韓 瑋 張嘉川 唐 暉 張 敏 李常蘭 任素萍 焦章平 于 群

1.北京市公安局豐臺分局物證鑒定所，北京 100072；2.北京市公安局法醫(yī)檢驗鑒定中心，北京 100192；3.北京市公安局東城分局物證鑒定所，北京 100036；4.軍事醫(yī)學科學院野戰(zhàn)輸血研究所，北京 100850

尸冷是指機體死亡后，由于組織細胞產(chǎn)熱過程逐漸減弱或停止，當環(huán)境溫度低于體溫時，尸體熱量不斷散失，尸體溫度逐漸下降，并與環(huán)境溫度達到平衡的過程[1]。在一定的溫度范圍內，紅細胞ATP含量與保存時間具有直線相關性，可以作為死亡時間推斷的一種客觀參數(shù)[2]。本研究在體外模擬尸體降溫過程并觀察紅細胞ATP含量的變化特點，以期探討尸體降溫過程對死亡時間推斷的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康捐血者12名，均為來自北京市公安局豐臺分局的志愿者，男、女各6名，無血液疾病或代謝性疾病，年齡25～40歲，嚴格依照無菌操作規(guī)程，2010年3月由執(zhí)業(yè)護士用EDTA真空采血管各采集全血40 mL。

1.2 方法

1.2.1 血樣保存 將全血搖勻后，即刻將各個血樣以每份500 μL分裝到EP管中，而后置于可調式恒溫水浴箱保存，初始溫度為37℃，此后每1小時調節(jié)水浴溫度下降1℃，10 h后每1小時調節(jié)水浴溫度下降0.5℃，24 h水浴溫度降至20℃后不再調節(jié)，維持恒定。分別在 0、2、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48 h 取血樣（500 μL 裝 EP 管 1 只）待檢。

1.2.2 血紅蛋白含量測定 將血樣搖勻，然后將EP管放入Sysmex-Poch-100i血液分析儀（SYSMEX公司，日本）樣品槽中，測定血紅蛋白濃度（g/L）并記錄。

1.2.3 紅細胞ATP待檢標本處理 取40 μL血樣加入裝有1000 μL等滲PBS緩沖液的EP管中，搖勻，置于干熱器中100℃加熱10 min，自然冷卻后13 000 r/min離心3 min，取上清液即為ATP待檢標本。

1.2.4 ATP含量測定 采用改良后生物發(fā)光法[3]，全部試劑為中國科學院上海植物生理研究所生產(chǎn)。

1.2.5 紅細胞ATP含量計算 紅細胞ATP含量（μmol/gHb）=26×樣本ATP濃度值/血紅蛋白濃度值。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SAS 9.2統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，分別取0～48 h（全程）、0～24 h（降溫段）、24～48 h（恒溫段）3個時間段對紅細胞ATP含量（[ATP]）和保存時間（PMI）進行線性回歸分析，并進行Pearson相關分析；根據(jù)不同時間段的回歸方程進行殘差（偏離時間）計算并就同一時間點進行成對t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 紅細胞ATP含量及保存溫度隨保存時間的變化

從表1、圖1可以看出，紅細胞ATP含量隨保存時間的延長呈下降趨勢。

2.2 全程和分段計算平均偏離時間的比較

數(shù)據(jù)經(jīng)SAS 9.2統(tǒng)計軟件的Pearson相關分析方法分析，其線性回歸分析結果見表2。Pearson相關分析顯示，紅細胞ATP含量與保存時間呈負相關（r均為負值），3個時間段（全程、降溫段、恒溫段）相關分析結果顯示，ATP含量與死亡時間的相關性具有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.01），但各時間段決定系數(shù)（r2）差距較大，分別為 0.898、0.940和 0.982。

以各指標原始數(shù)據(jù)分別代入3個方程，計算殘差（估計保存時間與實際保存時間之差），同一時間點上12個殘差絕對值的均值為各時間點推測的平均偏離時間，全程和分段計算平均偏離時間的比較見表3。各時間點上全程計算的平均偏離時間均顯著高于分段計算值（P＜0.01），二者總體平均值分別為6.86 h和3.47 h。

表1 紅細胞ATP含量及保存溫度隨保存時間的變化

圖1 紅細胞ATP含量及保存溫度隨保存時間的變化

表2 不同時間段紅細胞ATP含量與保存時間的線性回歸分析

3 討論

死亡時間（PMI）的推斷，一直以來是法醫(yī)病理學研究的熱點、難點問題。從經(jīng)典的利用尸體現(xiàn)象（如尸冷、尸斑、尸僵、超生反應等）、胃內容物的消化程度、尸食性昆蟲的發(fā)展規(guī)律來推斷，到生物化學、分子生物學、組織化學等方法的應用，早期死亡時間推斷的研究取得了巨大進展[4-8]。尸溫、尸僵等與死亡時間的關系不乏報道[9-13]，但是，在諸多研究報道中，均未見對尸體降溫過程中代謝指標變化特點的觀察和報道。

人體內任何物質代謝都要受到酶的影響，由于失去自身調控各種酶功能的能力，使各種酶解反應在尸體所處的環(huán)境溫度下進行[14]。通常酶的作用速度隨溫度升高而加速，一般地說，溫度每升高10℃，反應速度大約增加1倍；但溫度超過一定數(shù)值后，酶受熱變性的因素占優(yōu)勢，反應速度反而隨溫度上升而減緩，形成倒“V”形或倒“U”形曲線；在此曲線頂點所代表的溫度，反應速度最大，稱為酶的最適溫度。從動物組織提取的酶，其最適溫度多在35～40℃之間，因此，隨著尸體溫度的下降，酶的作用速度必然隨之下降。同時，雖然不同環(huán)境、個體因素下尸體降溫速度不同，但大多情況下尸體降溫是一個持續(xù)漸進的過程。因此，任何代謝類指標的變化均會不同程度地受到尸體降溫過程的影響。

表3 全程計算和分段計算平均偏離時間的比較（h）

據(jù)報道，人體的正常體溫，是由體內產(chǎn)熱散熱而保持動態(tài)穩(wěn)定的，一般在37℃左右[15-16]；因此，假設受害者死亡時的體溫是37.0℃是完全合理的。尸體降溫過程報道不一，肌肉組織和環(huán)境的溫度對尸體溫度影響很大。在一般情況下，兒童和老年人的尸體冷卻快，青壯年較慢。胖人的尸溫比瘦子的尸溫降低得慢；溫暖室內的尸溫比寒冷室外的尸溫冷得慢；慢性消耗性疾病、大出血、溺死、大面積燒傷死者的尸體冷卻速度快，而猝死、機械性窒息死、一氧化碳中毒死的尸體冷卻速度就要慢些；同時，尸體體溫的變化與體溫與室溫的溫差成正比；較平均的說法是尸體的溫度大約每小時會下降1℃。筆者向資深法醫(yī)病理學專家請教，獲知春秋季室內環(huán)境下，較為平均的水平是尸體前10 h約1 h下降1℃，10 h后1 h約下降0.5℃，至尸溫平衡總計約經(jīng)過24 h。筆者據(jù)此設計了模擬降溫方案。

結果表1、圖1均顯示降溫段紅細胞ATP下降速度明顯高于恒溫段，表2中降溫段回歸方程斜率（0.068）遠高于恒溫段（0.019）佐證了這一事實。表2還顯示，全程或分段統(tǒng)計紅細胞ATP含量變化均具有與死亡時間直線相關性，且相關性具有統(tǒng)計學意義，但全程計算的決定系數(shù)（r2）低于分段（降溫段和恒溫段）計算下的r2值，說明全程回歸方程的參考價值亦低于分段計算的回歸方程。表3顯示，全程計算的平均偏離時間顯著高于分段計算的平均偏離時間，進一步說明尸體降溫過程對死亡時間推斷有明顯影響，應將尸體降溫過程作為一個獨立的階段進行研究。王成祥等[17]報道，研制出腦溫死亡時間測定儀，可對進一步研究尸體降溫過程提供幫助。

本研究通過模擬尸體降溫過程觀測紅細胞ATP含量的變化趨勢，證實尸體降溫過程對死亡時間推斷有明顯影響，說明在利用紅細胞ATP含量（亦包括其它多種代謝性指標）這一參數(shù)推斷PMI時，應注重掌握尸體降溫過程中代謝指標的變化特點，并分別根據(jù)降溫段（尸冷過程）和恒溫段（尸溫與環(huán)境溫度平衡）的變化特點進行推斷。同時，本文中模擬尸體降溫過程僅是較平均化的一種模型，由于尸體降溫過程的影響因素很多，因此不同環(huán)境和個體因素下尸體降溫過程必定是形式多樣的，而這正是進一步實驗應關注的。

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