徐擁軍

吸煙對(duì)牙周炎治療前后齦溝液中彈性蛋白酶水平變化的影響探討

徐擁軍

目的 探究吸煙對(duì)牙周炎治療前后齦溝液中彈性蛋白酶水平變化的影響。方法 隨機(jī)選取慢性牙周炎患者41例，探診出血146個(gè)，CAL≥2mm，PD≥4mm的牙周炎位點(diǎn)，將其分為非吸煙組（n=19）和吸煙組（n=22）。觀察治療前后2組牙周臨床指標(biāo)，包括GI、CAL、PLI和BOP，以及齦溝液EA-s和EA-p等的變化情況。結(jié)果 治療前，在GI、EA-s水平上，吸煙組為（1.23±0.29）、（0.43±0.35）顯著低于非吸煙組（1.59±0.36）、（1.03±0.93）（P＜0.05），而治療后，2組水平均有所下降，吸煙組為（0.68±0.31）、（0.27±0.05），非吸煙組為（0.86±0.52）、（0.05±0.03），組間比較，BOP、GI和PLI等指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而非吸煙組在EA-p、EA-s指標(biāo)上均顯著低于吸煙組（P＜0.05）。治療前后2組患者CAL、PD差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均無(wú)顯著改善（P＜0.05）。結(jié)論 對(duì)于吸煙的牙周炎患者來(lái)說(shuō)，齦溝液中的EA-s水平低，與非吸煙組相比，EA-p水平與吸煙組相比差異不大。治療后，在EA-s、EA-p指標(biāo)上，非吸煙組水平更低，分析認(rèn)為與牙周炎的治療效果差存在一定的關(guān)系。

吸煙；牙周炎；齦溝液；彈性蛋白酶；水平變化

齦溝液中的彈性蛋白酶（EA）屬于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶，這種蛋白酶多來(lái)源于中性多形核白細(xì)胞（polymorphonuclear leukocyte,PMN）[1]。這種蛋白酶對(duì)牙周結(jié)締組織和骨組織的破壞較大，對(duì)牙周病變產(chǎn)生很大的影響，在判斷牙周情況以及未來(lái)是否附著喪失有重要的作用。齦溝液中的一部分被釋放，包括

2種物質(zhì)，一種是elastase in supernatant（EA-s），另一種是elastaseinthepellet（EA-p）[2]。在病情發(fā)展中，吸煙是一種危險(xiǎn)因素。本研究選取41例牙周病患者，探究吸煙對(duì)牙周炎治療前后齦溝液中彈性蛋白酶水平變化的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2012年10月～2013年10月在九江市第一人民醫(yī)院牙周科就診的慢性牙周炎22例，均為男性，吸煙量≥10支/d,吸煙史≥10年,年齡32～65歲,平均年齡（49.5±20.3）歲。隨機(jī)選取疑似不吸煙慢性牙周炎患者19例，皆男性，年齡31～62歲,平均年齡（51.8±9.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為：探診出血；PD≥4mm,臨床附著喪失（clinical attachmentloss）≥2mm；X線示牙槽骨存在各種吸收活動(dòng)期磨牙，每顆牙選取1～2個(gè)位點(diǎn),總146個(gè)位點(diǎn)。其中，吸煙組的位點(diǎn)79個(gè),非吸煙組的位點(diǎn)67個(gè)。本研究納入的41例患者6個(gè)月內(nèi)均未接受牙周病局部治療,30d內(nèi)未用抗生素、NSAID或其他影響白細(xì)胞藥物,且患者無(wú)任何系統(tǒng)性疾病。

1.2 齦溝液標(biāo)本采集 初診檢查時(shí)，客觀記錄PLI，將預(yù)先稱重的Whatman 3#濾紙條插入牙周袋內(nèi)，遇輕阻力后停止，30s后取出，密封于Eppendorf管[3]中。完成后再次稱重，貯存于-70℃環(huán)境中。取樣后，檢查記錄牙周袋深度PD、GI、BOP和臨床附著喪失（CAL）。牙周基礎(chǔ)治療30d后，檢查采集的齦溝液標(biāo)本。

1.3 檢測(cè)EA-s與EA-p水平

1.3.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 采集6例患者25份齦溝液樣本，貯存于-70℃環(huán)境中。在測(cè)定樣本時(shí)，加溫，加入5mol/L，不含有pH 7.4的Tris-HCL緩沖液，在4℃環(huán)境中，用10000r/min[4]離心提取上清液，之后用緩沖液系列進(jìn)行稀釋。稀釋完成后，取15μL稀釋混合液加入96孔板標(biāo)準(zhǔn)孔中，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 準(zhǔn)備樣本液 樣本取出后，在室溫下解凍，并加入Tris-HCL緩沖液，通過(guò)離心來(lái)提取，在EA-s測(cè)定時(shí)使用上清液。而在齦溝液沉淀物Eppendorf管中，摻入0.1% Tween的Tris-HCL緩沖液[5],用于EA-p的測(cè)定。

1.3.3 測(cè)定EA活性 取15μL測(cè)定樣本,摻入96孔板上設(shè)定的復(fù)孔和樣本孔，將不含有Tween的Tris-HCL緩沖液加入對(duì)照孔，共15μL,并加入100μL的底物溶液，置于37℃的溫箱中2h，在405nm波長(zhǎng)下，采用TECAN-SUNRISE[6]測(cè)定吸光度，客觀記錄Abs/位點(diǎn)。治療前后，1例患者在同一塊96孔板上進(jìn)行測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 上述數(shù)據(jù)資料采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件來(lái)處理，各項(xiàng)指標(biāo)均以牙位點(diǎn)為單位，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。2組EA-p與EA-s水平的比較采用符號(hào)秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床指標(biāo) 治療前，2組患者的GI、CAL差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但2組PD差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而治療后，2組的PLI、BOP和GI均顯著改善（P＜0.05），表明患者口腔衛(wèi)生改善，而CAL、PD無(wú)明顯改善。2組患者PD、GI、PLI等相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 治療前后吸煙組與非吸煙組相關(guān)指標(biāo)的對(duì)比（x±s）

2.2 EA-p與EA-s水平 治療前，吸煙組EA-s、EA-p低于非吸煙組，EA-s數(shù)量和濃度方面2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但EA-p2組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，吸煙組EA-s以及非吸煙組的EA-p、EA-s均顯著下降（P＜0.05）。組間相比，非吸煙組EA-s、EA-p均顯著低于吸煙組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2組患者治療前后EA-s與EA-p對(duì)比（x±s）

3 討論

彈性蛋白酶能夠?qū)墙M織與牙周結(jié)締組織造成破壞，加速牙周病病情的發(fā)展過(guò)程，在牙周病的判斷中具有良好的價(jià)值。齦溝液中所含的彈性彈性蛋白酶主要源于中性多形核白細(xì)胞，吸煙嚴(yán)重影響牙周病的發(fā)生，但發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能與吸煙后患者的防御反應(yīng)發(fā)生變化相關(guān)。在未治療的患者中，非吸煙患者的癥狀比吸煙患者明顯，BOP、GI等指標(biāo)水平較高。由于煙草中的尼古丁對(duì)牙齦微循環(huán)有較大影響，可導(dǎo)致牙齦血管血流量減少[7]。本研究認(rèn)為，吸煙患者牙周組織的情況更差，可抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，與牙周炎的臨床癥狀相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)30d治療后，2組患者的EA-s與EA-p水平均有下降，非吸煙組EA水平下降更為明顯；而治療后，吸煙組的EA-s與EA-p水平均高于非吸煙組，分析認(rèn)為，此與吸煙患者牙周炎治療效果差有關(guān)。治療后，EA水平升高表示牙周破壞復(fù)發(fā)可能性大。但應(yīng)注意，吸煙對(duì)EA水平的影響一般可逆。另外一些研究認(rèn)為，吸煙與非吸煙患者EA水平相差小，表明患者戒煙后，預(yù)后良好，與陳建洪等[8]的研究結(jié)果相差不大。

綜上所述，吸煙對(duì)牙周炎患者齦溝液中的EA-s水平影響較大，但對(duì)EA-p的水平影響卻較小。對(duì)比治療前后的檢測(cè)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，與吸煙患者相比，非吸煙患者治療后的EA-p、EA-s水平更低。

[1] 孫穎，徐燕，孫偉斌.吸煙對(duì)牙周炎治療前后齦溝液中彈性蛋白酶水平變化的影響[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2010,22（6）：635-636.

[2] 王曉，張衛(wèi)東.吸煙對(duì)牙齦炎治療前后齦溝液中彈性蛋白酶水平的影響[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2012,23（12）：713-714.

[3] 馬夏龍，張偉.吸煙對(duì)牙周炎患者齦溝液中彈性蛋白酶水平的影響[J].口腔醫(yī)學(xué)，2011,27（1）：18-19.

[4] 王宏巖,潘亞萍.慢性牙周炎患者IL-8和彈性蛋白酶水平的研究[J].口腔醫(yī)學(xué)研究,2007,23(1):1-3.

[5] 王新革,招惠珍,黃紀(jì)美,等.氧化鋯全瓷冠對(duì)齦溝液分泌量及白細(xì)胞介素1β水平的影響[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2013,19（6）:98-99.

[6] 莫其農(nóng),薛明惠,張愛(ài)芳,等.鹽酸米諾環(huán)素緩釋劑對(duì)慢性牙周炎齦溝液彈性蛋白酶水平的影響[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,34（7）:404-406.

[7] 鄒碧,鄒萍,賀海萍.中藥清熱消炎固齒緩釋劑對(duì)慢性牙周炎齦溝液中彈性蛋白酶水平的影響研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,20（5）:545-547.

[8] 陳建洪,李亞靜,梁煥友,等.吸煙和非吸煙慢性牙周炎患者基礎(chǔ)治療后齦溝液肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平的變化[J].中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版),2010,42（1）:50-55.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.27.029

江西 332000 九江市第一人民醫(yī)院 （徐擁軍）