郭潔汝，朱 雯，李承昊，尹 飛，張光偉，陶 璨，周 藝

(第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)員旅14營(yíng)，重慶 400038)

大鼠是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用于藥物學(xué)，心血管疾病，腫瘤學(xué)，營(yíng)養(yǎng)學(xué)和行為學(xué)等方面的研究［1］。在這些實(shí)驗(yàn)中對(duì)清醒大鼠的固定是后續(xù)一系列操作(例如注射，采血)的前提條件。傳統(tǒng)上對(duì)清醒大鼠的固定方法主要是手抓法或使用卵圓鉗固定。這些方法存在諸多不足，如容易造成實(shí)驗(yàn)人員被抓傷咬傷以及引起動(dòng)物強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)。已有文獻(xiàn)報(bào)道，大鼠對(duì)外界刺激反應(yīng)敏感，且垂體—腎上腺系統(tǒng)功能發(fā)達(dá)。若大鼠產(chǎn)生強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，激素水平將迅速產(chǎn)生動(dòng)態(tài)變化，直接影響相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性［2］。特別是對(duì)于缺乏動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)的人而言，傳統(tǒng)操作方法的缺陷更加明顯。而現(xiàn)有的一些簡(jiǎn)易自制裝置(例如使用輸液瓶改造的固定裝置等)和市售新型固定裝置(例如有機(jī)玻璃材質(zhì)的筒形大鼠固定器)，雖然也可以有效減少大鼠對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的傷害，但也存在暴露位點(diǎn)少，制作成本高，操作不便等缺點(diǎn)［3-5］。因此，為了改善現(xiàn)有固定裝置和方法，方便相關(guān)教學(xué)和科研工作，我們研制了一種新型的大鼠固定裝置并規(guī)范了其使用方法，并獲得了良好的實(shí)際使用效果。

2 材料和方法

2.1 固定裝置的制作

2.1.1 材料:透明薄塑料膜，塑料封口機(jī)，海綿等。

2.1.2 方法:按下圖1A所示裁剪底邊為48 cm，高為35 cm的等腰梯形的塑料材料。對(duì)折，按圖1B虛線塑封即得成品。海綿如圖2示，嵌入口上為狹縫，下為中空?qǐng)A柱，便于進(jìn)行尾靜脈注射和采血等操作。

A為折疊前，B為塑封示意圖，虛線為塑封線。圖1 固定袋設(shè)計(jì)圖。A.Overview of the plastic bag before folding.B.The sealing of the bag.The dotted line indicates the path for sealing.Fig.1 The design of the holding bag.

2.2 固定裝置的使用方法

1.2.1 固定:一手把袋口撐開置于平地，一手戴著手套輕輕抓住大鼠尾巴中部并提起，使大鼠的前爪接觸袋的下口。由于大鼠具有受刺激后喜鉆洞的特性，在大鼠急欲逃跑時(shí)，放開大鼠尾巴，當(dāng)其頭接近呼吸口時(shí)，在大鼠臀部處用手將袋尾收緊。

1.2.2 腹腔注射:在固定的基礎(chǔ)上，左手捏緊袋口，用拇指與食指固定大鼠的臀部，右手注射，可進(jìn)行麻醉或給藥。

1.2.3 單人尾靜脈注射或采血:在固定的基礎(chǔ)上，用手將海綿模型上端狹縫打開將大鼠的身體從此開口嵌入下端中空?qǐng)A柱中，背部朝上，鼠尾暴露在外，可進(jìn)行尾靜脈注射或采血的操作。

3 結(jié)果

為了與傳統(tǒng)方法進(jìn)行比較，我們邀請(qǐng)了8名從未接觸過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的同學(xué)參與了實(shí)驗(yàn)，使他們分別學(xué)習(xí)傳統(tǒng)手抓法和新型固定裝置的方法固定SD大鼠，對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射，實(shí)驗(yàn)人員在觀看指導(dǎo)老師分別演示后進(jìn)行操作。

3.1 固定試驗(yàn)

由8名同學(xué)對(duì)同一飼養(yǎng)籠中的SD大鼠進(jìn)行固定操作，時(shí)間記錄從實(shí)驗(yàn)人員接觸大鼠尾部中段(準(zhǔn)備從飼養(yǎng)籠中抓出大鼠)開始，到大鼠被安靜地固定，收緊袋尾結(jié)束。8名同學(xué)使用傳統(tǒng)手抓法平均耗時(shí)18.13 s，使用新型固定裝置平均耗時(shí)10.03 s，提高了44.7%。具體記錄見表1。

圖2 海綿模型Fig.2 The model of sponge clip.Animal body can be inserted into the hollow cylinder with proper size

表1 固定大鼠耗時(shí)(n=8)Tab.1 The time-consuming to hold a conscious rat(n=8)

圖3 固定與注射平均時(shí)間的比較Fig.3 The average time-consuming to hold a rat

3.2 腹腔注射試驗(yàn)

由3名從未接觸過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的同學(xué)對(duì)同一飼養(yǎng)籠中的SD大鼠進(jìn)行固定和腹腔注射1 mL生理鹽水的操作。時(shí)間記錄從實(shí)驗(yàn)人員接觸大鼠尾部中段(準(zhǔn)備從飼養(yǎng)籠中抓出大鼠)開始，在注射操作完成時(shí)結(jié)束。3名同學(xué)使用傳統(tǒng)手抓法平均耗時(shí)139.33 s，使用新型固定裝置平均耗時(shí)52.26 s，提高了55.3%。具體記錄見表2:

表2 固定與注射大鼠耗時(shí)(n=3)Tab.2 Time-consuming to hold and inject a conscious rat(n=3)

3.3 統(tǒng)計(jì)結(jié)果對(duì)比

圖3和圖4分別從整體和個(gè)體水平顯示了固定時(shí)間和固定與注射時(shí)間的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。其中使用新型固定裝置法和傳統(tǒng)手抓法在固定操作中差異存在顯著性(P=0.0078);在固定與注射連續(xù)操作中差異存在顯著性(P=0.05)。

4 討論

圖4 固定與注射時(shí)間的個(gè)體比較Fig.4 The individual time-consuming to hold and inject a rat

對(duì)于初次使用大鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的操作者，使用上述新型固定裝置固定大鼠及進(jìn)行后續(xù)操作，能提高操作的成功率，明顯縮短操作時(shí)間，便于后續(xù)操作的順利進(jìn)行并減少大鼠的應(yīng)激反應(yīng)。該方法之所以具有以上優(yōu)越性，與固定袋的材料及形狀設(shè)計(jì)密切相關(guān)。透明塑料材料實(shí)現(xiàn)了可視性，并且有效降低大鼠對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的傷害。塑封線大致呈弧形，使袋的前端縮窄，后端擴(kuò)大。前端縮窄可有效防止大鼠弓背折返，實(shí)現(xiàn)了更好的固定;后端擴(kuò)大有利于大鼠進(jìn)入袋內(nèi)。而弧線的弧度，袋前端呼氣口的大小與大鼠的大小有關(guān)，若袋前端呼氣口過大，體積較小的大鼠容易卡住，不便于操作后釋放大鼠，甚至對(duì)大鼠造成傷害。經(jīng)試驗(yàn)，該大鼠固定裝置適用于90 g～150 g大鼠的固定，適用范圍較廣。

本文中所介紹的固定裝置與傳統(tǒng)方法及市售現(xiàn)有裝置相比，有以下優(yōu)點(diǎn):(1)可以減少人員實(shí)驗(yàn)時(shí)抓取和固定大鼠的危險(xiǎn)。(2)操作簡(jiǎn)便，固定效果好，可視性優(yōu)良，暴露位點(diǎn)多。(3)初學(xué)者容易學(xué)習(xí)和掌握。(4)海綿模型的設(shè)計(jì)有助于對(duì)大鼠進(jìn)行一系列的實(shí)驗(yàn)操作，如單人尾靜脈取血。(5)符合應(yīng)用倫理學(xué)的要求，敬畏生命的倫理要求我們充分考慮到盡可能減輕動(dòng)物所遭遇的痛苦。該裝置可以有效減少大鼠的應(yīng)激反應(yīng)和對(duì)大鼠的傷害，并使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確。(6)與市場(chǎng)上同作用產(chǎn)品相比，該裝置設(shè)計(jì)簡(jiǎn)易，材料便宜且易獲得。(7)可以作為一次性使用的產(chǎn)品并進(jìn)行批量生產(chǎn)。

［1］崔淑芳，陳學(xué)進(jìn).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)(第4版)［M］.上海:第二軍醫(yī)大學(xué)出版社.2013:159-162.

［2］ 鄒移海，徐志偉，黃韌，等.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)(第2版)［M］.北京:科學(xué)出版社.2012:83-86.

［3］劉保新，陳廖斌，汪暉.介紹一種簡(jiǎn)易的大鼠固定裝置［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18(3):75-76.

［4］王凈凈，李振光，鄧元江，等.自制簡(jiǎn)易套筒式大白鼠固定裝置［J］.臨床神經(jīng)電生理學(xué)雜志，2001，10(2):83.

［5］黃月玲，葉炳飛，戴麗軍.一種簡(jiǎn)易大鼠固定裝置的制作和使用方法［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2007，02(22):62-63.