高迎春　魏秀麗　陸慶泉　張傳津　（山東省獸藥質量檢驗所　山東 濟南　250022）何新麗　（山東華爾康獸藥有限公司　山東 濟南）

地錦草顆粒對雞耐藥性大腸桿菌病的臨床效果觀察

高迎春魏秀麗陸慶泉張傳津（山東省獸藥質量檢驗所山東 濟南250022）
何新麗（山東華爾康獸藥有限公司山東 濟南）

摘要本試驗對地錦草顆粒及其他有關藥物治療大腸桿菌病進行觀察，結果表明，地錦草顆粒與硫酸新霉素聯(lián)合應用效果最好。

關鍵詞地錦草枯粒耐藥性大腸桿菌臨床效果

雞大腸桿菌垂直傳播和水平傳播可引起不同品種和不同日齡的雞感染發(fā)病，發(fā)病率30%～60%，幼雞病死率60%～100%，耐藥率30%～80%，其造成的經濟損失巨大，嚴重阻礙了養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展［1-3］。

目前臨床上防治雞大腸桿菌病的主要藥物是新霉素、氧氟沙星、阿莫西林、慶大霉素、卡那霉素等抗菌藥。由于抗菌藥的濫用，大腸桿菌的耐藥性迅速形成、傳播和擴散，不僅使藥物劑量加大，療程延長，抗菌藥療效減弱甚至無效；雞源大腸桿菌多重耐藥性嚴重，耐藥性成為了嚴重困擾動物健康的問題，同時由于動物源性食品的獸藥殘留超標及耐藥性傳遞，對人類健康和公共衛(wèi)生也產生了嚴重的風險。因此本試驗采用新研發(fā)的無耐藥性、無藥物殘留、毒副作用小的天然藥物耐藥抑制劑-地錦草顆粒，治療耐藥性大腸桿菌，從根本上消除了大腸桿菌耐藥抑制，提高了藥物療效，取得了良好的效果［4-6］。

1　材料與方法

1.1試驗藥品

1.1.1試驗藥物地錦草顆粒（批號20121201），山東華爾康獸藥有限公司生產，經山東省獸藥質量檢驗所檢驗合格。

1.1.2對照藥物（1）硫酸新霉素可溶性粉（批號201210 26），含量5%，山東華爾康獸藥有限公司生產；（2）阿莫西林可溶性粉（批號13022631），含量5%，濰坊華辰獸藥有限公司生產；（3）鹽酸恩諾沙星可溶性粉（批號2013011 2-1），含量2.5%，鹽酸多西環(huán)素可溶性粉（批號20130201-4），含量5%，濟南聯(lián)達獸藥有限公司生產；（4）硫酸新霉素標準品（批號30801），含量90.0%，Germany公司生產。

1.2試驗動物

某養(yǎng)殖場所飼養(yǎng)的AA品種肉雞35000只，20日齡，體重720g左右，發(fā)病3d，發(fā)病數(shù)為15000多只，死亡1000多只。

1.3試劑

甲醇、七氟丁酸、磷酸二氫鉀、三氯乙酸、甲酸、冰乙酸、氫氧化鈉、濃鹽酸。

1.4藥敏紙片、培養(yǎng)基、菌株

藥敏紙片：阿莫西林、多西環(huán)素、新霉素、恩諾沙星；普通營養(yǎng)瓊脂、MH培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂，革蘭氏染色液；ATCC 25922大腸桿菌，均購自杭州天和試劑有限公司。

1.5儀器與設備

Waters液相色譜儀串聯(lián)質譜儀、BP211D型電子天平、MP200B型電子天平、水浴恒溫振蕩器、離心機、氮吹儀、顯微鏡、游標卡尺、恒溫培養(yǎng)箱、移液器。

1.2方法

1.2.1觀察臨床癥狀和剖檢變化

1.2.3試驗室檢查無菌采取肝臟、腹水和心臟血液接種于普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)20h，觀察培養(yǎng)物顏色、形態(tài)，并將培養(yǎng)物涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。大腸桿菌血清型診斷：將抗原抗體在玻璃板上做凝集反應，0.5min內有凝集者為“陽性”反應，同時以抗原與0.5%石炭酸生理鹽水做對照。

1.2.2藥敏試驗藥敏試驗根據(jù)美國臨床標準委員會（NCCLS）推薦的K-B瓊脂法進行，每次藥敏試驗必須用ATCC 25922大腸桿菌做質控。

1.2.3試驗分組試驗動物及其處理：初步確診后將發(fā)病雞14000只分5組，飲水量0.2L/只。治療方案：I組硫酸新霉素可溶性粉用量150mg/L；II組鹽酸恩諾沙星可溶性粉用量200mg/L；III組地錦草顆粒+硫酸新霉素可溶性粉用量2g/L+50mg/L；IV組地錦草顆粒+鹽酸恩諾沙星可溶性粉用量2g/L+50mg/L；V組地錦草顆粒用量為2g/L，連續(xù)用藥5d。

1.2.4殘留檢測休藥期后5d，隨機抽?、蠼M地錦草顆粒+新霉素可溶性粉治愈組，雞5只，采取肌肉組織勻漿后，分別檢測肌肉組織中硫酸新霉素的殘留量，檢測依據(jù)為GB/T 21323-2007 動物組織中氨基糖苷類藥物殘留量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質譜法。

2　結果

2.1臨床癥狀和剖檢

病雞表現(xiàn)為離群呆立、羽毛松亂、食欲減退，部分雞排黃白色稀便。剖檢主要表現(xiàn)為心包積液，心包膜混濁、增厚、不透明，嚴重的有纖維素滲出；肝臟有不同程度的腫脹，表面有不同程度的纖維素性滲出物，甚至整個肝臟為一層纖維素性薄膜所包裹；腹腔有不同程度的腹水，混有纖維素性滲出物。懷疑是大腸桿菌病。

2.2鏡檢結果

經分離培養(yǎng)實驗，不同培養(yǎng)基上，單個菌落顏色和形態(tài)略有差異，細菌分離培養(yǎng)的結果見表1。顯微鏡觀察染色結果：菌體呈現(xiàn)紅色，兩端鈍圓，長度約1.5～3.0μm的短桿菌，多數(shù)單個存在，偶見有2～3個菌體連在一起。經血清學實驗，0.5min內有凝集，為“陽性”反應，確定病原菌為大腸桿菌。

表1　不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)

根據(jù)發(fā)病情況，結合主要表現(xiàn)、剖檢變化，初步診斷為雞大腸桿菌病，再經過實驗室檢查確診該病為雞大腸桿菌病。

2.3藥敏試驗結果

只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株的結果才可以報告。用游標卡尺記錄藥敏圈直徑，對照藥敏試驗判斷標準，得出結果。試驗結果見表2。

表2　抗菌藥對大腸桿菌藥敏試驗結果

判定標準：抑菌圈直徑（￠）≥20mm者為高度敏感以“+++”表示。抑菌圈直徑（￠）16≤（￠）≤20mm為中度敏感以“++”表示。圈直徑（￠）10≤（￠）≤16mm為低度敏感以“+”表示。抑菌圈直徑（￠）≤10者為耐藥以“-”表示。

由表2看出：大腸桿菌對阿莫西林、多西環(huán)素為耐藥，對新霉素中敏，對恩諾沙星低敏。

2.4臨床治療結果

臨床試驗結果表明地錦草顆粒分別與硫酸新霉素可溶性粉、鹽酸恩諾沙星可溶性粉聯(lián)合用藥，治愈率分別提高了26%、30%，有效率也有所提高。

表3　地錦草顆粒等藥物對雞大腸桿菌病的臨床療效　（只、%）

2.5殘留檢測結果

依據(jù)為GB/T 21323-2007動物組織中氨基糖苷類藥物殘留量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質譜法進行測定，Ⅲ組地錦草顆粒2g/L +硫酸新霉素可溶性粉50mg/L聯(lián)合用藥組，5只雞均未檢出新霉素。

3　小結

地錦草顆粒與硫酸新霉素可溶性粉聯(lián)合應用降低到50mg/L不僅比單用硫酸新霉素效果好，關鍵是未檢出新霉素殘留量，證明地錦草顆粒具有明顯的消除耐藥抑制作用。地錦草與硫酸新霉素可溶性粉聯(lián)合應用，減少了硫酸新霉素的用量，能消除耐藥抑制作用，恢復藥物敏感性，成本低，療效好，降低食品中的藥物殘留，減少耐藥性對人類帶來的風險，在規(guī)?；B(yǎng)殖場的應用前景非常廣闊。

參考文獻

［1］ 趙秀英， 姚四新， 王憲文. 雞源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測與分析［J］，河南科技學院學報. 2008（3）: 54-56.

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［3］ 范允新， 鄭偉， 馮宜水. 雞大腸桿菌病的診斷與防治［J］， 中國畜禽種業(yè). 2010（6）: 146-147.

［4］ 高迎春， 張傳津， 都業(yè)良. 地錦草顆粒對雞人工感染大腸桿菌病的臨床療效試驗［J］， 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2012（2）: 52-55.

［5］ 張傳津， 楊修鎮(zhèn)， 高迎春. 地錦草顆粒的急性亞急性毒性試驗［J］， 山東農業(yè)科學. 2014， 46（6）: 128-130.

［6］ 張傳津， 楊修鎮(zhèn)， 張琦等. 地錦草顆粒對雞的安全性試驗［J］， 畜牧獸醫(yī)雜志. 2012（5）: 1-2.

中圖分類號：S853.76

文獻標識碼：A

文章編號：1007-1733（2015）04-0009-02

收稿日期：（2015-01-23）