羅楚

[摘要] 目的 探討人體血漿微小RNA-499（miRNA-499）對(duì)急性心肌梗死患者的診斷價(jià)值。 方法 選取本院2012年1～12月收治的60例急性心肌梗死患者作為觀察組，另選擇同期本院體檢中心的60例無心腦血管疾病史的健康體檢者作為對(duì)照組。以兩組的miRNA-499為指標(biāo)進(jìn)行含量考察，比較急性心肌梗死患者的miRNA-499、cTn、CRP診斷符合率。 結(jié)果 觀察組的miRNA-499相對(duì)表達(dá)量為3.623±1.123，顯著高于對(duì)照組的0.819±0.017，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。60例AMI患者中，miRNA-499的陽性率為100%，cTnI與cTnT的陽性率均為96.7%，CRP的陽性率為86.7%。 結(jié)論 miRNA-499可作為急性心肌梗死的新標(biāo)志物，進(jìn)一步提高急性心肌梗死診斷的特異性。

[關(guān)鍵詞] 血漿微小RNA-499；急性心肌梗死；早期診斷

[中圖分類號(hào)] R542.2+2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2015）05（c）-0099-03

[Abstract] Objective To explore the diagnostic value of human plasma miRNA-499 for patients with acute myocardial infarction. Methods 60 patients with acute myocardial infarction from January 2012 to December in our hospital were selected as the observation group.60 cases with no history of cerebrovascular disease received health examination in the physical examination centre of our hospital were selected as the control group.The content of miRNA-499 in the two groups was investigated as the index，diagnostic accordance rates of miRNA-499，cTn and CRP in 60 patients with AMI was compared. Results The relative expression level of miRNA-499 in the observation group was 3.623±1.123，which was higher than 0.819±0.017 in the control group，with significant difference（P<0.05）.In 60 patients with AMI，the positive rate of miRNA-499 was 100%，the positive rate of cTnI and cTnT was 96.7% respectively，and the positive rate of CRP was 86.7%. Conclusion MiRNA-499 can be used as a new marker of acute myocardial infarction.and can further improve the specificity of acute myocardial infarction diagnosis.

[Key words] Plasma miRNA-499；Acute myocardial infarction；Early diagnosis

目前，心血管疾病嚴(yán)重影響著人類健康，其中急性心肌梗死患者的病情最重，死亡率最高，及時(shí)準(zhǔn)確地確診急性心肌梗死可以緩解病情，降低死亡率[1-2]。臨床用于診斷急性心肌梗死的主要標(biāo)志物為血清超敏心肌肌鈣蛋白I和心肌肌鈣蛋白I（cTnI），但確診時(shí)間較長[3-5]。本研究采用qRT-PCR檢測方法對(duì)本院收治的急性心肌梗死患者進(jìn)行miRNA-499含量動(dòng)態(tài)檢測，旨在進(jìn)一步了解miRNA-499對(duì)AMI的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2012年1～12月收治的60例急性心肌梗死患者作為觀察組，其中男38例，女22例；年齡39～82 歲，平均（59.4±6.9）歲。另選擇同期本院體檢中心的60例無心腦血管疾病史的健康體檢者作為對(duì)照組，其中男40例，女20例；年齡37～78歲，平均（56.4±7.1）歲。觀察組的所有入選者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管分會(huì)《急性心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)和指南》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，均在發(fā)病后24 h內(nèi)入住CCU。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有AMI患者入院后均采集肘靜脈血3 ml，發(fā)病后2、4、6、8、10、12、16 h分次抽血，分離血清后待用，直至miRNA-499峰出現(xiàn)，繼續(xù)于第2、3、4、5、6、7天抽血，每天抽血2次直至miRNA-499含量恢復(fù)正常。所有患者在中心靜脈置管處采血，加入EDTA抗凝血，采血后將采血管倒置數(shù)次，采集到的血樣要在30 min內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，血樣按照15 min之內(nèi)兩步離心法處理取上清液待測[3]。

1.2.2 檢測方法 采用qRT-PCR檢測方法檢測miRNA-499含量，cTnT測定采用電化學(xué)發(fā)光法，cTnI采用金標(biāo)法，CRP采用免疫透射比濁法測定。

1.3 試劑與儀器

Beckmen公司Access全自動(dòng)微粒子免疫化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑，TAKARA公司Two Step qRT-PCR Kit，德國Eppendorf公司臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)[5804R及小型高速離心機(jī)（5415D）]，美國Forma公司-80℃深低溫冰箱，cTnI檢測試劑盒，cTnT檢測試劑盒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組miRNA-499水平的比較

觀察組的miRNA-499相對(duì)表達(dá)量為3.623±1.123，顯著高于對(duì)照組的0.819±0.017，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 所有患者的miRNA-499、cTnI、cTnT陽性率情況

60例AMI患者中，miRNA-499的陽性率為100%，cTnI與cTnT的陽性率均為96.7%，CRP的陽性率為86.7%（表1）。

3 討論

急性心肌梗死是由于冠狀動(dòng)脈病變的形成使心肌供血急劇減少或中斷所致[6]，是心肌的缺血性壞死，具有發(fā)病快、死亡率高的特點(diǎn)。在急性心肌梗死的診斷方法中，肌酸激酶同工酶（CK-MB）以前一直被認(rèn)為是診斷的最佳標(biāo)準(zhǔn)，但CK-MB在AMI早期、晚期診斷中靈敏度低、特異性差、升高持續(xù)時(shí)間短[7-9]。AMI患者的心肌細(xì)胞受損后，細(xì)胞膜的完整性和通透性均發(fā)生改變。在梗死部位，心肌細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)釋放到外周血液中，可在血液中檢測到這些化學(xué)物質(zhì)，即為心肌損傷標(biāo)志物，通過檢測這些化學(xué)物質(zhì)的含量即可診斷是否發(fā)生AMI。有研究顯示，檢測miRNA-499的含量變化是目前確診AMI的最有效方法[10-12]。

微小RNA是一類小分子非編碼RNA，由21～25個(gè)核苷酸構(gòu)成，主要通過與靶mRNA 3′-非翻譯區(qū)的堿基互補(bǔ)配對(duì)抑制靶mRNA翻譯，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)。相關(guān)研究通過前降支動(dòng)脈結(jié)扎法建立大鼠心肌梗死模型，應(yīng)用定時(shí)定量RT-PCR法，發(fā)現(xiàn)17個(gè)與急性心肌梗死相關(guān)的miRNA座位候選標(biāo)準(zhǔn)，其中9個(gè)miRNA表達(dá)顯著上高，包括miRNA-499，提示miRNA-499可作為心肌梗死的生物標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)[13]。AMI發(fā)生時(shí)，miRNA-499出現(xiàn)早，在AMI出現(xiàn)2～4 h明顯增加，具有持續(xù)時(shí)間長、特異性高等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于急性心肌梗死的臨床診斷，為早期診斷急性心肌梗死提供重要的臨床價(jià)值，而國外有關(guān)miR-499與急性心肌梗死關(guān)系的研究較少[14-15]。

本研究結(jié)果顯示，而國外心肌梗死者患者的miRNA-499相對(duì)表達(dá)量為3.623±1.123，顯著高于健康體檢者的0.819±0.017，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。60例AMI患者中，miRNA-499的陽性率為100%，cTnI與cTnT的陽性率均為96.7%，CRP的陽性率為86.7%。

綜上所述，miRNA-499可作為急性心肌梗死的新標(biāo)志物，以進(jìn)一步提高急性心肌梗死診斷的特異性。

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（收稿日期：2015-01-15 本文編輯：祁海文）