林秀蓮，馬驍勇

(惠州農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣東 惠州516023)

蝴蝶蘭(Phalaenopsis spp.)屬蘭科蝴蝶蘭屬植物，有“蘭中皇后”之美譽(yù)，觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值較高，備受消費者青睞。引進(jìn)臺灣地區(qū)新品種可豐富蝴蝶蘭市場，在引進(jìn)新品種的同時，建立快速繁殖優(yōu)化體系顯得尤為重要?；葜菔薪陼充N的蝴蝶蘭品種包括內(nèi)山姑娘、大辣椒等，這些品種有性繁殖的品系后代易分離，顏色深淺不一，隨著栽培年數(shù)的增加，易發(fā)生顏色淡化等品種退化現(xiàn)象。組織培養(yǎng)技術(shù)可以克服這些問題。從現(xiàn)有文獻(xiàn)資料［1－5］來看，蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)較為成熟，但對生根組培苗馴化移栽研究相對較少，而生根苗的移栽成活率是商品效益高低的關(guān)鍵因素之一［6］，對移栽的基質(zhì)、水分、溫度、濕度等研究尤為重要。本文擬對臺灣引進(jìn)的大紅蝴蝶蘭新品種‘阿里山’進(jìn)行花梗誘導(dǎo)、叢生芽增殖、生根培養(yǎng)等研究，并初步分析了該品種的馴化移栽技術(shù)，以期建立簡便、實用、高效的產(chǎn)業(yè)化蝴蝶蘭繁殖體系，滿足花卉市場需求。

1 材料與方法

1.1 材料

‘阿里山’蝴蝶蘭取自惠州綠湖公司蝴蝶蘭圃，為溫室栽培的2年生優(yōu)良蝴蝶蘭品種。3月份花開過后，剪取生長健壯、無病蟲害的‘阿里山’花梗。選擇天氣晴朗的下午進(jìn)行采樣。

1.2 方法

1.2.1 花梗誘導(dǎo) 將剪下的花梗用洗衣粉浸泡10 min，流水沖洗30 min 左右，置于超凈工作臺，用酒精消毒30 s，升汞消毒8 －10 min，再用無菌水清洗。在1/4MS +0.3 mg·L－1NAA+20%蔗糖+7%瓊脂的培養(yǎng)基上，分別添加2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mg·L－1BA，比較不同BA 濃度對花梗誘導(dǎo)芽的影響。培養(yǎng)基代號分別為Ⅰ1－Ⅰ6，pH 值為5.8，在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。每個處理40 瓶，每瓶接種1個花梗芽，每3 天觀察記錄1 次，14 d 后統(tǒng)計污染率:污染率/% =污染植株總數(shù)/接種總數(shù)×100，30 d 后統(tǒng)計誘導(dǎo)分化率:誘導(dǎo)分化率/% =植株分化總數(shù)/接種總數(shù)×100。

1.2.2 叢生芽增殖 在1/2MS+20%蔗糖+7%瓊脂+200 mL·L－1椰汁的培養(yǎng)基上，分別添加6.0、7.0、8.0 mL·L－1BA 與0.2、0.5、0.8 mL·L－1NAA，比較不同BA、NAA 濃度對叢生芽增殖的影響。培養(yǎng)基代號分別為Ⅱ1－Ⅱ9，pH 值為5.8，在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。每個處理40 瓶，每瓶接2 叢，每5天觀察記錄1 次，40 d 后統(tǒng)計增殖系數(shù):增殖系數(shù)/% =40 d 后叢生芽數(shù)/接種數(shù)×100。

1.2.3 生根培養(yǎng) 以改良1/2KC 為基本培養(yǎng)基，添加30 g·L－1蔗糖、6 g·L－1瓊脂、100 g·L－1香蕉泥，比較0、0.1、0.5、1.0、1.5 mg·L－1NAA 對生根的影響。培養(yǎng)基代號分別為:Ⅲ1－Ⅲ5，pH 值均為5.8，并在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。選取2 cm 以上，有3 片完整葉片的無根苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根。每個處理40 瓶，每瓶接種2 株，每3 天觀察記錄1 次，30 d 后統(tǒng)計生根率。

1.2.4 馴化移栽 將具有3 －4 片葉的‘阿里山’生根組培苗進(jìn)行大棚馴化7、14、21、28 d，以水草為基質(zhì)。每個處理30 株生根組培苗，設(shè)3 次重復(fù)，移栽45 d 后記錄小苗長勢情況。

1.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室、溫室大棚溫度(25 ±2)℃，生根培養(yǎng)與馴化移栽光照3000 lx，其他為暗培養(yǎng)，濕度保持在70%。

2 結(jié)果與分析

2.1 BA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭花梗誘導(dǎo)的影響

‘阿里山’蝴蝶蘭培養(yǎng)25 d 后可見腋芽萌發(fā)(圖1A)。培養(yǎng)14 d 后，測量污染植株總數(shù)及接種總數(shù)，統(tǒng)計‘阿里山’蝴蝶蘭污染率(約90%)，表明常規(guī)的消毒方法基本能夠控制其污染率。培養(yǎng)30 d 后統(tǒng)計其誘導(dǎo)分化率(表1)。由表1 可知，BA 濃度太高或太低均不利于花梗的誘導(dǎo)分化。當(dāng)BA 濃度為4 mg·L－1時，分化率最高，達(dá)82.5%。而過高或者過低的BA 濃度，均導(dǎo)致‘阿里山’蝴蝶蘭分化率下降。

圖1 ‘阿里山’蝴蝶蘭組培過程Fig.1 Tissue culture of P.spp.cv.Ali Mountain

2.2 NAA、BA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭叢生芽增殖的影響

‘阿里山’蝴蝶蘭增殖培養(yǎng)23 d 后陸續(xù)有新芽萌發(fā)(圖1B)。NAA、BA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭增殖系數(shù)影響不同(表2)。由表2 可知，NAA 從0.2 mg·L－1增加到0.8 mg·L－1時，增殖系數(shù)不斷提高。添加0.8 mg·L－1NAA 與7.0 mg·L－1BA 對‘阿里山’蝴蝶蘭叢生芽增殖效果最佳。培養(yǎng)18 d后開始分化，增殖系數(shù)達(dá)306.3%。但隨著BA 濃度的繼續(xù)增加，其增值系數(shù)有下降趨勢，這可能是由于高濃度的分裂素對叢生芽的分化有抑制作用。與此同時，表明NAA 與BA 具有協(xié)同作用。

表1 BA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭花梗誘導(dǎo)的影響Table 1 Effect of BA concentration on pedicel inducing of P.spp.cv.Ali Mountain

表2 NAA、BA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭叢生芽增殖的影響Table 2 Effects of NAA and BA concentrations on proliferation of bud clusters in P.spp.cv.Ali Mountain

2.3 培養(yǎng)基對‘阿里山’蝴蝶蘭生根率的影響

‘阿里山’蝴蝶蘭生根培養(yǎng)26 d 后陸續(xù)有新根長出(圖1C)。NAA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭生根率的影響見表3。由表3 可知，添加1.0 mg·L－1NAA，‘阿里山’蝴蝶蘭生根率最高，在8 d 左右就可見乳白色根系，且苗健壯、根長勢較強(qiáng)，不添加NAA 或者NAA 濃度高于1.0 mg·L－1，其生根率均較低。該結(jié)果與譚鵬鵬等［5］研究結(jié)果相似，表明生長素有助于提高植物生根率，但生長素高于1.0 mg·L－1對‘阿里山’蝴蝶蘭的生根反而有所抑制。

表3 NAA 濃度對‘阿里山’蝴蝶蘭生根率的影響Table 3 Effect of NAA concentration on rooting of P.spp.cv.Ali Mountain

2.4 馴化時間對‘阿里山’蝴蝶蘭組培苗移栽成活率的影響

馴化7、14、21、28 d 后將蝴蝶蘭移栽至水草中，45 d 后記錄移栽成活率。馴化7、14、21、28 d 后，移栽成活株數(shù)分別為19、21、25、28，成活率分別達(dá)63.3%、70.0%、83.3%、93.3%。表明在溫度27 ℃、濕度約60% －70%時，馴化時間越長(28 d)，‘阿里山’蝴蝶蘭組培苗的移栽成活率越高，可達(dá)93.3%。與此同時，試驗用蝴蝶蘭常以水草為栽培基質(zhì)，能夠基本滿足‘阿里山’蝴蝶蘭的生長需求。

3 討論

目前，‘阿里山’蝴蝶蘭尚未在市面上普及，其組培技術(shù)的研究對整個蝴蝶蘭花卉組培有一定的借鑒作用。本研究表明，以1/4MS 為基本培養(yǎng)基的無機(jī)鹽濃度適合‘阿里山’蝴蝶蘭的花梗誘導(dǎo)，同時1/2MS的無機(jī)鹽濃度適合叢生芽的增殖快繁，這與鐘海豐等［7］研究一致。褐化是組織培養(yǎng)過程中常見的現(xiàn)象，也是較難克服的問題之一［8］。蝴蝶蘭的褐變現(xiàn)象在花梗誘導(dǎo)期就出現(xiàn)，生根階段添加香蕉泥能明顯促進(jìn)生根和苗的生長，香蕉泥不僅能緩沖pH 值，還含有天然的植物激素，能促進(jìn)植物根系的形成［9－10］。本試驗中增殖芽苗也不同程度出現(xiàn)了褐變現(xiàn)象，因此在今后的研究中，可通過添加香蕉汁來緩解褐變。

組培苗在無菌、有營養(yǎng)供給、適宜光照、溫度、100%相對濕度環(huán)境中生長［6］，但在馴化移栽過程中，環(huán)境發(fā)生了劇烈變化，如果不能謹(jǐn)慎處理好與環(huán)境因子的關(guān)系，就有可能造成大量死苗，進(jìn)而影響整體經(jīng)濟(jì)效益?！⒗锷健m更喜低溫，因此，調(diào)節(jié)環(huán)境條件，特別是移栽前期的濕度與溫度控制是提高移栽成活率的重要環(huán)節(jié)。

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