黃文惠（國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局專利審查協(xié)作廣東中心，廣東 廣州 510530）

在親水作用色譜固定相當(dāng)中，反相液相色譜是一種十分高效的液相色譜技術(shù)，具有良好的分離重現(xiàn)性、選擇性和分辨率，在中等極性和弱極性化合物的分析和分離中，應(yīng)用十分廣泛。而在離子型強(qiáng)極性化合物當(dāng)中，該技術(shù)難以提供適當(dāng)?shù)姆蛛x和保留的選擇性。正相色譜技術(shù)能夠較好的對(duì)極性化合物進(jìn)行分離和保留，但是其重現(xiàn)性較差，其流動(dòng)相對(duì)于強(qiáng)極性化合物的溶解性不良，同時(shí)正相色譜的質(zhì)譜和溶劑也無(wú)法很好的進(jìn)行兼容。而親水作用色譜固定相則可以很好的解決這兩方面的問(wèn)題。

1 親水作用色譜固定相的發(fā)展及應(yīng)用

1.1 未衍生化硅膠

在HILIC當(dāng)中，純硅膠是應(yīng)用最為廣泛的色譜固定相在酸性環(huán)境當(dāng)中，硅膠柱的穩(wěn)定性十分良好，相比于化學(xué)修飾的HILIC固定相，硅膠柱不會(huì)發(fā)生鍵合相流失的情況。同時(shí)其于質(zhì)譜之間的兼容性較為良好，因此，在極性藥物的分析和分離等領(lǐng)域當(dāng)中，取得了十分廣泛的推廣和應(yīng)用。在生物學(xué)和非生物學(xué)領(lǐng)域的藥物分析檢測(cè)中，硅膠柱也有著廣泛的應(yīng)用。它能夠?qū)λ幬镏苿┊?dāng)中的活性藥物成分進(jìn)行分析，對(duì)藥物合成過(guò)程中的活性藥物、輔料、中間體、雜質(zhì)、初始原料進(jìn)行分離，對(duì)血漿或尿液中的藥物及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行生物標(biāo)記物的定量和分析檢測(cè)。不過(guò)，純硅膠柱也存在著一些弊端，例如它容易對(duì)強(qiáng)堿性化合物產(chǎn)生不可逆的吸附作用[1]。在堿性或中性環(huán)境中，由于缺乏鍵合相的保護(hù)，容易產(chǎn)生硅膠顆粒的溶解，穩(wěn)定性不良。為此，基于亞乙基橋雜化的硅膠顆粒得以產(chǎn)生和應(yīng)用，對(duì)硅膠柱在堿性和中性環(huán)境中的穩(wěn)定性進(jìn)行了提高。即使是這樣，硅膠柱的親水性仍然十分有限，無(wú)法十分有效的完全保留極性化合物，分離選擇性也比較弱。

1.2 氨基鍵合相

在早期的HILIC的極性鍵合固定相當(dāng)中，采用的是氨基鍵合相。實(shí)際上，在HILIC產(chǎn)生之前，在乙腈和水的混合流動(dòng)相體系當(dāng)中，就曾利用氨基修飾硅膠進(jìn)行了碳水化合物的分離。在利用氨基鍵合相進(jìn)行單糖和多糖的分離時(shí)，能夠有效的提高端基差向異構(gòu)體的轉(zhuǎn)換效率，從而避免由于非對(duì)映體互變而形成的雙峰，從而在分離糖的過(guò)程中能夠形成更好的峰型。然而，氨基柱與酸性化合物之間具有較強(qiáng)的結(jié)合能力，很容易對(duì)一些強(qiáng)酸性化合物產(chǎn)生死吸附。在對(duì)某些還原糖進(jìn)行分離的時(shí)候，醛基和氨基很可能形成席夫堿，使分析物和鍵合相的性質(zhì)發(fā)生改變[2]。此外，由于氨基柱的穩(wěn)定性較差，很容易造成鍵合相的流失。

1.3 氰基和二醇基鍵合相

氰基鍵合相是一種傳統(tǒng)的正相色譜固定相，可以被用作HILIC的固定相。不過(guò)，氰基鍵合相極性弱，難以有效保留親水性化合物。而二醇基鍵合相是一種非離子型鍵合相，具有一定的氫鍵作用。與氰基鍵合相相比，它的表面極性更強(qiáng)。但是與硅膠柱相比，其親水性較差。因此，氰基和二醇基鍵合相的應(yīng)用面較為狹窄。此后，在乙烯基硅膠表面，通過(guò)巰基點(diǎn)擊反應(yīng)將1-硫代甘油和2-巰基乙醇進(jìn)行鍵合，形成了醇羥基型鍵合相。然后利用通過(guò)過(guò)氧化氫將硫進(jìn)行氧化，使其轉(zhuǎn)拜你為亞砜基團(tuán)，從而形成TGO和MEO的鍵合相。通過(guò)分析和實(shí)踐表明，將亞砜基團(tuán)引入到氰基鍵合相和二醇基鍵合相當(dāng)中，能夠有效的提高強(qiáng)極性化合物的分離和保留選擇性[3]。

2 親水作用色譜材料的色譜評(píng)價(jià)

近年來(lái)，隨著HILIC的應(yīng)用領(lǐng)域越來(lái)越廣泛，其固定相的種類也越來(lái)越多。在不同的色譜固定相之間，分離效率和分離選擇性也存在這一定的差異性，為離子性極強(qiáng)型化合物的分析和分離提供了更多的選擇。同時(shí)，結(jié)合反相色譜評(píng)價(jià)體系，進(jìn)行了簡(jiǎn)單的HILIC評(píng)價(jià)體系的設(shè)計(jì)和建立?；竟羌芙Y(jié)構(gòu)為極性化合物尿嘧啶，對(duì)于色譜柱的堿性選擇性和酸性選擇性評(píng)價(jià)所采用的分別是含有堿性基團(tuán)的胞嘧啶，以及含有酸性基團(tuán)的乳清酸，以此來(lái)對(duì)色譜分離過(guò)程中產(chǎn)生的靜電作用的影響進(jìn)行考察[4]。對(duì)于利用胞嘧啶和尿嘧啶的色譜柱親水選擇性考察中，在分子中引入了糖單元的胞苷和尿苷。利用這一評(píng)價(jià)體系，可以初步評(píng)價(jià)不同HILIC色譜柱的分離選擇性。它能夠?qū)ILIC材料的色譜峰形和分離選擇性進(jìn)行很好的體現(xiàn)。不過(guò)，這一色譜評(píng)價(jià)體系讓然比較交單，對(duì)于不同色譜柱之間作用機(jī)理方面的差異還無(wú)法進(jìn)行充分、全面的體現(xiàn)。因此，在HILIC材料未來(lái)的評(píng)價(jià)研究過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)注重探索和發(fā)展給為全面、有效的色譜評(píng)價(jià)方法和評(píng)價(jià)樣品體系。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著親水作用色譜研究的不斷深入發(fā)展，使其在各個(gè)領(lǐng)域當(dāng)中得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。而親水作用色譜材料是高效液相色譜的核心，對(duì)于色譜技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用來(lái)說(shuō)，具有十分重要的意義。雖然當(dāng)前已經(jīng)有了以硅膠為基質(zhì)的親水作用色譜固定相，但是其中仍然存在著一定的不足。對(duì)此，應(yīng)當(dāng)堅(jiān)持發(fā)展新型的高親水性、高選擇性的色譜固定相，不斷對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化和完善，使親水作用色譜固定相能夠取得更高的發(fā)展和更為廣泛的應(yīng)用。

[1]李媛媛.硅基親水作用液相色譜固定相的制備及應(yīng)用研究[D].蘭州大學(xué),2012.

[2]郭志謀,張秀莉,徐青,梁鑫淼.親水作用色譜固定相及其在中藥分離中的應(yīng)用[J].色譜,2012,05:675-681.

[3]戴小軍.新型親水作用色譜固定相的制備及色譜性能研究[D].西北大學(xué),2011.

[4]劉甜甜,趙珺.親水作用色譜研究及環(huán)糊精固定相的應(yīng)用[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2014,05:615-622.