張 靜，楊 陽，趙新娟

1 研究對象與目的

通過對泰山四葉參、黃精、楤木復(fù)方的抗疲勞效果進(jìn)行研究，探討其組方效果，通過動物實驗證實其抗疲勞性功效，制成對人體安全無害的制劑，以增強處于亞健康狀態(tài)的人群體質(zhì)，減輕甚至消除疲勞；也可用于運動員的抗疲勞，提高運動水平，進(jìn)而提高運動成績。

泰山四葉參（見圖1）又名羊乳、泰山參，為泰山名藥之一。泰山四葉參含多種維生素、皂苷、多酮、齊墩果酸及50種揮發(fā)油，主要以根入藥，具有清熱解毒、強壯滋補、舒筋活血、健身補氣等作用。研究觀察泰山四葉參乙醇提取物、乙醇提取后的水提取物可明顯提高小鼠的抗疲勞能力［3］。泰山黃精（見圖2）是一種傳統(tǒng)的名貴中藥，具有寬中益氣、益腎添精、滋陰潤肺、生津補脾、安五臟、填精髓等功效，在抗菌、解毒、抗疲勞、抗衰老等方面均有較好效果［4］。其化學(xué)成分主要有：黃精多糖、甾體皂苷、蒽醌類化合物、生物堿、強心苷、維生素和多種對人體有用的氨基酸等化合物［5］。楤木（見圖3）所含的皂甙是人參的3倍，其藥理作用和使用價值都相當(dāng)可觀［6］。目前將這3種中草藥制成復(fù)方制劑研究小鼠的抗疲勞作用還未見報道。本文旨在探究3種中草藥的復(fù)方制劑對小鼠的抗疲勞作用，并為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

圖1 泰山四葉參

圖2 泰山黃精

圖3 楤木

2 實驗材料與方法

2.1 實驗材料與儀器

2.1.1 實驗藥材

2.1.2 實驗動物

昆明種雄性小白鼠（體重在18-22g）30只，隨機分為3個組，分別是高劑量組10只，低劑量組10只，對照組10只。

2.1.3 儀器與試劑

2.2 實驗方法

2.2.1 實驗材料的處理

將四葉參、黃精切片在60℃烘干箱內(nèi)烘至恒重。楤木洗凈，取皮同樣在60℃烘干箱內(nèi)烘至恒重。將四葉參、黃精、楤木先后置中草藥粉碎機內(nèi)粉碎至15目。

2.2.2 四葉參、黃精、楤木浸提液的制備

原料浸泡：分別稱取加工好的四葉參180g、黃精90g、楤木30g，共計300g。（所占比例分別為60%、30%、10%）按照料水比為1:20的比例加水6 000ml放入3個2 000ml的燒杯內(nèi)，混合浸泡8h。

提?。簩⑸鲜鼋莸乃幬镏梦⒉t內(nèi)，微波處理12min。

離心：將上述微波處理物置于離心機內(nèi)，設(shè)轉(zhuǎn)速為4 000r/min，離心15min，離心后留取上清液。殘渣用1 000ml酒精浸泡，用同樣的方法提取，離心，所得上清液與之前的混勻。

濃縮：將所得上清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，濃縮至600ml，相當(dāng)于每100ml溶液中含有50g生藥材。

2.2.3 實驗劑量設(shè)置

實驗分為高劑量組和低劑量組。高劑量組，藥物濃度為50%；低劑量組，藥物濃度為25%，同時設(shè)生理鹽水對照組。各組按每天0.4ml/10g（體重）經(jīng)口灌胃，30天后測定各項指標(biāo)。

2.2.4 小鼠負(fù)重游泳試驗

在給藥第30天，灌藥0.5h后，于小鼠尾根部負(fù)荷8%體重的鉛絲，置于水深（30±1）cm，水溫（25±1）℃游泳箱內(nèi)進(jìn)行游，從放入水中開始計時，觀察小鼠游泳至力竭下沉?xí)r（在水下10s不能上?。涗洉r間，這段時間為小鼠的游泳時間。實驗結(jié)果見表1。

表1 主要儀器

表2 主要試劑

2.2.5 肝糖原測定

采用蒽酮法測定，末次給予受試物30min后處死動物，取肝臟，清洗吸干，制備成1.00%肝糖原檢測液；空白管測定管及標(biāo)準(zhǔn)管分別加蒽酮顯色液2.0ml，混勻后置沸水浴中煮5min，冷卻后于波長620nm處比色，測定各管OD值，計算肝糖原含量。

2.2.6 肌糖原測定

采用蒽酮法測定，末次給予受試物30min后處死動物，取腓腸肌，清洗吸干，制備成5.00%肌糖原檢測液；空白管測定管及標(biāo)準(zhǔn)管分別加蒽酮顯色液2.0ml，混勻后置沸水浴中煮5min，冷卻后于波長620nm處比色，測定各管OD值，計算肌糖原含量。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理

由SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，常規(guī)方法計算均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），進(jìn)行t檢驗，確定差異的顯著。

3 研究結(jié)果與分析

3.1 對小鼠負(fù)重游泳時間的影響

經(jīng)計算得小鼠負(fù)重游泳時間數(shù)據(jù)樣本方差齊，因此進(jìn)一步分析。經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30天后，各組動物游泳時間總體上差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)t檢驗分析，高、低劑量小鼠負(fù)重游泳時間都長于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01），特別是低劑量小鼠負(fù)重游泳時間要明顯長于對照組（見表 3）。

表3 抗疲勞中藥對小鼠負(fù)重游泳時間的影響

3.2 對小鼠肝糖原含量的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30d后，各劑量組動物肝糖原含量總體上差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。經(jīng)t檢驗分析，經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30d后，高、低劑量小鼠肝糖原含量顯著高于對照組（P＜0．05），低劑量組與對照組的差異更明顯一些（見表4）。

表4 抗疲勞中藥對小鼠肝糖原含量的影響

3.3 對小鼠肌糖原含量的影響

經(jīng)口給予小鼠不同劑量受試物30天后，經(jīng)t檢驗分析，低劑量小鼠肌糖原含量顯著高于對照組（P＜0.001），而高劑量小鼠肌糖原含量與對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （p>0.05）（見表 5）。

表5 抗疲勞中藥對小鼠肌糖原含量的影響

3.4 實驗分析

運動性疲勞是指機體生理功能不能持續(xù)在特定水平，或不能維持預(yù)期的運動負(fù)荷強度，致使體力和運動耐力下降，造成工作能力和效率的降低，屬于一種復(fù)雜的生理狀態(tài)，主要由體內(nèi)能量消耗過多和尿素氮乳酸等代謝物質(zhì)的累積而導(dǎo)致疲勞［8］。運動性疲勞也與體內(nèi)的糖原（肝糖原和肌糖原）儲備密切相關(guān)。疲勞主要體現(xiàn)為運動耐力下降，而負(fù)重游泳時間則可作為反映運動耐力的重要指標(biāo)［9］。

本研究表明，抗疲勞中藥復(fù)方制劑能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時間，表明其可以有效提高小鼠的運動以及肌肉抗疲勞能力。分析原因可能是，3種中草藥的復(fù)方制劑有效的增加了小鼠體內(nèi)的糖原儲備，糖原儲備的提高可有效的增加運動時的血糖水平，一定程度上提高運動能力，延緩疲勞的發(fā)生。

此外，本實驗研究結(jié)果顯示在高劑量和低劑量水平上，受試組小鼠游泳時間顯著延長，肝糖原和肌糖原水平顯著升高，且低劑量組升高最為顯著。分析原因可能是中藥復(fù)方制劑富含多種糖類物質(zhì)如淀粉、氨基酸、多糖等。作為外源性糖類物質(zhì)，促進(jìn)了糖原的合成，使糖原含量有所增加。而且楤木中所含有的皂甙是人參的3倍，人參皂貳可以提高乳酸脫氫酶的活性，加速糖異生的生成，增強機體對葡萄糖的攝取和利用。體力活動時，葡萄糖為骨骼肌主要能量來源，糖原的儲備量直接影響機體的運動能力。當(dāng)耐力運動中消耗大量能量時，肝糖原首先分解入血，輸送到肌肉中提供能量并維持血糖正常水平，避免低血糖引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)疲勞感［10］。另外肌糖原的酵解作用是糖類供給能量的另一種方式。當(dāng)機體突然需要大量能量，而又供氧不足（如劇烈運動時），則糖原的酵解作用能暫時滿足能量消耗的需要，糖原的含量能間接說明疲勞發(fā)生的快慢或程度。本實驗結(jié)果顯示：服用中藥復(fù)方制劑能顯著增加小鼠肝糖原和肌糖原含量，提高機體運動能力，延緩運動性疲勞的發(fā)生。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式，在劇烈運動消耗大量血糖時，肌糖原分解供能，肌糖原不能直接分解成葡萄糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸，經(jīng)血液循環(huán)到肝臟，再在肝臟內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚍纸獬善咸烟牵?1］。本實驗結(jié)果顯示：高劑量組小鼠肌糖原含量沒有低劑量組高，且與生理鹽水對照組并無統(tǒng)計學(xué)差異。這說明該中藥復(fù)方制劑必須在一定的劑量范圍內(nèi)使用才能收到良好的效果。負(fù)重游泳試驗陽性以及2項生化指標(biāo)如肝糖原和肌糖原含量為陽性，即可判定受試物具有抗疲勞活性。

因此，本次實驗研究結(jié)果表明：抗疲勞中藥復(fù)方制劑具有明顯的抗疲勞作用，主要通過提高機體對運動負(fù)荷的適應(yīng)能力，提高運動耐力和減少代謝廢物產(chǎn)生的途徑來實現(xiàn)的。對該藥物能否應(yīng)用到人體，還有待進(jìn)一步的實驗研究。

4 小結(jié)

泰山四葉參、黃精、楤木都是泰山的名貴藥材。泰山四葉參的主要功效為補虛通乳、排膿解毒、舒筋活血、健身補氣等作用；泰山黃精是一種傳統(tǒng)的名貴中藥，具有抗疲勞、抗衰老、降血糖、抗氧化等作用；楤木所含有的皂甙是人參的3倍，其藥理作用和使用價值都相當(dāng)可觀。這3種中草藥制成的復(fù)方制劑對小鼠的抗疲勞作用都有顯著功效，一方面，該中藥復(fù)方制劑的有效成分富含多種糖類物質(zhì)，如淀粉、氨基酸、多糖等，為小鼠的耐力性運動提供了必要的糖原補充；另一方面，該抗疲勞中藥復(fù)方制劑使糖異生途徑相關(guān)酶免受自由基損傷，加強糖異的代謝途徑，從而抑制肝糖原、肌糖原和血糖含量的下降。

泰山四葉參、黃精、楤木浸提液能有效防止小鼠肝糖原、肌糖原在運動中的過度利用和促進(jìn)肝糖原、肌糖原的恢復(fù)。本次實驗研究表明：該中藥復(fù)方制劑具有顯著抗疲勞的藥理作用，且低劑量的中藥復(fù)方制劑更有助于緩解小鼠的運動性疲勞，但是關(guān)于該藥的不同劑量對抗疲勞的作用機制及能否制成中藥方劑用于人類尚待進(jìn)一步的實驗研究。

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