈芝酸（ganoderma acid，GA）組分以及GA對(duì)D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠的體內(nèi)抗氧化活性的影響。方法：利用正交試驗(yàn)將工藝條件優(yōu)化；D-半乳糖連續(xù)皮下注射進(jìn)行亞急性衰老小鼠造模，建模同時(shí)，以抗壞血酸 為陽(yáng)性對(duì)照組，GA設(shè)立高、中、低劑量組對(duì)衰老模型小鼠進(jìn)行灌胃，另設(shè)立空白對(duì)照組和模型對(duì)照組，灌胃0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na），每周測(cè)一次體質(zhì)量，6 周后分別測(cè)所有小鼠血清、肝臟、腦組織的總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）活力、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，血清和腦組織的谷胱甘肽過(guò)氧化物歧化酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）活力、血清和肝臟的總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）值。結(jié)果：得到最優(yōu)工藝條件為料液比1∶60、加酶量0.04 g/mL、超聲3 次、每次超聲時(shí)間3 h，在此工藝條件下得到GA的提取率為1.69%；GA可明顯提高小鼠體內(nèi)T-SOD、GSH-PX活力和T-AOC值，降低MDA含量。結(jié)論：得到GA的最佳提取工藝穩(wěn)定可行；GA能顯著提高衰老模型小鼠的體內(nèi)抗氧化能力。

漆酶；靈芝酸；D-半乳糖；衰老；抗氧化

我國(guó)東北三省有豐富的靈芝資源，尤其以長(zhǎng)白山靈芝孢子粉最為知名。靈芝孢子是靈芝的有性生殖細(xì)胞——擔(dān)孢子，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)，其藥用價(jià)值和保健作用日益受到重視［1-2］，含有維生素、多糖、生物堿、三萜等多種生物活性成分，據(jù)測(cè)定其中多糖、多肽、三萜、氨基酸和蛋白質(zhì)等活性物質(zhì)的含量均是子實(shí)體的70 倍以上［3］。靈芝孢子具有堅(jiān)硬的雙層外壁結(jié)構(gòu)，其成分幾丁質(zhì)含量為52.08%～57.64%，無(wú)機(jī)元素構(gòu)成以Si（19.01%）、Ca（24.31%）為主，硅和鈣摻入幾丁質(zhì)使得孢壁更加結(jié)實(shí)堅(jiān)硬，且耐酸堿，極難氧化分解4］，因此未破壁的靈芝孢子中的有效物質(zhì)不易于提取，限制人體對(duì)其有效物質(zhì)的消化吸收［5］，朱江等［6］曾采用復(fù)合酶酶解方法來(lái)生產(chǎn)破壁靈芝孢 子粉，破壁率高。

Kutoba等［7］在1982年首次從靈芝的子實(shí)體中分離得到三萜類靈芝酸（ganoderma acid，GA）A和GAB，1988年從靈芝屬中分離得到103 種三萜類新化合物，曾祥麗等［8］曾報(bào)道靈芝中含有122 種三萜類成分，其中最主要的是GA 37 種。

小鼠衰老模型的建立方法包括胸腺摘除法、臭氧致衰老法、Y射線照射法以及半乳糖注射法等，D-半乳糖注射法最為常用，D-半乳糖可以在正常質(zhì)量濃度代謝，但在高質(zhì)量濃度時(shí)它可以在半乳糖氧化酶的催化條件下轉(zhuǎn)化為醛糖和氫過(guò)氧化物，導(dǎo)致超氧化物陰離子自由基和氧自由基的生成，破壞機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)?，F(xiàn)代藥理研究表明，靈芝三萜類化合物具有保肝調(diào)脂［9-10］、抗腫瘤［11］、抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性［12］、誘導(dǎo)CNE2細(xì)胞凋亡［13］、抗氧化和抑制組織胺釋放等作用［14］，劉曉珍等［15］證實(shí)了黑靈芝中的三萜成分有著較強(qiáng)的體外抗氧化活性，但作為三萜化合物的GA的體內(nèi)抗氧化活性還鮮有相關(guān)的報(bào)導(dǎo)。為了對(duì)GA組分開(kāi)展進(jìn)一步的研究，本研究采用漆酶酶解及超聲波技術(shù)結(jié)合的方法來(lái)從未破壁的靈芝孢子粉中提取粗GA，利用正交試驗(yàn)將工藝條件優(yōu)化，并對(duì)靈芝孢子粉中GA粗提物的體內(nèi)抗氧化活性做了更深一步的探討。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

未破壁靈芝孢子粉長(zhǎng)白山特產(chǎn)商貿(mào)城豐茂山珍；漆酶（食品級(jí)，4 000 U/g）、羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）（食品級(jí)）上海申光食用化學(xué)品有限公司；抗壞血酸、D-半乳糖、無(wú)水乙醇、三氯甲烷、冰醋酸、香草醛、高氯酸、齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸、氫氧化鈉、濃鹽酸及分離用有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）試劑盒、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）值試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物歧化酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）試劑盒南京建成生物工程公司。

1.2儀器與設(shè)備

WD-2102型自動(dòng)酶標(biāo)儀北京市六一儀器廠；N-1001D-WA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀東京理化器械株式會(huì)社；GL-20G-Ⅱ高速冷凍離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠；超純水系統(tǒng)法國(guó)Millapore公司；DZF-6050型真空干燥箱上海光譜儀器有限公司；KQ-250B型超聲波清洗器東京理化器械株式會(huì)社；酸度計(jì)梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1GA組分的提取及制備

稱取一定質(zhì)量靈芝孢子粉，加入適量漆酶和pH 6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在70 ℃條件下破壁1 h，滅酶、干燥，加入98%乙醇溶液為溶劑超聲提取，抽濾得濾液，45 ℃減壓濃縮得棕黃色固油混合物，混合物復(fù)溶于100 mL的CHCl3中，用飽和NaHCO3溶液（CHCl3-NaHCO3體積比為1∶1）萃取3 次，取NaHCO3溶層，用6 mol/L鹽酸酸化至pH 3～5后用等量CHCl3再萃取3 次，合并CHCl3層，減壓濃縮干燥得黃色粗GA組分［16］。灌胃時(shí)將其溶于0.5% CMC-Na制成懸浮液。用無(wú)水乙醇定容至10 mL待測(cè)。

1.3.2GA提取率的測(cè)定

1.3.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作［17］

用無(wú)水乙醇將齊墩果酸標(biāo)品制成0.018 6 mg/mL質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取0.0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL的樣液于具塞試管中80 ℃水浴揮干，分別加入現(xiàn)配的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸1.2 mL，70 ℃水浴保溫反應(yīng)15 min，流水冷卻至室溫，分別加入3.6 mL的乙酸乙酯，振蕩后靜置15 min，550 nm波長(zhǎng)條件下用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)其吸光度。以齊墩果酸質(zhì)量濃度（X，mg/mL）為橫坐標(biāo)，測(cè)得的吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出線性方程為A=47.377X+0.003 5，R2=0.998 9。

1.3.2.2GA提取率及粗提物純度計(jì)算

將提取出的粗GA組分用無(wú)水乙醇定容至10 mL，精確吸取一定體積的樣液于具塞試管中作為反應(yīng)樣液，參照1.3.2.1節(jié)中標(biāo)曲中的操作方法進(jìn)行反應(yīng)并測(cè)定吸光度A，GA提取率（Y）及GA粗提物純度（P）計(jì)算如式（1）、（2）所示：

式中：X為反應(yīng)樣品質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V為反應(yīng)體系的體積，5 mL；N為定容的體積與反應(yīng)樣液之比；M為稱取孢子粉質(zhì)量/mg；m為GA粗提物質(zhì)量/mg。

1.3.3GA提取工藝優(yōu)化設(shè)計(jì)

1.3.3.1單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在其他條件相同的條件下，即取1 g孢子粉、20 mL pH 7的緩沖液、70 ℃條件下酶解1 h，干燥后分別考察加酶量（0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 g/mL）、超聲時(shí)間（1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h）、超聲次數(shù)（1、2、3、4、5）、料液比（1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70（g/mL））4 個(gè)單因素對(duì)GA提取率的影響，其他萃取條件同1.3.1節(jié)。

1.3.3.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以GA提取率作為衡量指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究加酶量、超聲時(shí)間、超聲次數(shù)和料液比4 個(gè)因素對(duì)GA提取率的影響，確定最優(yōu)提取工藝條件。各因素及水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1　正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)Table 1 Factors and their coded levels used in orthogonal array design

1.3.4動(dòng)物分組及造模

空調(diào)動(dòng)物房?jī)?nèi)溫度18～22 ℃，自然光照。健康的昆明種小鼠60 只（體質(zhì)量（22±2）g），雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為6 組（正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，GA給藥低、中、高劑量組），每組10 只，分籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服0.5%的CMC-Na；VC陽(yáng)性對(duì)照組按照100 mg/（kg·d）的劑量灌胃；GA給藥低、中、高劑量組分別按照50、100、200 mg/（kg·d）的劑量灌胃。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠在灌胃的同時(shí)頸部皮下注射D-半乳糖200 mg/（kg·d），D-半乳糖溶液以滅過(guò)菌的生理鹽水配制，正常對(duì)照組注射生理鹽水，以上各組灌胃和注射劑量均按0.1 mL/10 g標(biāo)準(zhǔn)操作［18］。每日灌服、注射1 次，連續(xù)6 周。每周稱體質(zhì)量1 次，按體質(zhì)量再調(diào)整灌胃量和注射量。

1.3.5組織樣品的制備

實(shí)驗(yàn)小鼠在末次給藥后，禁食1 d，稱體質(zhì)量，摘取眼球采血，分離血清。將小鼠脊椎脫臼處死，迅速取出全腦、肝組織，用4 ℃生理鹽水沖凈表面殘血，濾紙吸干水分，稱質(zhì)量，腦組織和肝組織快速制成勻漿液。取0.2～1.0 g小鼠組織塊，在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干。稱質(zhì)量后放入勻漿器，添加9 倍質(zhì)量的預(yù)冷生理鹽水制成10%的組織勻漿液，同理分別制成1%和0.25%的組織勻漿液。

1.4數(shù)據(jù)分析

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用PASW Statistics18軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以±s表示；顯著性分析為單向方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖 1　加酶量對(duì)提取率影響Fig.1　Effect of enzyme concentration on the extraction yield of GA

2.1.1加酶量對(duì)提取率的影響由圖1可以看出，隨著加酶量的增加，底物與酶接觸機(jī)會(huì)不斷增加［19］，使GA從孢壁中溶出來(lái)的幾率增大，從而使提取率也逐漸增加，在加酶量達(dá)到0.04 g/mL時(shí)提取率達(dá)最高，繼續(xù)增加漆酶質(zhì)量濃度對(duì)提取率影響不大，酶與底物結(jié)合幾乎達(dá)到飽和，甚至有可能分解或破壞有效物質(zhì)結(jié)構(gòu)［20］，提取率趨于平緩甚至緩慢下降，從節(jié)省材料等方面考慮，加酶量的考察范圍定為0.03～0.05 g/mL。

2.1.2超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響

圖 2　超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響Fig.2　Effect of ultrasonic time on the extraction yield of GA

由圖2可以看出，GA提取率隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，當(dāng)時(shí)間達(dá)到3 h時(shí)提取率達(dá)到最高，繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間，提取率開(kāi)始緩慢下降，可能是超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞溶入介質(zhì)內(nèi)的GA的物質(zhì)結(jié)構(gòu)［21］，降解物質(zhì)結(jié)構(gòu)影響提取率［22］，由此可以看出超聲時(shí)間的最佳范圍為2.5～3.5 h。

2.1.3超聲次數(shù)對(duì)提取率的影響

由圖3可以看出，GA提取率隨著超聲次數(shù)的增加而逐漸增加，當(dāng)超聲2 次后提取率的增加趨于平緩，有效物質(zhì)的溶出較為完全，細(xì)胞內(nèi)外溶液質(zhì)量濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡［23］，再增加提取次數(shù)時(shí)，提取率的增加幅度不大且耗時(shí)較長(zhǎng)，因此超聲次數(shù)的范圍確定為1～3。

圖 3　超聲次數(shù)對(duì)提取率的影響Fig.3　Effect of number of ultrasonic treatments on the extraction yield of GA

2.1.4料液比對(duì)提取率的影響

圖 4　料液比對(duì)提取率的影響Fig.4　Effect of ratio of solid to liquid on the extraction yield of GA

由圖4得知，GA的提取率隨著溶劑用量的增加而增加，通過(guò)增加溶劑進(jìn)入細(xì)胞增加提取率，當(dāng)料液比達(dá)到1∶60時(shí)達(dá)到最大，繼續(xù)增大溶劑用量時(shí)，提取率變化不大或許已達(dá)到飽和［24］，從節(jié)約溶劑角度考慮，料液比最佳范圍選擇為1∶50～1∶70。

2.2正交試驗(yàn)結(jié)果與最優(yōu)組合的確定

表2　正交試驗(yàn)結(jié)果與極差分析Table 2 Orthogonal array design with range analysis of experimental results

由表2可以看出，各因素對(duì)指標(biāo)影響的主次次序?yàn)镃＞B＞D＞A；直觀觀察得出最優(yōu)組合為A2B3C3D2，即加酶量0.04 g/mL、超聲時(shí)間3 h、超聲3 次、料液比1∶60（g/mL），在此組合條件下驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)3 次取平均值，得出GA提取率為1.69%。測(cè)得粗提物GA純度為62.74%，雜質(zhì)多為鹽。

2.3GA對(duì)小鼠的抗氧化作用

2.3.1GA對(duì)亞急性衰老模型小鼠血清中各指標(biāo)影響由表3可以看出，模型組中小鼠血清中的T-SOD活力、GSH-PX活力與空白組小鼠相比明顯下降，MDA含量顯著升高，差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明亞急性衰老模型小鼠建模成功；而與模型對(duì)照組相比，GA和VC可顯著增加D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠血清中的T-SOD活力和GSH-PX活力，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA含量，差異均為顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01），其中GA中劑量組和高劑量組中3 個(gè)指標(biāo)結(jié)果與空白組結(jié)果接近，說(shuō)明GA對(duì)小鼠血清中T-SOD活力、MDA含量和GSH-PX活力有著顯著影響。

表 3 GA對(duì)亞急性衰老小鼠血清中T-SOD活力、MDA含量和GSH-PX活力的影響（n==1100）Table 3 Effect of GA on the contents of SOD， MDA and GSH-PX inserum o f subacute aging mice （n =10）

2.3.2GA對(duì)亞急性衰老模型小鼠肝臟中各指標(biāo)影響

表 4 GA對(duì)亞急性衰老小鼠肝臟中T-SOD活力、MDA含量和T-AOC值的影響（n==1100）

Table 4 Effect of GA on MDA content， SOD activity and T-AOC value in liver of subacute aging mice （n =10）

表4顯示，與空白對(duì)照組相比，衰老模型小鼠肝臟中的T-SOD活力和T-AOC值明顯降低，MDA含量增加，陽(yáng)性對(duì)照組和GA各劑量組與模型組相比T-SOD活力與T-AOC值有不同程度的增加，MDA含量不同程度的降低，其中GA中、高劑量組中T-SOD活力明顯增加，MDA含量明顯降低，差異均為極顯著（P＜0.01）；GA高劑量組中T-AOC值與模型組相比顯著增加；說(shuō)明GA對(duì)小鼠肝臟中T-SOD活力、MDA含量和T-AOC值影響顯著。

2.3.3GA對(duì)亞急性衰老模型小鼠腦組織中各指標(biāo)影響

表5　GA對(duì)亞急性衰老小鼠腦組織中T-SOD活力、MDA含量、GSH-PX活力和T-AOC值的影響（n==1100）Table 5 Effect of GA on SOD activity， MDA content and T-AOC valuein brain of subacute aging mice （n =10

由表5可知，低、中、高劑量的GA可明顯提高亞急性衰老小鼠腦組織中T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值，降低大腦中MDA含量，其中GA中劑量組和高劑量組中T-SOD活力、GSH-PX活力和T-AOC值增加極顯著，GA高劑量組降低MDA含量能力與VC陽(yáng)性對(duì)照組接近，與模型對(duì)照組相比差異極顯著（P＜0.01）。

3　討 論

D-半乳糖建立衰老動(dòng)物模型最為常見(jiàn)［25］，D-半乳糖是一種營(yíng)養(yǎng)成分，在正常質(zhì)量濃度時(shí)可以被代謝，但超過(guò)一定質(zhì)量濃度時(shí)機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖質(zhì)量濃度升高，在醛糖還原酶催化條件下轉(zhuǎn)化為半乳糖醇，由于這種物質(zhì)不能被進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)影響滲透壓，引起細(xì)胞腫脹代謝紊亂，影響機(jī)體內(nèi)的抗氧化酶活性。T-SOD活力和GSH-PX活力高低代表著機(jī)體清除氧自由基的能力大小，MDA含量代表著機(jī)體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度［26］，T-AOC值代表總抗氧化能力。本研究中，在小鼠連續(xù)42 d注射半乳糖溶液后，T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值下降，MDA含量顯著降低，與秦紅兵等［27］研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明衰老模型造模成功。

本研究通過(guò)GA各劑量組來(lái)考察GA對(duì)衰老模型小鼠體內(nèi)的各抗氧化酶和脂質(zhì)過(guò)氧化物的影響，與模型組比，GA各劑量組可以不同程度地增加小鼠體內(nèi)T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值，降低MDA含量，其中血清中的MDA含量、GSH-PX活力，肝臟和腦組織中的MDA含量與GA劑量呈正相關(guān)，而T-SOD活力與T-AOC值在血清和組織中雖不與劑量呈正相關(guān)性，但各劑量組的結(jié)果與模型組相比差異比較明顯，尤其中、高劑量組多為顯著或極顯著，且中劑量組和高劑量組之間差異不大，可能是由于當(dāng)功能因子到達(dá)一定劑量時(shí)，對(duì)機(jī)體內(nèi)的各個(gè)抗氧化酶的作用逐漸趨于痕量，且小鼠之間個(gè)體差異較大，操作過(guò)程中可能存在少量偏差，綜合各個(gè)指標(biāo)結(jié)果，證實(shí)了GA具有良好的抗氧化效果；本實(shí)驗(yàn)用酶解和超聲結(jié)合的方法從未破壁的靈芝孢子粉中提取GA，粗提物經(jīng)測(cè)定純度為62.74%，GA占主要成分，雜質(zhì)主要為萃取過(guò)程中產(chǎn)生的鹽類，在抗氧化過(guò)程中GA起主要作用；而純化后的GA是否會(huì)有更好的抗氧化效果還有待進(jìn)一步研究。

3　結(jié) 論

通過(guò)正交試驗(yàn)確定了靈芝孢子粉中GA組分的提取分離最優(yōu)工藝條件，即加酶量0.04 mg/mL、超聲時(shí)間3 h、超聲3 次、料液比1∶60（g/mL），在此組合條件下得出GA提取率可達(dá)1.69%，與初始工藝相比提取率提高了1.72倍。

抗氧化實(shí)驗(yàn)表明，靈芝孢子粉中的GA組分能夠明顯提高小鼠血清、肝臟和腦組織中 的T-SOD活力、GSHPX活力和T-AOC值，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA含量，表明GA具有良好的抗氧化效果。

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Optimized Extraction of Crude Ganoderic Acid from Ganoderma lucidum Spore and Antioxidant Effect in Vivo

LIU Qiao， GUAN Xiaohui， HUANG Cuiju， XIA Yan， SHEN Minghao*
（College of Food Science and Engineering， Jilin Agricultural University， Changchun130118， China）

The extraction of ganoderma acid （GA） from Ganoderma lucidum spore was explored by the combined use of cell wall disruption with laccase and ultrasonic-assisted extraction. Besides， this study also examined the antioxidant effect of GA in subacute senile mice induced by D-galactose. Methods: The extraction process was optimized through orthogonal array experiments. A subacute senile mouse model was established by continuous subcutaneous injection of D-galactose into the nape of the neck. Using ascorbic acid as positive control group， the mice in the high， moderate and low dose groups were given GA by gavage， while those in the blank and model control groups were given 0.5% CMC-Na by gavage. Body weights of these mice were measured once a week for six weeks. After the experimental period， total superoxide dismutase （T-SOD），the levels of malondialdehyde （MDA） in the serum， liver and brain of mice， the activities of glutathione peroxidase （GSHPx） in the serum and brain， and total antioxidant capacity （T-AOC） in the serum and liver were determined. Results: The optimal conditions for GA extraction were determined as follows: solid/liquid ratio， 1:60； enzyme concentration， 0.04 g/mL；ultrasonic time， 3 h； and number of ultrasonic treatments， 3. Under these conditions， the maximum yield of GA of 1.69% was obtained. Conclusions: The optimized extraction process is stable and feasible. The GA extracted from Ganoderma lucidum spore could obviously improve T-SOD and GSH-Px activities as well as T-AOC capacity and reduce MDA content in mice. Together， these results implied the obvious anti-aging effects of the GA on subacute senile mice induced by D-galactose.

laccase； ganoderic acid； D-galactose； aging； antioxidant effect

Q949.91

A

1002-6630（2015）24-0089-06

10.7506/spkx1002-6630-201524015

2015-04-24

劉喬（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全評(píng)價(jià)。E-mail：liuq1216@163.com

沈明浩（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称范纠砼c安全、胚胎毒理。E-mail：shenmh2003@163.com