趙玉華++劉宇++趙晨瓊++朱寶峰++劉冬

摘要：運(yùn)動(dòng)基因資源作為人類(lèi)遺傳資源的一部分，為優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的選拔提供遺傳證據(jù)。本研究以我國(guó)優(yōu)秀單板滑雪U型場(chǎng)地運(yùn)動(dòng)員為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)轉(zhuǎn)化由B958細(xì)胞培養(yǎng)得到EBV，運(yùn)用懸浮培養(yǎng)法，提取及保存優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員基因組DNA，成功建立了運(yùn)動(dòng)員外周血B細(xì)胞永生細(xì)胞庫(kù)，永久保存了我國(guó)該項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員遺傳資源，為以后該項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)基因的相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)材料，為其它雪上項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的永生細(xì)胞庫(kù)的建立提供了理論支持。

關(guān)鍵詞：?jiǎn)伟寤︰型場(chǎng)地運(yùn)動(dòng)員；永生化；細(xì)胞體外培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào)：G804 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1008-2808（2015） 02-0083-04Abstract：Movement of genetic resources is the part of the human genetic resources， geneticevidence for excellent athletes' selection. This study to our country outstanding athlete snow-boarding halfpipe ground as experimental object， through the transformation from EBV B958cell culture， using the method of suspension culture， extraction and preserve the genomicDNA of excellent athletes， athletes successfully established peripheral B cells immortality li-brary， permanent saved the project the genetic resources of excellent athletes in our country，for the project of excellent athletes sport gene related research provides experimental materi-als， excellent athletes for other snow project of building provides the theoretical support ofthe living cell bank.

Key words：Snowboarding halfpipe athletes； Immortalization， Cells invitro

隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的完成和分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，人們?cè)絹?lái)越重視遺傳資源的保存，特別是人類(lèi)遺傳資源的保存[1]。人類(lèi)遺傳資源是指含有人體基因組、基因及其產(chǎn)物的器官、組織、細(xì)胞、血液、制備物、重組脫氧核糖核酸（DNA）構(gòu)建體等遺傳材料及相關(guān)的信息資料。運(yùn)動(dòng)基因遺傳資源作為人類(lèi)遺傳資源的一部分，為優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的選拔提供遺傳證據(jù)。運(yùn)動(dòng)基因遺傳資源與運(yùn)動(dòng)能力的開(kāi)發(fā)有著密切的聯(lián)系[2]，血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶（ACE）是決定人體有氧耐力素質(zhì)的關(guān)鍵因素之一，影響人體有氧耐力素質(zhì)的最佳水平，同時(shí)影響人體對(duì)耐力訓(xùn)練的敏感度[3]。對(duì)人體生理特性的研究顯示[4]，部分運(yùn)動(dòng)相關(guān)基因如ACTN3基因多態(tài)性與肌肉質(zhì)量和力量相關(guān)聯(lián)，隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的完善，越來(lái)越多的運(yùn)動(dòng)基因被發(fā)現(xiàn)，對(duì)其功能的研究也將更加深入[5]。

運(yùn)動(dòng)員群體有別于普通大眾的群體，優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)基因更是非常珍貴。我國(guó)已經(jīng)采集優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員劉翔和姚明的遺傳資源，即便這些優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員以后退役，科研人員還是可以根據(jù)他們保存下來(lái)的遺傳資源進(jìn)行研究。隨著北京申辦2022年冬奧會(huì)，冬季項(xiàng)目在競(jìng)技體育中地位將顯著提升，更多的科研力量將匯聚于冬季項(xiàng)目的研究。根據(jù)單板滑雪U型場(chǎng)地技巧（以下簡(jiǎn)稱(chēng)U型槽）在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的發(fā)展趨勢(shì)，該項(xiàng)目必然會(huì)成為我國(guó)冬季雪上項(xiàng)目的優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目，尤其該項(xiàng)目現(xiàn)役優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員是這個(gè)項(xiàng)目發(fā)展的第一代運(yùn)動(dòng)員，如蔡雪桐、劉佳宇、李爽、史萬(wàn)成等運(yùn)動(dòng)員先后在世界杯、世錦賽都獲得冠軍，也有望沖擊冬奧會(huì)的獎(jiǎng)牌，將這些運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)基因保存下來(lái)為未來(lái)研究該項(xiàng)目將具有重要意義。本研究將用EBV病毒轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞使之成為永生化細(xì)胞株，建立U型槽運(yùn)動(dòng)員的永生細(xì)胞庫(kù)，保存U型槽優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)基因，為該項(xiàng)目運(yùn)動(dòng)員的基因選材，運(yùn)動(dòng)能力的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)和現(xiàn)實(shí)依據(jù)，為我國(guó)其它雪上項(xiàng)目運(yùn)動(dòng)員保存和建立永生化細(xì)胞提供理論技術(shù)基礎(chǔ)，為構(gòu)建我國(guó)冬季項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員基因庫(kù)貢獻(xiàn)一份力量。

1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

我國(guó)優(yōu)秀U型槽運(yùn)動(dòng)員20人，10名男運(yùn)動(dòng)員，10名女運(yùn)動(dòng)員，包括獲得世錦賽冠軍的女運(yùn)動(dòng)員蔡雪桐以及優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員李爽、劉佳宇、史萬(wàn)成等，所有運(yùn)動(dòng)員均為國(guó)家一級(jí)運(yùn)動(dòng)員。

1.2 主要試劑

1N NaOH（4℃保存?zhèn)溆茫?N Hepes（4℃保存?zhèn)溆茫?.2M L-Giutamine（-20℃保存?zhèn)溆茫?，RP-MI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基（4℃保存?zhèn)溆茫琑PMI1640全培養(yǎng)基（4℃保存?zhèn)溆茫?5%FBS+5%DMSO凍存液，CyA的制備（-20℃保存?zhèn)溆茫?，血清的滅活，PHA的制備（-20℃保存?zhèn)溆茫?，含PHA的RP-MI1640全培養(yǎng)基（4℃保存?zhèn)溆茫珺958原代細(xì)胞株（中科院遺傳與發(fā)育所饋贈(zèng)）。

1.3 主要的儀器及設(shè)備

DL-CJ-2N高性能無(wú)菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)（中國(guó)哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司），TDL-40B水平離心機(jī)，IX-71倒置相差顯微鏡，AR1530/C電子天平，37.5℃5%CO，培養(yǎng)箱（德國(guó)Heraeus公司），電熱恒溫水浴鍋，Pall超純水儀，血球計(jì)數(shù)板，液氮貯存器，超低溫冰箱，電動(dòng)移液器，培養(yǎng)板。endprint

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 EBV的制備在40℃水浴鍋中解凍凍存的B958細(xì)胞。將解凍的B958細(xì)胞移至裝有6mlRPMI1640全培養(yǎng)基的25?培養(yǎng)瓶中，放在37.5℃、5%CO?，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基顏色變成褐黃色時(shí)，補(bǔ)充等量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到約3×105/瓶時(shí)，可進(jìn)行傳代。將細(xì)胞充分搖勻后，等量分別裝于2個(gè)25?培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，并向瓶?jī)?nèi)添加適量新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。凍存細(xì)胞前1天，向培養(yǎng)瓶中加入適量的新鮮培養(yǎng)基；用15ml離心管收集B958細(xì)胞，在常溫下離心（1500rpm）15min，去上清；用凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106-3×106細(xì)胞/ml，以1ml/管將細(xì)胞懸液分裝于凍存管中；將凍存管置于冰箱（4℃）30min，放人裝有異丙醇的程序降溫盒中于-80℃冰箱過(guò)夜，投入液氮罐內(nèi)長(zhǎng)期保存。將EBV溶液置于- 80℃冰箱lOmin，隨后用37℃水浴凍融，反復(fù)操作3次。1800rpm離心15min，用0.22μm濾膜過(guò)濾，分裝后用-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 用帶有肝素鈉的一次性抽血管，抽取運(yùn)動(dòng)員靜脈血4ml/人（血樣常溫靜止放置1～2天）。用加1%的雙抗RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，稀釋運(yùn)動(dòng)員血液，淋巴細(xì)胞分離液預(yù)熱（37.5℃水浴鍋），沿管壁漸漸加入4ml淋巴細(xì)胞分離液，3000rpm離心10min，使血液分層。將血清下層、紅細(xì)胞上層的成楊絮狀的白膜層，用巴氏管移人裝有6ml RPMI1640培養(yǎng)基的離心管中，lOOOrpm離心10min。棄上清液，加入10ml RP-MI1640培養(yǎng)基，1000rm離心10min，棄上清液。重復(fù)一次后，棄去上清液，將細(xì)胞敲勻待用；將2ml含PHA的全培養(yǎng)基、1.4ml EB病毒、0.4ml CyA以及收集到的白細(xì)胞做成混合液，共約4ml；將混合液加入到24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，將24孔培養(yǎng)板置于37.5℃，5%CO，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.4.3 永生化細(xì)胞系的培養(yǎng)及凍存永生化細(xì)胞從24孔板轉(zhuǎn)移到25m2的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)；3～4天進(jìn)行一次半量換液，每次半量換液就是一次細(xì)胞傳代。細(xì)胞的凍存，收集細(xì)胞懸液，1000rm離心lOmin，棄上清。在離心管中放人預(yù)定量的凍存液，將細(xì)胞輕輕打勻，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/ml～3×l06/ml，將凍存液分別放到凍存管中，每管1ml。將凍存管放在4℃冰箱30mim，然后于- 80℃的冰箱內(nèi)過(guò)夜后，放人液氮罐中保存。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

EBV轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)穩(wěn)定，成功建立U型槽運(yùn)動(dòng)員永生化細(xì)胞庫(kù)。傳代培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)速度要快于轉(zhuǎn)化后原代培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞，一般3～4天傳代。細(xì)胞呈形態(tài)個(gè)分散或者較小的細(xì)胞團(tuán)狀，細(xì)胞密度底，在顯微鏡下細(xì)胞折光性強(qiáng)。培養(yǎng)3天左右，單個(gè)淋巴細(xì)胞或較小的淋巴細(xì)胞團(tuán)能聚集生長(zhǎng)成較大的淋巴細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞密度達(dá)到70%～80%；肉眼能見(jiàn)到細(xì)沙粒狀物鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶底部，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，就會(huì)上浮，培養(yǎng)基的顏色從最初的粉色變?yōu)辄S色，PH值基本不變；在顯微鏡下能看到細(xì)胞團(tuán)有“長(zhǎng)根”“長(zhǎng)毛”“分刺叉”的現(xiàn)象，細(xì)胞團(tuán)發(fā)育良好。在傳代培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞形態(tài)一致，各代次淋巴細(xì)胞增殖速度穩(wěn)定，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)隨著傳代次數(shù)的增加而出現(xiàn)淋巴細(xì)胞衰老、死亡等現(xiàn)象。

當(dāng)淋巴細(xì)胞團(tuán)體積增大，細(xì)胞的密度達(dá)到1×106/ml的時(shí)進(jìn)行凍存（圖1A）；剛復(fù)蘇的淋巴細(xì)胞部分呈較小的團(tuán)狀，部分呈單個(gè)分散狀（圖1B）；培養(yǎng)1天后，淋巴細(xì)胞增殖迅速，細(xì)胞團(tuán)體積明顯增大（圖1C）；培養(yǎng)3天后，形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)量大量增加，體積較大，顯微鏡下能發(fā)現(xiàn)葡萄球串狀細(xì)胞團(tuán)，折光性強(qiáng)，密度可達(dá)70%～80%，可進(jìn)行傳代（圖1D）。

3 討論

在實(shí)踐中，EBV轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞使其永生化已有諸多應(yīng)用，如楊靜[6]、褚嘉祐[7]等。永生細(xì)胞株的建立能永久保存優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的基因，討論各運(yùn)動(dòng)項(xiàng)群的同異點(diǎn)，在各運(yùn)動(dòng)項(xiàng)群中探索抑制運(yùn)動(dòng)能力基因的分布、特征學(xué)意義、及建立與耐力、力量、速度性相關(guān)的項(xiàng)群體系細(xì)胞庫(kù)[8]、基因探針、基因興奮劑等眾多體育科研領(lǐng)域提供大量的細(xì)胞和遺傳物質(zhì)[9]，所以從發(fā)展的角度來(lái)看，建立優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的永生細(xì)胞庫(kù)必將得到越來(lái)越多的關(guān)注。

EBV來(lái)源于EBV感染的絨猴外周血淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的B958細(xì)胞系，B958細(xì)胞的培養(yǎng)是決定EBV質(zhì)量的關(guān)鍵[10]。因此，在培養(yǎng)B958細(xì)胞以及轉(zhuǎn)化后的永生細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)該特別注意。

3.1 細(xì)胞污染

為了保證細(xì)胞培養(yǎng)T作的順利進(jìn)行，第一個(gè)極為重要的環(huán)節(jié)就是防止污染[11]。因此，必須清洗與消毒培養(yǎng)用具，以及培養(yǎng)用的各種玻璃器皿（離心管、培養(yǎng)瓶、吸管等）都需要用清水浸泡，刷洗、酸浸和沖洗，并用6. 81kg（15LBS）高壓消毒20min等。清洗器皿必須干凈透明，無(wú)油跡，沒(méi)有任何殘留物質(zhì)，如某些化學(xué)物質(zhì)僅1/104mg，也可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。

在每次操作前都要用30W紫外線(xiàn)管燈消毒超凈臺(tái)20～30min，用0.2010新吉爾滅擦手以及相關(guān)器皿。最后當(dāng)B958細(xì)胞釋放出的EBV后，仍然需要對(duì)EBV進(jìn)行一次抽濾，濾器直徑選擇0.2μm，以達(dá)到除掉細(xì)菌和支原體，避免EBV的污染。

3.2 細(xì)胞換液

B958細(xì)胞和永生化細(xì)胞大多數(shù)會(huì)懸浮在培養(yǎng)液中，所以在每次換液過(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)移到無(wú)菌操作臺(tái)上一定要輕拿輕放，盡可能的使細(xì)胞沉淀在瓶底，減少在培養(yǎng)液中的懸浮。用移液管沿培養(yǎng)液液面吸出變黃的培養(yǎng)液；最后再將需要的新鮮培養(yǎng)液用移液管注入培養(yǎng)瓶中。細(xì)胞培養(yǎng)是系統(tǒng)化過(guò)程，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的情況來(lái)安排，一般每周對(duì)細(xì)胞進(jìn)行2次換液，保證充足的營(yíng)養(yǎng)。在凍存細(xì)胞的前一天，要進(jìn)行少量換液，保證凍存時(shí)有足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗。

3.3 溫度

B958細(xì)胞和永生化細(xì)胞培養(yǎng)的最適溫度是37.5℃，溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響細(xì)胞的代謝與生長(zhǎng)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞的死亡[12]。雖然細(xì)胞在5%CO2、37.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在由于在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要進(jìn)行培養(yǎng)箱外進(jìn)行觀察、傳代、凍存等操作，因此要求培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差不能過(guò)大，細(xì)胞離開(kāi)培養(yǎng)箱時(shí)間不能過(guò)久，如無(wú)菌操作臺(tái)，倒置顯微鏡等常用儀器和培養(yǎng)箱的距離盡量接近，可減少細(xì)胞污染的幾率。endprint

3.4 血清的使用

血清是B958細(xì)胞的培養(yǎng)的重要因素之一。在使用血清前先用56℃熱滅活30min，消除皿清中原有活性因子。一般血清過(guò)多對(duì)其生長(zhǎng)沒(méi)有好處，因此用低濃度的血清培養(yǎng)液，盡量使培養(yǎng)條件標(biāo)準(zhǔn)化，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性提高，降低成本，減輕血清有害成分的影響。

在EBV對(duì)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行永生化時(shí)，須用高質(zhì)量、高營(yíng)養(yǎng)的血清為培養(yǎng)細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，在多次預(yù)實(shí)驗(yàn)后，GIBCO公司的美國(guó)血緣的特級(jí)胎牛血清符合要求。在成功轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞后，類(lèi)淋巴母細(xì)胞數(shù)量培養(yǎng)到可以轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞降低對(duì)血清的依賴(lài)，考慮到實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)，采用BIOCHROMAG公司生產(chǎn)的德國(guó)血緣優(yōu)級(jí)血清，培養(yǎng)效果不變。

3.5 pH值

培養(yǎng)液的pH值對(duì)B958細(xì)胞和EBV轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞也是非常重要的[13]，最佳生長(zhǎng)環(huán)境是pH=7.0。在實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞換液、傳代、凍存等過(guò)程中培養(yǎng)瓶會(huì)被打開(kāi)，放出瓶?jī)?nèi)的C02，培養(yǎng)液pH值升高，一段時(shí)間后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞堿中毒。因此，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，操作速度要快，操作完畢后最快的放人培養(yǎng)箱中，稍微擰開(kāi)瓶蓋，繼續(xù)培養(yǎng)。我們用含有肝素鈉的采血管采血.也是因?yàn)楦嗡剽c的pH值與人類(lèi)血液的pH值相近，不會(huì)影響血液中B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。

3.6 凍存

建立永生化基因庫(kù)的重要環(huán)節(jié)之一就是細(xì)胞凍存。細(xì)胞凍存的最佳溫度就是液氮溫度（-196℃）。因?yàn)樵? 196℃時(shí)，細(xì)胞生命活動(dòng)幾乎停止，而復(fù)蘇后細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能完好。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106/ml的時(shí)便可凍存，永生細(xì)胞株凍存與其它細(xì)胞相同，盡量在代次小時(shí)進(jìn)行凍存。B958細(xì)胞與永生化細(xì)胞的凍存要慢凍速溶，先將細(xì)胞在一80 ℃冰箱中冷凍，然后移到液氮中長(zhǎng)時(shí)間保存。

在凍存過(guò)程中，為減少二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒性，使其較快的滲入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的濃度差，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡起到保護(hù)作用[14]。應(yīng)先將凍存管置于4℃冰箱30min，然后放人裝有異丙醇的程序降溫盒中于-80℃冰箱過(guò)夜，投入液氮罐內(nèi)長(zhǎng)期保存。

3.7 CyA的使用

在轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)CyA用量很小，但作用很大，它能夠有效地抑制T淋巴細(xì)胞自身免疫攻擊，安全轉(zhuǎn)化B細(xì)胞，同時(shí)配合PHA的使用能更好的促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)，切記不能過(guò)量使用，否則會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害[15]。在試驗(yàn)使用中，配置CyA的濃度為200μg/ml，且其物理性質(zhì)呈油狀，在用槍頭吸取CyA母液時(shí)常常會(huì)附著在槍頭一部分，如果配置工作液少時(shí)就會(huì)出現(xiàn)CyA濃度過(guò)高的現(xiàn)象，影響B(tài)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。所以要盡可能避免槍頭附著試劑，并盡可能多的制備其工作液。

3.8 廢液的無(wú)害化處理

在從永生化細(xì)胞培養(yǎng)液中移出的廢液，以及接觸過(guò)永生化細(xì)胞、B958細(xì)胞和EBV病毒的儀器設(shè)備，都要經(jīng)過(guò)1%濃度的PAA浸泡24h，避免留下有害物質(zhì)[16]。

4 結(jié)論與建議

本研究成功的提取和保存了我國(guó)優(yōu)秀的U型槽運(yùn)動(dòng)員基因組DNA，完成了B淋巴細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、傳代的技術(shù)體系，永久保存了我國(guó)優(yōu)秀U型槽運(yùn)動(dòng)員的遺傳資源，為優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員基因相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)材料，為日后其它雪上項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)基因的保存等提供理論技術(shù)基礎(chǔ)。對(duì)運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)基因的研究將是未來(lái)發(fā)展的一個(gè)趨勢(shì)，建議盡早的建立和保存優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)基因，進(jìn)一步補(bǔ)充和完善我國(guó)冬季項(xiàng)目?jī)?yōu)秀運(yùn)動(dòng)員的永生細(xì)胞庫(kù)，為冬季項(xiàng)目未來(lái)的發(fā)展貢獻(xiàn)力量。

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