趙方方 謝德芳 張?jiān)?/p>

摘要：建立了吡唑醚菌酯在香蕉全蕉及蕉肉中殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）分析方法。試樣經(jīng)乙腈提取，Strata/NH2固相萃取柱凈化，采用UPLC-MS/MS測(cè)定。方法最小檢出量為4×10-13 g，方法定量限為0.2 μg/kg；在0.01～0.10 mg/kg范圍內(nèi)，吡唑醚菌酯在香蕉全蕉中平均回收率為83%～92%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.8%；在蕉肉中平均回收率為85%～98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～2.2%。該法靈敏、準(zhǔn)確，快速，可用于香蕉果肉中吡唑醚菌酯殘留量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）；香蕉；吡唑醚菌酯

中圖分類號(hào)：TQ450.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）10-2477-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.046

吡唑醚菌酯是一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑[1]，能有效防治作物的白粉病、霜霉病、炭疽病[2]，尤其對(duì)香蕉黑星病具有良好防治效果[3]。香蕉黑星病是由香蕉大莖點(diǎn)霉菌[Macrophoma musae （Cooke） Berl. et Vogl.]引起，對(duì)香蕉產(chǎn)量和品質(zhì)損害嚴(yán)重[4]。盡管吡唑醚菌酯在香蕉病害防治中發(fā)揮了積極作用。但其藥物殘留引發(fā)的潛在食品安全風(fēng)險(xiǎn)引起了人們的廣泛關(guān)注。目前，吡唑醚菌酯主要采用高效液相色譜法[5，6]、氣相色譜法[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析[8，9]，但樣品多針對(duì)白菜、大蒜、花生、草莓、葡萄、西瓜等作物上[10-15]，而香蕉中吡唑醚菌酯的殘留分析方法國(guó)內(nèi)報(bào)道甚少。鑒于串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法越來(lái)越多的用于農(nóng)藥殘留的測(cè)定[16]，本研究建立了一種采用超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）測(cè)定香蕉中吡唑醚菌酯的方法，以期為開展相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó) Dr.Eh-renstorfer GmbH公司，純度99.0%）；甲醇、乙腈、正己烷、丙酮均為色譜純；氯化鈉（140 ℃烘烤4 h）。Strata/NH2固相萃取柱（55 μm）500 mg/6 mL；1 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（甲醇，0～4 ℃保存）。

1.2 儀器

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（美國(guó)AB SCIEX公司）；萬(wàn)分之一天平（SHIMAZU），T18型高速均質(zhì)機(jī)（德國(guó)IKA集團(tuán)）；微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取 稱取20.0 g粉碎的樣品于燒杯中，加入40 mL乙腈，2 000 r/min勻漿2 min后過(guò)濾到預(yù)裝有5～7 g NaCl的具塞量筒（100 mL）中，劇烈震蕩2 min，室溫靜置30 min。吸取上清液10.0 mL于100 mL圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入5.0 mL正己烷-丙酮（6∶4，V/V，下同）溶解混勻，待凈化。

1.3.2 凈化 吸取5.0 mL正己烷-丙酮溶液預(yù)淋洗Strata/NH2固相萃取小柱，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入待凈化液，用100 mL圓底燒瓶收集；用5.0 mL正己烷-丙酮溶液沖洗圓底燒瓶殘留物后淋洗萃取小柱，重復(fù)3次。收集液減壓蒸發(fā)至干，用2.5 mL甲醇定容后過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.3.3 UPLC-MS/MS分析 液相色譜柱：BEH C18柱 （2.1 mm×50 mm， 1.7 μm），柱溫35 ℃，流動(dòng)相，乙腈： 0.1%甲酸-水溶液= 70∶30（V/V）；流速0.25 mL/min，進(jìn)樣量4 μL；電噴霧正離子模式掃描（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），噴霧電壓5 500 V；噴霧針溫度650 ℃；霧化氣55 psi；輔助加熱氣55 psi；氣簾氣20 psi；碰撞氣6 psi，檢測(cè)參數(shù)見表1。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 用甲醇逐級(jí)稀釋標(biāo)準(zhǔn)貯備液，配成0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用外標(biāo)法定量，對(duì)濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。

1.3.5 準(zhǔn)確度與精密度測(cè)定 量取一定體積的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液加入香蕉全蕉及蕉肉空白中，得質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.10 mg/kg的3個(gè)添加水平，每個(gè)水平設(shè)5次試驗(yàn)，同時(shí)做空白對(duì)照，計(jì)算回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

吡唑醚菌酯極性較強(qiáng)，可采用反相液相色譜分離；在流動(dòng)相中加入0.1%體積分?jǐn)?shù)的甲酸來(lái)控制流動(dòng)相pH值，有利于提高ESI+的離子化效率。故以乙腈/0.1%甲酸-水溶液作為流動(dòng)相，經(jīng)優(yōu)化后，吡唑醚菌酯的保留時(shí)間適中，峰形及分離度良好，且可獲得較強(qiáng)的分子離子峰強(qiáng)度。吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子MRM流圖見圖1，其保留時(shí)間為2.08 min。

2.2 方法線性范圍

在質(zhì)量濃度0.005～0.100 μg/mL范圍內(nèi)，以峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)繪制工作曲線，得y=（2E+08）x+371 552，R2為0.999 6。

2.3 方法準(zhǔn)確度和精密度

香蕉全蕉及蕉肉樣品中添加吡唑醚菌酯的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表2。從表2可知，3個(gè)添加水平在香蕉全蕉中平均回收率為83%～92%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.8%，在蕉肉中平均回收率為85%～98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～2.2%?；厥章室约跋鄬?duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則允許范圍內(nèi)[17]，方法的重復(fù)性好，可滿足殘留分析的要求。

2.4 方法靈敏度

以一定量吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，提取定量離子流色譜圖，以3倍信噪比所需待測(cè)物的濃度計(jì)算（進(jìn)樣量4 μL），吡唑醚菌酯最小檢出量為4×10-13 g。在香蕉空白樣品中添加一定量的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按信噪比（S/N=10）計(jì)算，方法定量限為0.2 μg/kg。

3 小結(jié)

本研究建立了UPLC-MS/MS測(cè)定香蕉全蕉及蕉肉中吡唑醚菌酯殘留量的方法。該法準(zhǔn)確、靈敏、快速，其檢出限和定量限均低于GB 2763-2014中規(guī)定吡唑醚菌酯在香蕉中的最大限量值（0.02 mg/kg），適用于香蕉中吡唑醚菌酯殘留分析的要求，同時(shí)也為其他農(nóng)產(chǎn)品中吡唑醚菌酯殘留的分析提供了參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] 吳 迪，聶向云，張希躍，等.土壤中吡唑醚菌酯的殘留分析方法和消解動(dòng)態(tài)研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2012，33（7）：25-28.

[2] 高志文.18.7%XM·BZ在辣椒和土壤中的殘留檢測(cè)及消解動(dòng)態(tài)研究[D].天津：天津理工大學(xué)，2011.

[3] 彭埃天，李 鑫，劉景梅，等.25%吡唑醚菌酯乳油對(duì)香蕉黑星病毒力測(cè)定及防治試驗(yàn)[J].植物保護(hù)，2008，34（2）：134-137.

[4] 洪勝福.香蕉黑星病發(fā)生規(guī)律及其防治技術(shù)[J].福建熱作科技，2010，35（2）：14-15.

[5] 閆曉陽(yáng)，徐金麗，徐光軍，等.高效液相色譜法檢測(cè)吡唑醚菌酯在煙葉和土壤中的殘留及消解動(dòng)態(tài)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（5）：528-533.

[6] 李瑞娟，于建壘，宋國(guó)春，等.60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑中吡唑醚菌酯在葡萄和土壤中的殘留分析[J].環(huán)境化學(xué)，2010，29（4）：619-622.

[7] 王 巖，姚威風(fēng)，梁 爽，等.甘藍(lán)和土壤中吡唑醚菌酯·烯酰嗎啉殘留分析[J].農(nóng)藥，2011，50（1）：46-57.

[8] 張育樂(lè)，黃超群，朱曉雨，等.固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定中藥材中7種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的殘留量[J].色譜，2013，31（3）：264-269.

[9] 洪文英，吳燕君，章 虎，等.嘧菌酯和吡唑醚菌酯在黃瓜中的殘留降解行為及安全使用技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，24（3）：469-475.

[10] 張少軍，鄭振山，陳勇達(dá)，等.殺菌劑吡唑醚菌酯在大白菜上的殘留動(dòng)態(tài)[J].中國(guó)蔬菜，2011（18）：77-80.

[11] 李亮亮，王明林，于建壘，等.60%唑醚·代森聯(lián)WG在大蒜及土壤中的殘留[J].農(nóng)藥，2013，52（2）：116-118.

[12] 吳 迪，莘 婧，潘洪吉，等.凝膠滲透色譜-固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定花生中的吡唑醚菌酯殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012， 14（6）：681-684.

[13] 張志恒，李紅葉，吳 珉，等.百菌清、腈菌唑和吡唑醚菌酯在草莓中的殘留及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，11（4）：449-455.

[14] 張志勇，王冬蘭，劉賢進(jìn)，等.西瓜與土壤中吡唑醚菌酯殘留的分析方法[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19386-19387.

[15] 李瑞娟，于建壘，宋國(guó)春.葡萄和土壤中吡唑醚菌酯的高效液相色譜殘留分析方法[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2010，31（6）：33-36.

[16] 張青杰，郭宏斌，鄭亞秋，等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋、牛奶中氯羥吡啶殘留[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，31（4）：108-111.

[17] NY/T 788-2004，農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則[S].