顏衛(wèi)　趙莎莎　劉靜等

摘要：對(duì)江蘇省泰州地區(qū)寵物犬樣品進(jìn)行沙門氏菌、彎曲菌、分枝桿菌和布魯氏菌的分離鑒定，結(jié)果顯示，肛拭樣品、犬糧中沙門氏菌檢出率分別為1.91%、2.23%，空腸彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌的陽性率分別為4.69%、1.23%，分枝桿菌ESAT-6、CFP-10的基因檢出率分別為25.18%、18.09%；其余基因檢出率較低，RBT檢出粗糙型布魯氏菌感染犬的陽性率為2.01%。

關(guān)鍵詞：寵物；人獸共患細(xì)菌病；流行現(xiàn)狀；防控

中圖分類號(hào)： S855.99 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）03-0198-02

隨著人們生活水平不斷提高，人與動(dòng)物的關(guān)系越來越密切，許多人將各種小動(dòng)物，尤其是犬作為寵物飼養(yǎng)。但是由于缺乏正確的飼養(yǎng)管理和預(yù)防疫病的知識(shí)，寵物人獸共患病的發(fā)病率也日漸增高。引起人致病的寵物重要人獸共患細(xì)菌病包括沙門氏菌、彎曲菌、結(jié)核分枝桿菌、布魯氏菌等。沙門氏菌感染犬、貓、家禽、爬行動(dòng)物較常見，人類接觸糞便中含有大量沙門菌的動(dòng)物會(huì)增加患病的概率。彎曲菌是全球范圍內(nèi)主要的人獸共患性腸道病菌之一[1]，它是包括犬、貓?jiān)趦?nèi)的許多野生、家養(yǎng)動(dòng)物的正常寄生菌，動(dòng)物感染后通常無明顯病癥，但可長(zhǎng)期向外排菌，從而污染食物和飲水，引起人類感染[1]。犬的結(jié)核病主要由人型和牛型分枝桿菌造成，多為亞臨床表現(xiàn)，易與其他呼吸道疾病混淆。已知的布魯氏菌宿主包括家畜、家禽、野生動(dòng)物在內(nèi)的60多種動(dòng)物，能夠通過犬、鹿等寵物傳染給人[2]；大多數(shù)犬呈隱性感染，主要表現(xiàn)為生殖器官發(fā)炎，可引起流產(chǎn)和各種組織的局部病灶；人主要因?yàn)槭橙氡晃廴镜娜饣蛱幚聿剪斒暇腥径鹆鳟a(chǎn)和分娩的犬而感染。本研究對(duì)江蘇省泰州地區(qū)的寵物犬樣品進(jìn)行病原菌的分離鑒定，旨在了解寵物犬中重要人獸共患細(xì)菌病的流行狀況，為有效防控疾病提供參考資料，具有公共衛(wèi)生學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2011年10月至2013年10月，從江蘇泰州7家寵物醫(yī)院就診病犬和2個(gè)寵物犬養(yǎng)殖場(chǎng)的健康犬中采集肛拭樣品682份，從15家寵物店采集179份犬糧樣品進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)；對(duì)從寵物醫(yī)院收集就診的405份糞便樣品進(jìn)行彎曲菌檢測(cè)；采集282份犬、貓鼻液、尿液及飼料樣品進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)；采集348份血清樣品進(jìn)行布魯氏菌血清學(xué)檢測(cè)。

1.2 樣品的分離培養(yǎng)和鑒定

按照GB 4789.4—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》[3]及何曉青主編的《衛(wèi)生防疫細(xì)菌檢驗(yàn)》[4]中的相關(guān)章節(jié)進(jìn)行沙門氏菌的培養(yǎng)、分離和鑒定。應(yīng)用多重PCR方法[5]結(jié)合常規(guī)分離方法對(duì)采集的寵物樣品進(jìn)行彎曲菌的流行狀況分析。采用組織消化液提取法提取鼻拭子和尿液樣本基因組DNA，擴(kuò)增16S rRNA、IS6110、Rv3878、IS1081、ESAT-6、CFP-10基因[6]。參考國(guó)標(biāo)《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)（rose-bengal plate agglutination test，RBT），包括粗糙型RBT和光滑型RBT；以及試管凝集試驗(yàn)（standard tube agglutination test，SAT），包括粗糙型SAT和光滑型SAT。

1.3 培養(yǎng)基與試劑

增菌、分離、鑒定用的培養(yǎng)基由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供；彎曲菌培養(yǎng)基CCDA瓊脂購自O(shè)XOID公司；Taq酶、buffer、dNTPs、marker購自北京天根生物工程公司；布魯氏菌平板凝集抗原、試管凝集抗原及犬布魯氏病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所生產(chǎn)；常規(guī)試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 結(jié)果與分析

2.1 寵物犬?dāng)y帶沙門氏菌的情況

對(duì)861份樣品進(jìn)行檢測(cè)，共分離到沙門氏菌17株，其中7家寵物醫(yī)院和2個(gè)寵物犬養(yǎng)殖場(chǎng)被檢犬肛拭子樣品共計(jì)682份，檢出沙門氏菌陽性樣品13份，陽性率為1.91%；15家寵物店被檢犬糧樣品共計(jì)179份，檢出沙門氏菌陽性樣品4份，陽性率為2.23%。

2.2 寵物群體中彎曲菌的流行病學(xué)分析

由表1可知，在寵物醫(yī)院收集的405份糞便樣品中，19份檢出空腸彎曲菌陽性，陽性率為4.69%，5份檢出結(jié)腸彎曲菌陽性，陽性率為1.23%。將收集的寵物犬樣品按年齡分類，在229份幼年犬樣品中，17份為空腸彎曲菌陽性，陽性率為7.42%，4份為結(jié)腸彎曲菌陽性，陽性率為1.75%；176份成年犬樣品中，2份為空腸彎曲菌陽性，陽性率為1.14%，1份為結(jié)腸彎曲菌陽性，陽性率為0.57%。進(jìn)一步比較可知，幼年犬空腸彎曲菌的檢測(cè)率極顯著高于成年犬（P<001）。將收集的寵物犬樣品按城區(qū)、郊區(qū)的飼養(yǎng)地區(qū)分類，城區(qū)312份樣品樣品中，6份為空腸彎曲菌陽性，陽性率為1.92%，1份為結(jié)腸彎曲菌陽性，陽性率為0.32%；郊區(qū)93份樣品中，13份為空腸彎曲菌陽性，陽性率為13.98%，4份為結(jié)腸彎曲菌陽性，陽性率為4.30%。進(jìn)一步比較可知，郊區(qū)樣本中空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的檢出率極顯著高于城區(qū)（P<0.01）。

2.4 布魯氏菌血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

對(duì)采集的348份血清樣品進(jìn)行布魯氏病抗體檢測(cè)，分別用粗糙型、光滑型抗原RBT初檢，對(duì)陽性血清進(jìn)行SAT。結(jié)果RBT檢出粗糙型布魯氏菌感染犬的血樣7份，占檢測(cè)總樣品數(shù)的2.01%，SAT檢出粗糙型布魯氏菌感染犬的血樣4份，占檢測(cè)總樣品數(shù)的1.15%。本試驗(yàn)調(diào)查的犬樣年齡階段分布較廣，不同年齡犬對(duì)布魯氏菌的感染率見表3；性別比率為公犬58%、母犬42%，不同性別犬的調(diào)查結(jié)果見表4。

3 結(jié)論

隨著人們生活水平的不斷提高，飼養(yǎng)寵物的人越來越多，而相關(guān)的飼養(yǎng)規(guī)范和疾病預(yù)防措施的缺失以及不到位導(dǎo)致寵物發(fā)病率日漸增高，加速了動(dòng)物病原向人類傳播的速度。犬感染沙門氏菌的途徑很多，可能通過進(jìn)食被污染的水、飼料或其他食物感染，也可經(jīng)過傷口感染，甚至是可能由人感染后將細(xì)菌傳染給犬，引起犬和人共同發(fā)病，從而形成循環(huán)感染。本研究采集的肛拭樣品中，沙門氏菌檢出率為1.91%，健康犬可能曾被沙門氏菌隱性感染而未發(fā)病，或曾感染發(fā)病后成為帶菌者不斷向外排菌，對(duì)于長(zhǎng)期與犬密切接觸的主人是很大的威脅。犬糧的沙門氏菌陽性檢出率為223%，沙門氏菌在原料選擇、生產(chǎn)加工、運(yùn)輸儲(chǔ)藏以及銷售過程中都有可能污染犬糧，因此加強(qiáng)對(duì)飼料中沙門氏菌污染的控制不僅可以減少犬發(fā)病，也是減少人感染沙門氏菌的一項(xiàng)重要措施。

本研究采集的糞便樣品中空腸彎曲菌陽性率為4.69%，結(jié)腸彎曲菌陽性率為1.23%。幼犬?dāng)y帶彎曲菌的陽性率要高于成年犬，這可能與抵抗力、身體狀況及抗體水平有關(guān)。郊區(qū)飼養(yǎng)犬彎曲菌的陽性率要高于城區(qū)飼養(yǎng)犬，這可能與飼養(yǎng)環(huán)境、膳食結(jié)構(gòu)有關(guān)，因?yàn)榻紖^(qū)飼養(yǎng)犬有與其他家禽、家畜接觸的機(jī)會(huì)，可通過糞口傳播交叉感染，此外郊區(qū)犬的疫病防治比率低于城區(qū)也是一個(gè)重要的方面。

分枝桿菌的檢測(cè)結(jié)果顯示，針對(duì)ESAT-6、CFP-10基因，從寵物醫(yī)院采集的有病癥樣本的檢出率遠(yuǎn)高于健康犬、貓樣本，此外在寵物糧中存在率也較高。ESAT-6、CFP-10基因除了存在于所有致病性結(jié)核分枝桿菌中，還存在于幾種非結(jié)核分枝桿菌中，由此可見，被檢的患病犬、貓極有可能受到非結(jié)核分枝桿菌的廣泛感染。

布魯氏菌血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，泰州地區(qū)犬布魯氏病的陽性率為2.01%，陽性犬感染的病原體主要是粗糙型。各年齡段的犬均存在布魯氏菌感染，主要由于幼犬在3月齡左右，體質(zhì)較差且是交易的高峰期，傳染源主要來源于母犬、養(yǎng)殖場(chǎng)和交易中心等，12月齡左右是犬發(fā)情期，配種感染的可能性較大，12～24月齡和24～36月齡也是犬繁殖盛期，帶菌配種交叉感染、垂直感染的風(fēng)險(xiǎn)較大。

針對(duì)江蘇省泰州地區(qū)寵物人獸共患病的流行現(xiàn)狀，應(yīng)加強(qiáng)防控措施研究，進(jìn)一步建立和健全寵物管理的法律法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)體系[7]，逐步實(shí)施系統(tǒng)性管理措施如寵物電子戶口、強(qiáng)制定點(diǎn)免疫、流浪寵物收容、定期科普教育等；應(yīng)積極開展寵物細(xì)菌病病原生態(tài)學(xué)、流行病學(xué)、新型疫苗及其他生物防治制品等研究；此外，還應(yīng)開展寵物病原細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)工作，規(guī)范使用抗生素，積極開展抗生素替代品研究與應(yīng)用?？偟膩碚f，完善寵物細(xì)菌病的報(bào)告、監(jiān)測(cè)與溯源體系，可以更加有效地預(yù)防和控制人類疾病[8]。

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