陳　芳，章紅星，陳建紅，黃　瓊（.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州 30000；.浙江大學公共技術(shù)平臺，浙江 杭州 30000）

親子鑒定中46，XX男性性反轉(zhuǎn)1例

陳芳1，章紅星1，陳建紅1，黃瓊2
（1.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州 310000；2.浙江大學公共技術(shù)平臺，浙江 杭州 310000）

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學；親子關(guān)系；性反轉(zhuǎn)

1　簡要案情

1.1案情摘要

當事人李某因更改孩子出生醫(yī)學證明的需要，帶孩子及有效證件來本鑒定中心，要求對自己與孩子之間有無親生血緣關(guān)系進行鑒定，出生醫(yī)學證明顯示孩子性別為男，根據(jù)知情同意原則，分別采集李某（父）與孩子血樣備檢。

1.2檢驗方法

1.2.1 DNA提取

采用常規(guī)Chelex-100法分別提取李某與孩子血樣DNA，GoldeneyeTMDNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑盒［基點認知技術(shù)（北京）有限公司］進行19個常染色體STR基因座和Amelogenin性別基因座分型，GoldeneyeTM20Y試劑盒［基點認知技術(shù)（北京）有限公司］進行20個Y-STR基因座的分型，Y-micro-del-Reader Y染色體微缺失試劑盒（北京閱微基因技術(shù)有限公司）進行17個基因座的檢測，X-STR試劑盒（北京閱微基因技術(shù)有限公司）進行19個X-STR基因座的分型，擴增體系和擴增程序按相關(guān)操作手冊進行。

1.2.2 STR分型

采用9700型PCR儀（美國AB公司）進行PCR擴增，3130XL型全自動遺傳分析儀（美國AB公司）進行電泳分離，GeneMapper ID v3.2.1軟件（美國AB公司）處理電泳數(shù)據(jù)，實驗過程參照操作手冊。

1.3檢驗結(jié)果

1.3.1常染色體STR基因座分型結(jié)果

對19個常染色體STR基因座（D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、vWA、D8S1179、TPOX、Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA）和Amelogenin性別基因座進行STR分型檢驗，發(fā)現(xiàn)除CSF1PO基因座外，其他基因座均符合孟德爾遺傳定律，且孩子Amelogenin性別基因座只檢測出等位基因X，等位基因Y未檢出。

圖1　STR基因座分型

1.3.2 Y染色體STR基因座分型結(jié)果

對Y染色體進行20個Y-STR基因座（DYS391、DYS389Ⅰ、DYS390、DYS389Ⅱ、DYS438、DYS456、H4、DYS447、DYS19、DYS392、DYS393、DYS460、DYS439、DYS635、DYS448、DYS388、DYS458、DYS437、DYS385a/b）的分型檢測，父親20個Y-STR分型正常，孩子未檢測出Y-STR分型。

1.3.3 Y染色體微缺失檢測結(jié)果

對Y染色體進行17個基因座的微缺失檢測，孩子樣本只在SMCX、ZFX、DAZL這3個位點有符合預期大小的產(chǎn)物峰，其他所有Y染色體基因座無擴增產(chǎn)物，孩子AZF a、b、c區(qū)域均缺失，且SRY陰性，結(jié)果見表1。

1.3.4 X染色體STR基因座分型結(jié)果

對X染色體進行19個基因座的X-STR檢測，父親分型結(jié)果正常，孩子部分基因座表現(xiàn)為兩個等位基因，且每個基因座的等位基因均可從父親那找到來源。

表1　孩子17個Y染色體微缺失檢測結(jié)果

2　討論

本案例通過對孩子常染色體和Y染色體STR分型檢測，初步判斷孩子Y染色體存在微缺失現(xiàn)象。17個Y微缺失位點遍布整條Y染色體，通過Y染色體微缺失試劑盒檢測進一步證實Y染色體缺失，初步判斷孩子染色體核型為45，X男性或者46，XX男性。X染色體屬人類的性染色體，正常男性只有一條，正常女性有兩條，男性的X染色體來自生母，且遺傳給女兒。如果孩子只有一條X染色體，每個X-STR基因座應只顯示一個等位基因，且等位基因來源于母親，可以推斷孩子為45，X男性；如果孩子有兩條X染色體，每個X-STR基因座顯示兩個等位基因或者一個等位基因，表現(xiàn)為雜合子或純合子，且一條來源于母親，另一條來源于父親，可以推斷孩子為46，XX男性。本例中，孩子在X-STR基因座顯示有兩個等位基因或者一個等位基因，且每個基因座中其中一個等位基因都能從父親那找到來源，進一步證實孩子存在兩條X染色體，其中一條來自父親。通過以上結(jié)果分析，最終推斷孩子為46，XX男性，也即46，XX男性性反轉(zhuǎn)綜合征。

性反轉(zhuǎn)綜合征（sex reverse syndrome）指染色體性別和性腺不一致的一類疾病，包括46，XX男性和46，XY女性，這種性分化異常由決定性別的控制基因的異常所引起，表現(xiàn)為表型性別不能確定的中間性狀態(tài)，或表型性別與性腺性別或遺傳性別相矛盾的現(xiàn)象。其發(fā)病率約為1∶25000～1∶20000［1］，2006年歐洲兒科內(nèi)分泌學會將46，XX性反轉(zhuǎn)綜合征更名為46，XX性發(fā)育睪丸疾病。男性的性別由SRY基因決定，因此，46，XX男性性反轉(zhuǎn)患者根據(jù)SRY基因檢測可分為SRY陽性和SRY陰性兩類。患者的臨床癥狀也常表現(xiàn)出一定程度的異質(zhì)性，SRY基因陽性的患者外生殖器發(fā)育多為正常［2］，在青春期前，無其他明顯陽性體征，但也有伴隨生殖器畸形的病例報道［3］。目前46，XX男性的發(fā)病機制還不明確。本案例中，根據(jù)Y染色體微缺失檢測結(jié)果及X-STR分型結(jié)果，可以推斷孩子為46，XX（SRY陰性）男性。通常46，XX男性性反轉(zhuǎn)綜合征患者臨床上有較大的異質(zhì)性，青春期前多無異常，常因不育就診而被發(fā)現(xiàn)，僅少數(shù)患者在青春期前得以確診。而本例的發(fā)現(xiàn)較為特殊，系在親子鑒定過程中因Amelogenin性別基因座等位基因Y缺失而被發(fā)現(xiàn)。

在實際檢案中，遇到這種性別相矛盾的特殊案例時，首先要確認檢材的正確性，需要時可重新采樣確認，更換不同試劑盒以排除因引物結(jié)合位點突變導致的Y等位基因缺失，然后可進一步加做Y-STR進行檢驗，如果Y-STR未檢測出任何PCR產(chǎn)物，可以初步判斷為Y微缺失。最直接判斷Y缺失的方法是進行染色體核型分析，結(jié)合Y-STR及Y微缺失的檢測結(jié)果，可以判斷是Y染色體微缺失還是整條Y染色體缺失（45，X男性），還是性反轉(zhuǎn)患者（46，XX男性）?？傊捎谛詣e決定和分化過程的復雜性以及性反轉(zhuǎn)發(fā)生機制的多樣性，在親子鑒定過程中，遇到性反轉(zhuǎn)患者應建議其去醫(yī)院進行染色體核型分析和SRY基因的常規(guī)診斷，以明確性別異常的原因，指導患者合理治療，促進第二性征的發(fā)育，防止性腺惡變。通過反復實驗，確保鑒定結(jié)果無誤后，方可定論，以保證鑒定結(jié)果的準確性和科學性，同時建議在鑒定意見書中不要體現(xiàn)性別基因座，以免造成不必要的麻煩或糾紛。

參考文獻：

［1］Rajender S，Rajani V，Gupta NJ，et al.SRY-negative 46，XX male with normal genitals，complete masculinization and infertility［J］.Mol Hum Reprod，2006，12（5）：314-346.

［2］Ergun-Longmire B，Vinci G，Alonso L，et al.Clinical，hormonal and cytogenetic evaluation of 46，XX males and review of the literature［J］.J Pediatr Endocrinol Metab，2005，18（8）：739-748.

［3］衡雪源，李琳，寧玻.46，XX男性性反轉(zhuǎn)綜合征四例［J］.

中華醫(yī)學遺傳學雜志，2008，25（3）：361.

（本文編輯：李成濤）

中圖分類號：DF795.2

文獻標志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2015.05.030

文章編號：1004-5619（2015）05-0415-02

收稿日期：（2014-12-31）

作者簡介：陳芳（1983—），女，湖北黃石人，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學鑒定；E-mail：chen-fang@zju.edu.cn

通信作者：黃瓊，女，主要從事法醫(yī)物證學和法醫(yī)病理學鑒定；E-mail：huangqiong@zju.edu.cn