劉桂森　桑業(yè)華　王相琴　（云南省瀘水縣動物疫病預(yù)防控制中心　673199）馬文張（云南省瀘水縣飼草飼料站）

一起規(guī)模養(yǎng)豬場圓環(huán)病毒病的實驗室診斷和防治

劉桂森桑業(yè)華王相琴（云南省瀘水縣動物疫病預(yù)防控制中心673199）
馬文張*（云南省瀘水縣飼草飼料站）

豬圓環(huán)病毒病是由圓環(huán)病毒2型引起的一種新的傳染病，已嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。本次實驗室診斷主要是為了確診是否感染圓環(huán)病毒。采集了全場存欄豬的血清772份，進(jìn)行ELISA抗體檢測實驗，結(jié)果表明，該養(yǎng)豬場圓環(huán)病毒的感染率為64.12%，該養(yǎng)殖場圓環(huán)病毒流行的原因是引種不慎，將帶有圓環(huán)病毒的病豬進(jìn)入該規(guī)模養(yǎng)殖場后，沒有檢驗、嚴(yán)格隔離而導(dǎo)致。豬圓環(huán)病毒病僅從臨床癥狀和剖檢病理變化上是很難做出快速診斷，只有通過采樣進(jìn)行實驗室檢測，才可以確診，在引種中嚴(yán)格檢驗，進(jìn)行有效隔離，才能減少該病的流行和發(fā)生。

豬圓環(huán)病毒（PCV）屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，為單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA病毒。該病毒粒子直徑為14～25nm，為二十面體對稱結(jié)構(gòu)，無囊膜，是獸醫(yī)學(xué)上已知動物病毒中最小的病毒之一，是一種新的豬傳染病。根據(jù)致病性、抗原性及核苷酸序列，將其分為PCV-1和PCV-2兩型。臨床上豬感染PCV-1無致病性，但PCV-2是仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬呼吸病綜合征（PRDC）、豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）的重要病原，還可引起多種腸炎病、仔豬先天性震顫（仔豬抖抖病）、母豬繁殖障礙等疾病。已嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，應(yīng)引起重視。

1　基本情況

2014年5月20日，瀘水縣上江鄉(xiāng)玉淑生豬養(yǎng)殖場到瀘水縣動物疫病預(yù)防控制中心反映，該養(yǎng)殖場從5月14日開始有豬只出現(xiàn)發(fā)病癥狀，到20日死亡母豬3頭、仔豬23頭。經(jīng)詢問畜主，感染豬主要表現(xiàn)為病豬精神萎靡，食欲減退，被毛粗亂，漸進(jìn)性消瘦，咳嗽，稀瀉，呼吸困難呈腹式，部分母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，新出生仔豬有震顫癥狀。接到報告后，瀘水縣動物疫預(yù)防控制中心到實地進(jìn)行診斷，體溫41.5℃，有的豬腹下、耳尖、四肢末梢等處發(fā)紅或發(fā)紫，經(jīng)過解剖死亡豬，見腎臟腫大，呈灰白色，腹股溝淋巴結(jié)、縱隔淋巴結(jié)腫大、發(fā)現(xiàn)黃疸癥狀。初步診斷感染了豬圓環(huán)病毒，在開展臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，采集了該場所有存欄豬的血清進(jìn)行實驗室ELISA抗體檢測檢測。

2　采樣化驗

2.1材料

2.1.1血清樣品采集全場存欄豬的血清772份，包括種公豬4頭、種母豬55頭（含新引入的10頭、原場的45頭）、雙月以下仔豬327頭、雙月以上育肥豬386頭。

2.1.2診斷試劑豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒，生產(chǎn)廠家是武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司，批號2014007。

2.1.3器械酶標(biāo)儀、恒溫箱、移液器、無菌操作臺

2.2方法

2.2.1操作步驟取抗原包被板，每孔加入稀釋好的洗滌液200μ1，靜置3分鐘倒掉液體，并在吸水紙拍干，共計洗滌2次。再分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100μ1加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30min。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μ1，靜置3min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μ1，置37℃溫育30min。再洗滌5次，每次都要在干凈的吸水紙上拍干。每孔先加底物液A一滴（50μ1）、再加底物液B一滴（50μ1），混勻，室溫（18～25℃）避光顯色10min。每孔加終止液一滴（50μ1），10min內(nèi)測定結(jié)果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。

2.2.2結(jié)果判定在酶標(biāo)儀上測各孔OD630nm值，用620～650納米波長測定結(jié)果均有效，試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值≥0.7，陰性對照孔平均OD630nm值必須＜0.3。樣品OD630nm值＞0.42，判為陽性；樣品OD630nm值介于0.38到0.42之間，判為可疑；樣品OD630nm值＜0.38，判為陰性。

3　結(jié)果與分析

通過實驗室化驗，該養(yǎng)殖場豬圓環(huán)病毒感染情況見附表。

附表　圓環(huán)病毒ELISA抗體檢測結(jié)果　　　　　?。?）

通過對772份血清樣品進(jìn)行實驗室ELISA抗體檢測可發(fā)現(xiàn)，該養(yǎng)豬場圓環(huán)病毒的感染率為64.12%，感染數(shù)最高的是種母豬，其中新引入種母豬檢測陽性率是100%，原存欄種母豬檢測陽性率是77.78%，其次是雙月以下仔豬，檢測陽性率是81.35%，最低是雙月以上育肥豬，檢測陽性率是47.12%，種公豬沒有被感染。

可以確定此次該規(guī)模養(yǎng)殖場圓環(huán)病毒流行的原因是引種不慎所致。該養(yǎng)殖場于5月10日引進(jìn)了種母豬10頭，引種中沒有進(jìn)行嚴(yán)格檢驗，引入后沒有進(jìn)行隔離觀察就混群飼養(yǎng)，經(jīng)過檢測引入的母豬帶毒率為100%，帶有圓環(huán)病毒的病豬進(jìn)入該規(guī)模養(yǎng)殖場后，導(dǎo)致母豬舍內(nèi)種母豬和雙月仔豬大量發(fā)病和死亡，育肥豬舍感染的原因是由于帶病仔豬轉(zhuǎn)入育肥階段時傳入。而種公豬沒有被感染的原因是飼養(yǎng)區(qū)相對獨立，引入母豬之后也沒有進(jìn)行配種，并有隔離設(shè)施，每天嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度。

4　防治措施

4.1緊急預(yù)防

用浙江諾培威生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（ZJ/C株）進(jìn)行緊急預(yù)防，肌肉注射大豬2ml、小豬1ml。注射方法是首先對ELISA抗體檢測陰性的豬只，然后是檢測陽性的豬只。

4.2治療

哺乳仔豬注射長效土霉素或者頭孢噻呋，同時用阿莫西林（500mg/L）飲水；種母豬和斷奶育肥豬用阿莫西林、氨基比林、黃芹多糖分別肌肉注射，1次/d，連用5d，目的是減少并發(fā)感染，同時在飼料中添加土霉素（1000g/50kg）、在飲水中添加葡萄糖粉（500g/50kg），加強營養(yǎng)。通過以上措施7d后大多數(shù)病豬有好轉(zhuǎn)，但仍有部分豬食欲下降。

4.3消毒

在豬場內(nèi)全面消毒，嚴(yán)格執(zhí)行消毒程序，切斷傳播途徑，殺死病原體。豬舍過道和場區(qū)用2%～3%火堿消毒，舍內(nèi)用百毒殺消毒，1次/d。

4.4防控措施

（1）對所有檢測出陽性的豬只進(jìn)行隔離，加強飼養(yǎng)管理，保證豬舍的通風(fēng)，淘汰感染的種母豬。（2）在疫病發(fā)生期間，禁止配種，以免公豬感染。

5　小結(jié)

（1）豬圓環(huán)病毒病是一種新的傳染病，僅從臨床癥狀和剖檢病理變化上是很難做出快速診斷，通過采樣進(jìn)行實驗室檢測，可以確診是否感染了豬圓環(huán)病毒，查清流行情況和感染數(shù)量，是規(guī)模養(yǎng)殖場下一步疫病預(yù)防和治療重要指導(dǎo)依據(jù)。（2）規(guī)模養(yǎng)殖場要預(yù)防圓環(huán)病毒的傳入必須堅持自繁自養(yǎng)，外購豬要嚴(yán)格檢疫，隔離觀察，確認(rèn)無病后方可入群。嚴(yán)格實行“全進(jìn)全出”制度，制定合理的免疫程序，搞好定期消毒工作。（3）豬圓環(huán)病毒2型感染在本場出現(xiàn)了三種臨床表現(xiàn)，即仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征、皮炎和腎病綜合征、豬間質(zhì)性肺炎。由此可見，該病毒不僅損害免疫器官，還損害肺臟、腎臟、心臟等，使多器官功能衰竭。（4）由于該病毒損害免疫器官，使機體的抗病力下降，產(chǎn)生免疫抑制，所以易繼發(fā)豬附紅細(xì)胞體病、豬放線菌性肺炎、豬支原體性肺炎、豬鏈球菌病等，要確診該病上必須采集樣品做實驗室檢測，在預(yù)防與治療上應(yīng)配合用抗繼發(fā)病藥。

中圖分類號：S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1007-1733（2015）04-0029-02

收稿日期：（2015-01-22）

*通訊作者