唐志國(guó)，王 斌，張騰霄

(1.綏化市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，黑龍江綏化 152061;2.綏化學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院，黑龍江綏化 152061)

中藥柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.和狹葉柴胡B.scorzonerifolium Willd.的干燥根，前者習(xí)稱北柴胡，后者習(xí)稱南柴胡［1］。柴胡能散風(fēng)退熱、升陽(yáng)疏肝，用于治療感冒發(fā)熱、寒熱往來、痢疾、肝郁氣滯、胸脅脹痛、子宮脫垂、脫肛、月經(jīng)不調(diào)等癥［2］。北柴胡主產(chǎn)于河北、河南、遼寧、陜西等。柴胡為常用大宗藥材，其重要的藥用價(jià)值使需求逐年增加，不僅國(guó)內(nèi)需要量大，且大量出口。由于長(zhǎng)期依賴采挖，野生資源及其生境破壞嚴(yán)重，資源已近枯竭，目前商品柴胡主要依賴栽培。柴胡存在嚴(yán)重的種內(nèi)和種間類型混雜的現(xiàn)象，導(dǎo)致柴胡品種優(yōu)劣不等的問題［3］。不同地區(qū)使用的藥用部位也不盡相同，藥典規(guī)定柴胡的藥材為柴胡的根，但市場(chǎng)上的藥材往往是根和5～10 cm莖的混品入藥，有人則以地上部分入藥。

柴胡中的有效成分為柴胡皂苷、甾醇、揮發(fā)油和多糖等，此外，還含有黃酮類成分。黃酮類化合物對(duì)人體在抗腫瘤、抗衰老及心血管等疾病的治療和預(yù)防有重要意義［4－5］。如蘆丁具有抗氧化、抗基因突變和降低毛細(xì)血管異常通透性及脆性的作用，臨床上用于治療過敏性紫癜及各種因毛細(xì)血管脆性增加而引起的出血性疾病，也用于治療高血壓和老年氣管炎等［6］。槲皮素是黃酮類化合物中具有代表性的一種，研究發(fā)現(xiàn)槲皮素具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗糖尿病并發(fā)癥等多種生物活性及藥理作用，對(duì)呼吸道疾病，特別是對(duì)哮喘病和支氣管疾病有較好的作用［6－7］。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于柴胡提取工藝的文獻(xiàn)報(bào)道較多，但多以皂苷類、揮發(fā)油指標(biāo)進(jìn)行考察，很少有單獨(dú)考察黃酮類化合物的文獻(xiàn)，因此，該研究采用正交試驗(yàn)考察柴胡中黃酮類化合物的提取及其不同部位的含量，為提高仿生栽培柴胡的質(zhì)量和療效打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀(2996紫外檢測(cè)器);KQ－500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司);METTLER AE240電子天平RE52－86A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2 試藥 仿生栽培樣品采自黑龍江省的明水縣柴胡種植基地，野生柴胡樣品采自黑龍江省的明水縣本地;蘆丁(批號(hào)100080－200801)、槲皮素(批號(hào) 100081－200502)、山柰素(批號(hào)110861－200805)、異鼠李素(批號(hào)110860－200504)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度均大于98%;乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.3 方法

1.3.1 柴胡中黃酮類化合物含量測(cè)定。

1.3.1.1 色譜條件。迪馬 C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈(A)－0.1%磷酸水(B)，梯度洗脫，0～15 min(5% ～20%A)、15～30 min(20% ～35%A)、30～45 min(35% ～45%A)、45～55 min(45% ～50%A)、55～60 min(50% ～5%A);洗脫時(shí)間為60 min;檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm;流量1.0 ml/min;柱溫為 35 ℃，進(jìn)樣量 20 μl。

1.3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍。準(zhǔn)確稱取蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素對(duì)照品各約20 mg，分別置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度?；靹蚝蠓謩e進(jìn)樣 2、5、10、20、30 μl，按“1.3.1.1”色譜條件作HPLC分析。以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理，得蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素的線性回歸方程和線性范圍(表1)。

1.3.2 樣品測(cè)定。精密吸取 20 μl樣品溶液，在“1.3.1.1”色譜條件下測(cè)定，記錄峰面積，分別計(jì)算相應(yīng)黃酮類化合物的含量，再計(jì)算總量。

1.3.3 正交試驗(yàn)。以柴胡中4種黃酮類化合物含量的總量為指標(biāo)，設(shè)定pH=7、浸漬時(shí)間30 min、提取時(shí)間20 min，分別以乙醇溶度、料液比、浸漬溫度和超聲功率等主要因素及不同水平進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)(表2)，篩選最佳工藝。

表1 4種黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 正交試驗(yàn)因素及水平

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果 由表3可知，浸漬溫度的極差Rj最大，其次是超聲功率，故對(duì)黃酮類化合物提取效果的影響大小順序是A＞D＞B＞C，即浸漬溫度＞超聲功率＞乙醇濃度＞料液比。由于料液比影響不顯著，故綜合考慮，選擇最佳方案為A1B1C1D2，即5倍量的60%乙醇50℃浸漬，80 W功率超聲提取20 min。

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2 最佳方案的驗(yàn)證試驗(yàn) 取柴胡的根、莖和葉分別按最佳方案提取，重復(fù)2次。結(jié)果(表4)顯示，此最佳工藝提取黃酮類化合物其含量較高，且工藝條件穩(wěn)定可靠、重現(xiàn)性好。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 %

3 討論

(1)黃酮類化合物穩(wěn)定性差，在較高溫度下易分解氧化，因此提取時(shí)注意溫度的控制。

(2)分析葉片和莖中黃酮類化合物的含量高于傳統(tǒng)使用的根，劉秀芳等研究認(rèn)為小葉黑柴胡莖葉中總黃酮具有很好的抗氧化活性［8］;詹雪晶等研究認(rèn)為柴胡莖葉中總黃酮對(duì)四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝損傷有保護(hù)作用［9］。故很有必要對(duì)莖、葉進(jìn)行進(jìn)一步的研究，擴(kuò)大柴胡用藥部位。

［1］鄭漢臣，蔡少青.藥用植物學(xué)與生藥學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］ZHANG T T，ZHOU J，WANG Q.HPLC analysis of flavonoids fromthe aerial parts of Bupleurum species［J］.Chin J Nat Medi，2010，8(2):107 －113.

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［6］岳志勁，關(guān)翠林，王海青，等.RP-HPLC法測(cè)定柴胡中四種黃酮類成分的含量［J］.山西大同大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2010，26(4):35 －38.

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