于 濤，馬夢婷，陳曉利，王姍姍，高慶華*

（1塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；2塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

奶牛宮頸粘液pH值與后代性別相關(guān)性分析

于 濤1，馬夢婷2，陳曉利2，王姍姍1，高慶華1*

（1塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300；2塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

為了解子宮頸粘液對奶牛后代性別影響，采集200頭奶牛的子宮頸粘液，測定子宮頸粘液的pH值并記錄與其相應(yīng)編號的母牛后代性別用以推測宮頸粘液pH值與后代性別的相關(guān)性。實驗結(jié)果顯示子宮頸粘液的pH值越高后代為雄性的幾率越大，反之宮頸粘液pH值越低產(chǎn)雌性個體的幾率越大。奶牛子宮頸粘液pH≤6.7的母牛，后代性別多為雌性，pH值≥7.6時，后代多為雄性，奶牛子宮頸粘液pH值在6.8～7.5之間時，雌雄后代數(shù)目較為均等，接近于1：1。

奶牛;宮頸粘液;PH值;性別控制

子宮粘液（Cervical Mucus，CM）是子宮頸管粘液腺所分泌的物質(zhì)，在檢查不孕癥診治[1]，胎兒產(chǎn)前遺傳病的篩查和診斷[2]，卵巢功能測定[3]等均有應(yīng)用。宮頸粘液的量、性質(zhì)、粘液度、結(jié)晶類型等物理化學(xué)性質(zhì)會隨著卵巢激素的影響而發(fā)生不同的改變。宮頸粘液異常有可能會引發(fā)奶牛繁殖障礙綜合征[4]，造成畸形胎兒、母牛不孕甚至產(chǎn)生流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎。宮頸粘液中存在抗精子抗體[5]，影響受孕。子宮頸粘液可能還存在性別控制方面的作用，本試驗從奶牛宮頸粘液pH值與胎兒性別進行相關(guān)性分析，探討子宮粘液是否對胎兒性別產(chǎn)生影響并具有相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 宮頸粘液

根據(jù)牛場配種生產(chǎn)記錄直腸檢查結(jié)果，選取了阿克蘇新農(nóng)牛場奶牛200頭。對試驗?zāi)膛Ｖ蹦c檢查后刺激其宮頸，待其流出發(fā)情盛期宮頸黏液，用滅菌注射器無菌吸取至滅菌小瓶，-20℃密封冷凍備用。

1.1.2 試驗試劑

pH為4.0的HCl緩沖液、7.0NaOH緩沖液、11.0的NaCl緩沖液。

1.1.3 主要儀器

pH酸度儀、微量加樣器。

1.2 試驗方法

1.2.1 pH緩沖液配制

pH=4.0的HCl緩沖液。 用HCl的pH緩沖液粉劑按1 g HCl緩沖液粉劑：10 mL蒸餾水的比例配成PH=4.0的Hcl緩沖液。

pH=7.0的NaOH緩沖液。用NaOH的pH緩沖液粉劑按1 g NaOH緩沖液粉劑：10 mL蒸餾水的比例配成pH=7.0的NaOH緩沖液。

pH=11.0的NaCl緩沖液。 用NaCl的pH緩沖液粉劑按1 g NaCl緩沖液粉劑：10 mL蒸餾水的比例配成pH=11.0的NaCl緩沖液。

1.2.2 宮頸粘液pH值測量

pH為4.0的Hcl，pH為7.0的NaOH，pH為11.0的Nacl緩沖液分別置于3個高壓滅菌的燒杯中。將pH酸度計的溫度探頭的保護套取下將溫度探頭放入室溫水中，調(diào)節(jié)溫度至室溫23.6℃，將pH探頭分別放入盛有3個不同pH值的緩沖液燒杯中進行校正。校正后將pH探頭放入裝有子宮頸粘液的離心管中測定子宮頸粘液的pH值。

1.2.3 后代性別統(tǒng)計

在采取子宮頸粘液樣品同時，記錄實驗?zāi)膛颂?。待奶牛生產(chǎn)后，記錄奶牛后代性別，并與相應(yīng)的宮頸粘液標號進行對比。

使用軟件進行數(shù)據(jù)處理統(tǒng)計。

2 結(jié)果

表1 奶牛宮頸粘液pH值與后代性別關(guān)系

選取了200頭奶牛，受孕奶牛180頭，后調(diào)查受孕母牛的產(chǎn)犢性別，共產(chǎn)犢牛166頭，其中公犢87頭，母犢79頭。我們對數(shù)據(jù)進行整理發(fā)現(xiàn)，配種時母牛陰道粘液的pH值不同，懷孕后所產(chǎn)犢牛的性比例亦不同，隨著pH值的增高，公母犢比例數(shù)值發(fā)生改變，產(chǎn)公犢的比例增加，從表1可以看出不同子宮頸粘液pH值對后代性別的關(guān)系，在pH值為6.4～6.5時，公犢數(shù)為0而母犢數(shù)為2，但是在pH值為7.8～7.9時，公犢數(shù)為8母犢數(shù)為2，pH值在6.8～7.5之間時公母犢數(shù)量相近。結(jié)果顯示在pH＜6.6時所產(chǎn)后代為母犢的概率較高；在6.7＜pH＜7.7時奶牛所產(chǎn)后代既有公犢也有母犢，其后代性別比例接近1：1；在pH值大于7.7是所產(chǎn)的后代為公犢的概率很高，可以說，在偏堿性的宮頸粘液環(huán)境下，后代為公犢的概率很大。

3 討論

本試驗采用分析宮頸粘液pH值與母牛后代性別的關(guān)系來探討宮頸粘液是否對胎兒性別產(chǎn)生影響，初步得到的結(jié)果為奶牛子宮頸粘液pH值≤6.7的母牛，懷孕后所產(chǎn)犢牛雌性多于雄性，pH值≥7.6的母牛所產(chǎn)犢牛雄性多于雌性，奶牛子宮頸粘液pH值6.8～7.5之間雌雄后代數(shù)目較為均等，接近于1：1。

通過本試驗不難發(fā)現(xiàn)宮頸粘液pH值與后代性別有一定的關(guān)系，并且宮頸粘液現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)與繁殖方面[6-10]具有有很大的聯(lián)系。宮頸粘液主要由宮頸內(nèi)膜細胞分泌的,它含有少量的宮腔內(nèi)膜液和輸卵管液。宮頸內(nèi)膜約有100個腺體單位,非排卵期宮頸粘液分泌很少,每天大約0.1 mL；而排卵期則顯著增多,每天大約0.5 mL[6]。本試驗采取的是配種時期的母牛宮頸粘液，在輸精前采取，保證輸精后精液所處的宮頸粘液pH環(huán)境與我們所采取的宮頸粘液樣品pH值量上保持一致。宮頸黏液在奶牛的生殖過程中有促進精子穿透和維持精子生存環(huán)境的作用[7]，但是宮頸粘液會受到激素[8]的影響，血液中雌二醇水平最高時，宮頸內(nèi)膜分泌粘液的細胞內(nèi)糖元及粘蛋白的含量很豐富，有大量的粘多糖。在排卵后期，血液中孕酮水平升高，這就改變了粘蛋白中酸性粘多糖的組成，使粘度增加[9]。由此我們可以得知宮頸粘液在奶牛生殖過程中會發(fā)生很大的變化，這也可以解釋宮頸粘液會影響到繁殖情況。馬瑛[10]等使用SDS-PAGE分離不孕奶牛宮頸黏液抗精子抗體（Antispern antibodies，AsAb），成功分離得到AsAb輕鏈，發(fā)現(xiàn)其在可孕及不孕奶牛體內(nèi)含量存在巨大差別。

本研究中，隨著宮頸粘液的pH值的變化，后代性別也發(fā)生一定的比例變化，pH值于6.8～7.5之間時，后代比例接近于1：1，從數(shù)據(jù)中還可以得出pH值越高其后代為雄性的概率會增長，有實驗[11]驗證了宮頸粘液pH低可減弱精子-粘液相互作用致使生育力降低，且宮頸粘液的pH亦與血清雄激素水平增加有關(guān)，已有很多實驗[12-13]證明奶牛的宮頸粘液能夠識別精子膜抗原,由此本文認為導(dǎo)致后代性別與宮頸粘液pH值相關(guān)的可能原因是由于激素的改變導(dǎo)致宮頸粘液pH值的變化，而宮頸粘液pH值變化致使子宮內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，影響受精環(huán)境，使宮頸粘液對精子選擇性發(fā)生改變。本試驗初步驗證出宮頸粘液pH與后代性別有相關(guān)性，隨著宮頸粘液pH值變化，后代性別在一定范圍內(nèi)具有偏向性。通過本研究得到了相關(guān)性結(jié)果，但是其機理還需進一步的研究證明。

[1]俞錫燦.宮頸粘液檢查在不孕癥診治中的初步應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué),2009,24(4)：273-277.

[2]趙曉曦,梁琳.利用宮頸粘液中的胎兒細胞進行產(chǎn)前遺傳病的篩查和診斷[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2009,17(3)：1-2.

[3]楊光弟,楊忠金,周紅鋒,等.宮頸粘液羊齒狀結(jié)晶的分形分析[J].云南民族大學(xué)學(xué)報,2011,20(1)：75-78.

[4]劉瓊霞，李秀山，譚運華,等.奶牛繁殖障礙綜合征研究進展[J].吉林畜牧獸醫(yī),2004,(2)：13-16.

[5]高慶華,韓春梅,周虛.不孕奶?？咕涌贵w(AsAb)檢測及復(fù)方藥物結(jié)合AI+MOET治療試驗[J].中國獸醫(yī)學(xué)報.2009，（09）.

[6]王爾文.宮頸粘液的生物化學(xué)[J].生殖與避孕,1983，（2）：3-5.

[7]Anil Suri.Sperm specific proteins-potential candidate molecules for fertility control[J].Reproductive Biology and Endocrinology,2004,2(10)：1-6.

[8]Rossato M,Galeazzi C,Ferigo M,et al.Antisperm antibodies modify plasma membrane functional integrity and inhibit osmosensitive calcium influx in human sperm[J].Hum Reprod,2004,(19)：1816-1820.

[9]MOGHISSI,KAMRAN S,MD,et al.Contraceptive Mechanism of Microdose Norethindrone[J].Obstetrics&Gynecology,1973,41(4)：585-594.

[10]馬瑛，高慶華.SDS-PAGE分離不孕奶牛宮頸黏液AsAb[J].中國奶牛,2011,(14)：43-46.

[11]Jenkins JM,Brook PF,Sargeant S,et al.Endocervical mucus pH is inversely related to serum androgen levels and waist to hip ratio[J].Fertility and Sterility,1995,63(5)：1005-1008.

[12]馬瑛,馬明,沈輝等.不孕奶牛宮頸黏液相關(guān)ASA免疫印跡分析[J].中國奶牛,2013,(6)：4-7.

[13]Mollova M,Djarkova T,Ivanova M,et al.Isolation and biological characterization of boar sperm capacitation-related antigen[J].Am J Reprod Immunol.1999,42(4)：254-262.

Correlation Analysis between Cervical Mucus pH and Offspring Sex

YU Tao1,MA Meng-ting2，CHEN Xiao-li2，WANG Shan-shan1，GAO Qin-hua2*
(1.College of Animal Science,Tarim University,Alaer 843300，China;2.College of Life Sciences,Tarim University,Alaer 843300，China)

To investigate the influence of cervical mucus pH on cow offspring sex.By collect cervical mucus from 200 cows,survey pH value of cervical mucus and record the number of cows and their offspring gender to speculate the relationship between cervical mucus pH value and gender of offspring.The results shows as the cervical mucus pH is higher the rate of male offspring is higher,on the contrary,the pH is lower the rate of female offspring is higher.When the cervical mucus pH≤6.7,offspring gender is mostly female,when pH≥7.6,offspring gender is mostly male,when the cervical mucus pH between 6.8-7.5,the number of male and female offspring is close to 1：1.

cow;cervical mucus;pH;sex control

S814.6

：A

1003-6377（2015）01-0040-04

國家自然科學(xué)基金項目（31060306，31260551）;大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（2013107570028）

于濤（1993-），男，新疆阿拉爾人，本科在讀。 E-mail：mmt_316@126.com

高慶華（1970-），男，教授，博士，研究方向為動物性別控制技術(shù)、轉(zhuǎn)基因克隆動物技術(shù)。E-mail：gsy1997@126.com

2014-11-07，

2014-11-19